一、骨髓基质细胞诱导为神经原及胶质细胞(论文文献综述)
田锦勇[1](2012)在《帕金森病PARK16、PARK17、PARK18和BST1基因多态分析及多基因关联分析》文中研究指明背景:帕金森病(Parkinson’s Disease, PD)是一种常见的神经系统退行性疾病,发病率仅次于阿尔兹海默氏病。临床表现主要为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态异常,病理特征主要是是黑质多巴胺(Dopamine, DA)能神经元变性缺失和路易小体(Lewy body, LB)的形成。目前PD的病因和发病机理仍没有完全清楚。近年来随着PD相关易感基因的发现,遗传因素作为一个重要的发病因素在PD的发病机制中的作用越来越受到重视。目前认为PD是遗传和环境因素的相互作用导致。流行病学调查发现,只有约5-10%左右的PD患者有家族史,绝大部分的PD患者为散发患者,且单基因发病形式非常罕见。最近的研究表明,很多复杂疾病如高血压、结缔组织病、癌症等的研究发现基因或者多态位点的相互作用可以导致疾病患病风险增加。很多研究者还提出PD可能具有多基因的发病形式,基因之间存在相互作用。国内外的病例报告提示在各个种族人群中散发性PD基因突变的分布情况,并具有地区和种族分布的统计学意义。中国人群的基因突变的携带者也有类似报告,但是结果并不一致,显示了基因突变的遗传异质性。最近的GWAS已经证实MAPT、LRRK2、SNCA、PARK17、PARK18及BST1基因的一些位点改变已经普遍被认为是散发性PD的危险因素;PARK16通过是在亚洲的日本亚群中证实为PD的危险因素;GBA基因则是在几乎所有人群中都证实为PD的危险因素。较近的研究发现一些基因的位点之间存在相互作用。为了明确PD易感因素在中国汉族人群中单独作用、协同作用及累加作用,我们对这个人群8个基因16个多态位点进行了检测并进行了多基因关联分析。目的:通过对中国汉族人群散发PD患者及对照组进行PARK16基因的rs823156位点、rs11240572位点,PARK17基因的rs11248051位点、rs1564282位点,PARK18基因(HLA基因)的rs3129882位点、rs3117098位点,BST1基因的rs4698412位点、rs11931532位点进行基因型分析,结合前期研究中的GBA基因的L444P位点、MAPT基因的rs242562位点、rs2435207位点,LRRK2基因的G2385R位点、R1628P位点,SNCA基因的Rep1位点、rs11931074位点、rs356156位点的基因型分析结果,对位点间相互作用进行一个系统的综合评估,致病基因位点之间的做单独作用、协同作用和累积作用的的分析,探讨中国汉族人群PD的多基因关联。方法:1.采用PCR结合DNA直接测序法,对1019例散发PD及1030例正常对照进行PARK16、PARK17、PARK18(HLA-DR)及BSTl进行基因型检测并进行多态分析;2.应用SPSS13.0和Excel2003统计软件进行相关数据处理及统计分析,对有关联的位点做单独作用、协同作用和累积作用的分析,探讨PD的多基因关联。结果:1.PARK17基因的rsl564282位点、BST1基因的rs4698412位点的等位基因频率在年龄和性别校正后病例组和对照组具有显着性差异(P<0.05)。2.PARK16基因的rs823156位点和rs11240572位点.PARK17基因的rs11248051位点、PARK18基因的rs3129882和rs3117098位点、BST1基因的rs11931532位点的等位基因频率在年龄和性别校正后病例组和对照组没有显着性差异(P>0.05)。3.结合前期研究中GBA基因的L444P位点、LRRK2基因的G2385R位点、SNCA基因的Rep1位点、rs11931074位点的分析结果,以上述为基础建立6个位点之间的多因素回归分析模型,对多态位点进行相加、相乘交互作用分析。SNCA基因的Rep1和rs11931074位点、SNCA基因的Rep1和LRRK2基因的G2385R位点、SNCA基因的Rep1和PARK17基因的rs1564282位点、SNCA基因的Rep1和BST1基因的rs4698412位点、SNCA基因的rs11931074和LRRK2基因的G2385R位点、SNCA基因的rs11931074和PARK17基因的rs1564282位点、SNCA基因的rs11931074和BST1基因的rs4698412位点、LRRK2基因的G2385RPARK17基因的rs1564282位点、LRRK2基因的G2385R和BST1基因的rs4698412位点、PARK17基因的rsl564282和BST1基因的rs4698412位点交互作用后,其发病风险较其单独存在时增高。4.GBA基因的L444P位点与其它位点不存在协同作用。5.对16个位点之间进行累积作用分析,结果显示分别携带有1个位点、2个位点、3个位点和4个位点时OR值分别为1.457、1.750、3.494和23.259,提示随着携带位点增多,PD易感性逐渐增高。结论:1,PARK17基因的rs1564282位点和BST1基因的rs4698412位点改变可以增加PD的发病风险;2,LRRK2基因的G2385R位点、SNCA基因的Repl位点、rs11931074位点、PARK17基因的rs1564282位点、BST1基因的rs4698412位点具有单独及协同作用。3,GBA基因的L444P位点与其他基因位点不存在协同作用,可能是独立危险因素。4,多个位点之间具有累加作用,携带位点越多,发病风险越大。
刘阳[2](2011)在《骨髓基质干细胞的生物学特性及对胶质瘤的趋向效应的实验研究》文中研究表明神经系统肿瘤疾病中胶质瘤的发病率最高,约占40~50%。尽管临床的综合治疗方案能产生一些疗效,但胶质瘤的预后仍然很差。基因治疗的出现为我们展示了良好的前景。但由于病毒载体自身毒性、目的基因表达周期短、靶向性问题、免疫源性或者不能选择到合适的追踪浸润瘤细胞载体等原因,在I期和II期临床试验都未能取得预期的疗效。骨髓基质干细胞作为一种新型的载体出现引起了科学工作者的关注,它培养方法简单成熟,具有多向分化潜能和定向迁移能力,而且外源性基因表达稳定,来源安全可靠,没有伦理学困扰,因此能够选作为种子细胞进行靶向治疗。骨髓基质干细胞的分离培养鉴定分化等生物学特性研究是各项干细胞实验的基础,也是研究的热点和难点。在体内干细胞向神经元方向分化的比例相当低。这就需要给予合适的诱导策略增加其神经方向的分化率。碱性成纤维细胞生长因子的诱导血管生成,促进有丝分裂等生物学作用较显着。体内研究中由于外源性因子的导入困难,而应激条件下被激活的内源性碱性成纤维细胞生长因子表达有限,所以骨髓基质干细胞分化为神经细胞修复整合受伤的神经网络的功能有限,因此将相关基因导入骨髓基质干细胞使其能够持续稳定的表达有助于神经系统损伤的治疗。骨髓基质干细胞能够选择性趋向体内各损伤部位,他的这种归巢性被认为是其发挥肿瘤治疗作用的重要基础。而且骨髓基质干细胞能够通过多种机制治疗脑肿瘤。骨髓基质干细胞体外所处环境与体内微环境不同,目前在体外模拟体内环境条件下干细胞对胶质瘤细胞趋向效应的研究较少。考虑到未来临床使用的可操作性问题,应该选择经何种途径移植干细胞治疗胶质瘤才能达到最大效果。在脑胶质瘤的发生发展的病理过程中常有一些相关特异性因子参与,这些因子的表达变化可以作为胶质瘤治疗效果的评估指标。葡萄糖转运蛋白-3被认为是脑恶性肿瘤糖代谢的第一个限速因子,缺氧诱导因子-1α是恶性肿瘤参与肿瘤血管生成、肿瘤细胞代谢、凋亡的重要核转录因子。目前对这几种因子在中枢神经系统肿瘤中的共同表达研究甚少。基于此,我们进行以下研究。第一部分骨髓间充质干细胞的生物学特性研究目的:研究骨髓间充质干细胞的生物学特性。方法:对BMSCs进行体外分离培养诱导分化,并免疫组化,流式细胞术,免疫荧光鉴定。构建bFGF过表达载体并测序,慢病毒包装后转染BMSCs,分别在体外体内通过形态学,免疫组化,免疫荧光,western blot,PCR,观察bFGF基因修饰后的骨髓基质干细胞增殖、分化及迁移效应的情况。结果:BMSCs分离接种24h后,可见细胞贴壁,3d以后,进入细胞对数生长期。1W左右,可观察到细胞逐渐增多并形成突起相互联系,生长速度减慢。培养12d后,细胞达到融合成片铺满瓶底。实验组细胞数量与未经诱导组相比有显着统计学差异(P<0.05);免疫细胞化学方法检测发现CD44,CD29,CD90,CD105染色的细胞胞浆呈现棕黄色。CD44阳性细胞率为92.0±3.2%,CD29阳性细胞率为94.6±4.8%,而CD45,CD11b,CD34染色的细胞胞内几乎没有表达;流式细胞术检测细胞表面标记可见CD90为99.64%,CD34为1.23%,CD44为99.54%,CD11b为0.43%;BMSCs经诱导分化3d后表达Nestin抗原,7d后细胞表现出典型的神经元样改变,检测到来源于BMSCS的部分细胞可分别表达NeuN和GFAP。NSE、NeuN、GFAP免疫反应阳性细胞的比例在培养的早期随时间延长而逐渐增多。但到1W后,比例逐渐降低。经诱导的组别的NeuN阳性细胞明显多于对照组(P<0.05)。载体构建和病毒包装实验中,筛选酶切后得到pUC57-SL08重组质粒酶切后的SL08片段。将SL08片段克隆入pLenti6/V5-D-TOPO得到pLenti6-SL08重组质粒,对重组质粒进行测序,鉴定成功构建bFGF的过表达载体,慢病毒滴度定量测得为3×107v.p./ml。pLenti6-SL08转染大鼠骨髓基质干细胞48 h后,通过Western blot与RT-PCR检结果发现各组均有bFGF基因的表达,bFGF基因修饰的BMSCs组中bFGF表达效果最明显。体外培养实验中,基因转染后BMSCs各组细胞24小时后细胞数量开始增加,48至72小时后,细胞数量均显着增多,pLenti6-SL08组细胞数量多于其他两组,但各组间数量无显着差异(P>0.05),7天左右均可见有明显神经元样改变细胞出现,此时三组细胞数量增长均显着放缓,但是pLenti6-SL08组细胞数量显着多于其他两组(P<0.05),其他两组间细胞数无明显差异(P>0.05)。流式细胞术结果显示,pLenti6-SL08组CD90 96.44%,CD34 0.61%,BMSCs-2组CD44 99.95%, CD11b0.73%。细胞体外培养到一周后,3组细胞均见大部分细胞出现明显神经元样改变。pLenti6-SL08组神经元样改变细胞数量与其他两组比有显着差异(P<0.05)。pLenti6-SL08载体转染大鼠骨髓基质干细胞48 h后,通过Western blot与RT-PCR检测bFGF表达,证明经bFGF修饰的骨髓基质干细胞组的bFGF基因表达明显强于其他两组,转染结果可靠。培养7天后免疫细胞组织化学方法发现三组细胞中均可见Nestin, NeuN, GFAP的表达。pLenti6-SL08组细胞的Nestin, NeuN表达显着多于其他两组(P<0.05)。Western blot检测pLenti6-SL08组Nestin, NeuN均显着高于其他两组(P<0.05),而其他两组间Nestin, NeuN的表达无明显差异(P>0.05)。脑创伤体内模型中,免疫组织化学结果显示:各时间点损伤侧BrdU阳性细胞多于对侧(P <0.001),而且经bFGF修饰BMSCs组在各时间点阳性细胞均多于未经修饰组(P <0.001);1W后所检出的BrdU阳性细胞开始减少,但在损伤同侧部位bFGF修饰BMSCs组降低幅度要小的多(P =0.08)。Western blot检测各组脑组织不同时间点bFGF的表达情况发现实验组,对照组不同时间点bFGF表达有显着差异(P<0.05)。实验组bFGF7d时明显增高(P<0.05),14d时虽下降但无统计差异(P =0.12);对照组bFGF7d时明显增高(P<0.05),14d时显着下降(P<0.05) ;各时间点bFGF在实验组表达强于对照组(P<0.05)。免疫荧光双标实验中发现两组干细胞移植到脑内后均可以表达干细胞标记的BrdU,并且同样能够分化为神经元和神经胶质细胞,但分化为神经胶质细胞的比例远大于神经元。同侧脑室、皮质区域可见BMSCs组和bFGF修饰BMSCs组均有大量BMSCs分布,两组间有显着差异(P<0.05);在同侧脑室、皮质区域可见bFGF修饰BMSCs组干细胞分化为神经元显着多于BMSCs组(P<0.05)。结论:骨髓基质干细胞体外分离培养可以得到高纯度的骨髓基质干细胞,bFGF修饰的骨髓基质干细胞在体内外均能稳定持续地增殖和神经细胞方向的分化,而且能更显着地向脑外伤后的损伤部位迁移。第二部分骨髓基质干细胞对胶质瘤细胞的趋向效应目的:研究骨髓基质干细胞在体外和体内向胶质瘤细胞的趋向及对胶质瘤细胞的抑制效应。方法:通过免疫组化,Western blot评估GLUT-3、HIF-1α是否可作为评估胶质瘤生物学行为的指标之一。然后模拟体内环境,采用Transwell、MTT、平板克隆等方法观察预处理的BMSCs对胶质瘤细胞的趋向、抑制等方面效应,然后构建大鼠C6胶质瘤模型,经不同途径移植BMSCs,通过行为学,形态学,组织病理学,分子生物学等方法观察BMSCs对胶质瘤细胞的趋向、抑制效应。结果:免疫组化方法检测发现GLUT-3、HIF-1α其表达强度随胶质瘤的病理分级增加而升高(P<0.001)。western blot检测两者的表达与免疫组化结果相似。体外实验部分:我们观察到C6细胞生长迅速,传代后细胞增殖速度依然很快。在Transwell共培养体系中预处理和未经预处理的BMSCs分别与C6胶质瘤细胞共培养,HE染色方法发现两组小室内膜上均有大量细胞通过,实验组通过小孔的细胞数量多于对照组(P<0.001)。MTT结果显示用含有普通骨髓基质干细胞上清液培养的C6细胞生长增殖速度明显高于预诱导骨髓基质干细胞上清液培养的C6细胞组(P<0.05)。平板克隆实验结果显示,对照组上清液培养的C6细胞形成的克隆数多于实验组(P<0.05)。这两组用Western blot检测发现预处理骨髓基质干细胞培养液组GLUT-3和HIF1α表达明显被抑制(P<0.05)。体内实验:发现对照组最早出现颅内压增高症状症状,且很快加重,BMSC-1组最晚出现以上症状。对照组第3天时即开始出现死亡病例,BMSC-1组存活时间最长为45天,各组生存率有显着差异(P<0.05)。HE发现胶质瘤细胞十分密集,向正常脑组织浸润,正常组织区别明显,细胞小核大,多见核分裂相,有明显的癌巢。对照组肿瘤体积最大,经脑室组最小(P<0.05)。BrdU免疫组化染色结果显示:骨髓基质干细胞在通过侧脑室移植入鼠脑胶质瘤模型后,干细胞在脑室周围,血管和海马等处分布较明显,主要集中在胶质瘤的边缘部位或与临近组织处交接范围。肿瘤同侧半球中的表达高于肿瘤内部表达(P <0.001)。同侧半球分布明显多于对侧半球分布(P <0.001)。经尾静脉途径移植组发现BrdU阳性细胞主要集中在肿瘤所在半球的血管和肿瘤周边,在肿瘤内、脑室附近及对侧半球极少,肿瘤同侧半球中的表达多于肿瘤内部表达(P <0.001),同侧半球分布明显多于对侧半球分布(P <0.001)。两组相比较,经侧脑室移植途径肿瘤内部BrdU阳性细胞多于尾静脉途径移植组(P <0.001)在肿瘤同侧半球的阳性细胞也明显多于尾静脉途径移植组(P <0.001),对侧半球阳性细胞也多于尾静脉组(P <0.001)。Western blot检测显示在BMSCs-1、BMSCs-2组及对照组中GLUT-3,HIF1α的表达分别成递增趋势(P<0.05)。RT-PCR检测与Western blot相似, GLUT-3和HIF1α的表达也均成递增趋势(P<0.05)。结论:初步证实了GLUT-3和HIF1α是参与胶质瘤发病机制的重要因子,在体外经预诱导处理的骨髓间充质干细胞对胶质瘤细胞的趋向性更强,可抑制脑胶质瘤细胞的增殖,降低GLUT-3和HIF1α的表达,体内经脑室移植途径干细胞能更多地向胶质瘤迁移,能明显抑制瘤体增大,降低GLUT-3和HIF1α的表达和改善预后。
李鹏斌,郑启新[3](2009)在《骨髓基质干细胞向有功能性神经细胞诱导分化的研究进展》文中提出骨髓基质干细胞(BMSCs)是成体干细胞的一种,广泛存在于人体的间充质组织中,具有较强的自我复制能力和多向分化潜能;单独或联合使用某些诱导剂和细胞基因方面的干预,可使其在体外培养条件下向某一谱系细胞分化且不改变多向分化和增殖能力;同时具有独特的免疫学特征,是理想的组织工程种子细胞。近几年发现其在一定的条件下能够诱导分化为神经细胞,并具有神经细胞的结构和功能,将为神经系统疾病的治疗提供新的思路。着重对骨髓基质干细胞向神经细胞诱导分化及功能方面的研究进行综述。
聂海祺,李剑平[4](2009)在《成体骨髓细胞向神经细胞转化的特征》文中研究表明体外诱导骨髓基质干细胞分化为神经细胞已经成为神经科学研究的热点之一。目前在某些实验条件下,组织特异性的干细胞在组织和器官中能衍生为各种细胞谱系。已经有报道称骨髓基质细胞能衍生为骨骼细胞、胃贲门细胞、椭圆形肝细胞、神经胶质细胞和神经元样细胞。因此,通过资料研究分析出生后的骨髓细胞被诱导增殖进而分化为神经胶质细胞和神经元细胞,对其转化的特征作出探讨。
杨海云[5](2009)在《脊髓骨髓间充质干细胞促进损伤脊髓修复和神经干细胞的分化》文中研究说明目的观察骨髓间充质干细胞(BMSC)及其同时应用免疫抑制药物他克莫司(FK506)对脊髓损伤后神经功能恢复、对星形胶质细胞增生、对空洞形成以及损伤区神经细胞凋亡的影响,探讨BMSC促进脊髓功能恢复的机制;探讨BMSC对神经干细胞分化的影响。方法实验一:提取BMSC;制作大鼠脊髓损伤模型;将体外培养的骨髓间充质干细胞注入脊髓损伤区域,同时联合腹腔注射FK506,于伤后1w、2w、4w、6w、8w采用BBB评分及斜板实验观察神经恢复情况,并行TUNEL染色观察各组神经细胞凋亡的情况。8周后取材行GFAP免疫组化观察,并测量各组脊髓空洞的大小。实验二:提取神经干细胞;制作大鼠脊髓损伤模型;将体外培养的骨髓间充质干细胞注入脊髓损伤区域,在三天及五周后采集脑脊液;将收集的脑脊液分别与神经干细胞球和神经干细胞与雪旺细胞混合液共同培养,于培养72小时后在倒置显微镜下观察细胞形态、黏附力及代谢状况并随机测量各实验组神经细胞10个轴突长度,用免疫组化进行神经元染色观察神经干细胞的分化情况。结果实验一:1、单纯BMSC移植组与BMSC联合FK506治疗组两组大鼠后肢运动功能均有较明显的恢复,2周开始出现后肢活动,逐步恢复排尿,伤后4周变化最为明显,伤后8周可见协调运动,BMSC联合FK506治疗组恢复情况最快,BBB最高评分可达14分,统计学上有显着差异(P<0.05);2、单纯BMSC移植组与BMSC联合FK506治疗组与对照组相比在不同时间段内神经细胞凋亡数都减少,联合治疗组凋亡细胞数减少最为明显(P<0.05),TUNEL阳性细胞数3天达到高峰,7天后开始减少;3、应用BMSCs治疗后大鼠脊髓中反应性星型胶质细胞数量及GAFP染色面积均减小,而BMSCs联合FK506更加明显减轻反应性神经胶质增生程度以及减小GFAP染色面积(P<0.05);4、损伤8周后两治疗组形成的脊髓空洞明显减小,BMSC联合FK506治疗组减小的更为明显(P<0.05)。实验二:1、在脑脊液培养神经干细胞球实验中,BMSC移植3天后采集脑脊液组的神经干细胞球贴于培养板底部,并有细胞突生长。BMSC移植5周后采集脑脊液组显示仅有少量的神经干细胞球贴于培养板底部,细胞突短小少见。2、在脑脊液与神经干细胞和雪旺细胞共同培养的实验中发现BMSC移植组的神经干细胞球贴壁,细胞分化明显,细胞突细长,明显多于其它组;雪旺细胞和神经干细胞相互具有亲和现象,细胞突起沿雪旺细胞呈放射状伸展,形成类似“海星”状排列。结论1、移植的大鼠骨髓间质干细胞在脊髓损伤部位能长期存活,并能向邻近脊髓内迁徙。骨髓间质干细胞移植对于后肢功能的恢复有促进作用,减少星形胶质细胞的增生,缩小空洞形成体积,抑制神经细胞凋亡。联合应用FK506有协同效果。脊髓损伤后的恢复的微环境需要多个因素的共同作用,FK506是其中的一个有利因素。2、BMSC分泌的各种因子能够促进神经干细胞的分化,并能也能协同雪旺细胞促进神经干细胞的分化。
胡向阳[6](2008)在《丹参、藜芦对大鼠MSCs分化为神经元样细胞及SMNmRNA表达的影响》文中研究说明目的:体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),研究MSCs生物学特性。观察丹参、藜芦水煎液诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用,研究丹参、藜芦水煎液对分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的影响;并采用血清药理学方法,研究丹参、藜芦含药血清诱导MSCs分化为神经元样细胞的作用。探索提高MSCs向神经元样细胞分化和上调分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的干预因素,为进行神经元样细胞移植治疗脊髓。性肌萎缩症提供基础。方法:1.采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs;通过形态学观察、绘制生长曲线、流式细胞仪进行MSCs表面抗原鉴定和检测MSCs生长周期来鉴定MSCs;建立体外培养的稳定MSCs细胞株系。2.观察丹参、藜芦水煎液诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用,免疫组化法检测神经元样细胞Nestin、NSE、GFAP,摸索β-巯基乙醇、丹参水煎液、藜芦水煎液、丹参+藜芦水煎液的最佳诱导浓度,观察各组最佳浓度诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用。3.观察丹参、藜芦水煎液对分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的影响,FQ-PCR法检测空白组、β-巯基乙醇诱导组、丹参水煎液组、藜芦丹参水煎液组、丹参+藜芦水煎液组对分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的影响。4.观察丹参、藜芦含药血清诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用,免疫组化法检测神经元样细胞Nestin、NSE、GFAP,摸索丹参含药血清、藜芦含药血清、丹参+藜芦含药血清的最佳诱导浓度,观察各组最佳浓度诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用。结果:1.全骨髓贴壁法分离培养的MSCs具有均质性好、增殖活力强、传代生长快的特点。本实验培养的MSCs经流式细胞仪检测,表达整合素家族成员的CD29和粘附分子CD44,不表达泛白细胞标志CD45;MSCs处于G0-G1期的细胞为87.63%,G2-M期的细胞为3.57%,S期的细胞为8.80%:生长曲线均呈S形,接种1-3 d细胞的OD值变化不大,到第3 d细胞数目明显增加,第8 d到达顶点,之后减少;证实已成功建立稳定的MSCs株系。2.β-巯基乙醇、丹参水煎液、藜芦水煎液和丹参+藜芦水煎液最佳诱导MSCs向神经元样细胞分化浓度分别是β-巯基乙醇1mmol/L的无血清L-DMEM培养液、丹参水煎液120μl/ml10%胎牛血清L-DMEM培养液、藜芦水煎液140μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液和丹参+藜芦80μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液。空白组Nestin、NSE和GFAP表达均为阴性。丹参+藜芦水煎液组Ncstin阳性细胞率高于β-巯基乙醇组,P<0.01;丹参+藜芦水煎液组NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组,P<0.05;丹参+藜芦水煎液组Nestin、NSE阳性细胞率分别高于丹参水煎液和藜芦水煎液,P<0.05;各实验组GFAP表达均为阴性。3.β-巯基乙醇组、丹参水煎液组、藜芦水煎液组、丹参+藜芦水煎液组分化后神经元样细胞SMNmRNA表达丰度值均高于空白组,P<0.01;丹参+藜芦水煎液组SMNmRNA表达丰度值高于β-巯基乙醇组,P<0.05:丹参+藜芦水煎液组SMNmRNA表达丰度值高于丹参水煎液组、藜芦水煎液组,P<0.01;β-巯基乙醇组SMNmRNA表达丰度值高于丹参水煎液组、藜芦水煎液组,P<0.05。4.丹参含药血清组、藜芦含药血清和丹参+藜芦含药血清最佳诱导MSCs向神经元样细胞分化浓度分别是丹参含药血清20μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液、藜芦含药血清25μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液和丹参+藜芦含药血清15μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液。空白组Ncstin、NSE和GFAP表达均为阴性。丹参+藜芦含药血清诱导组Nestin阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组,P<0.05;丹参+藜芦诱导组NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组,P<0.01;各实验组GFAP表达均为阴性。结论:1.运用全骨髓贴壁法,可以建立体外稳定培养的MSCs株系。2.丹参水煎液、丹参+藜芦水煎液可以诱导体外培养的MSCs向神经元样细胞分化,藜芦水煎液诱导MSCs向神经元样细胞分化作用不明显,丹参+藜芦水煎液诱导MSCs向神经元.样细胞分化作用高于其它诱导组,MSCs没有诱导因素的作用不会向神经元样细胞分化。3.丹参、藜芦水煎液可以促进分化后神经元样细胞表达SMNmRNA,丹参+藜芦水煎液对神经元样细胞SMNmRNA表达作用强于丹参水煎液或藜芦水煎液,分化后的神经元样细胞在丹参+藜芦水煎液干预下有向运动神经元细胞进一步分化的趋向。4.丹参+藜芦含药血清组促MSCs向神经元样细胞分化作用弱于丹参+藜芦水煎液组,原因可能是丹参+藜芦组水煎液经过大鼠机体代谢,含药血清中促MSCs向神经元样细胞分化作用的有效组份(群)降低所致。
陈长青[7](2008)在《脂肪源性干细胞移植治疗缺血性脑损伤的实验研究》文中研究指明背景神经干细胞的发现,更新了以往认为神经元不能再生的传统观点,使人们对神经系统的结构和功能有了一个全新的认识,并且也为临床对脑和脊髓外伤、以及其他神经系统疾患提供了一个新的有效治疗途径,但因其不易获得且存在伦理学问题,实用性受到很大限制。脂肪来源的多能干细胞(Adipose-derived stem cells,简称ADSCs)具有来源丰富、采集方便、体外扩增快和自体移植等特点,预示了此种来源的干细胞在临床细胞移植治疗上将具有很大的优势。有研究报道,脂肪干细胞可在体外诱导分化为神经元样细胞,移植入缺血脑组织后可通过分化为神经元等细胞和分泌神经保护性生物因子等途径而达到修复作用。目的研究ADSCs在一定的培养条件下可被诱导成神经干细胞并进一步分化成神经元样细胞,并表达神经干细胞特异性标记物Nestin和神经元特异性标记物NSE。探索使用超顺磁性纳米氧化铁颗粒(SPIO)和多聚左旋赖氨酸(PLL)复合物对脂肪干细胞进行磁性标记和MRI用于示踪磁性标记ADSCs的可行性,探索脑缺血损伤后脂肪干细胞移植治疗脑组织损伤的作用机制。方法Sprague-Dawley大鼠(鼠龄2~4个月)过量麻醉处死,无菌条件下取出腹股沟脂肪组织,使用胶原酶Ⅰ消化,分离、培养得到ADSCs,取培养的第三代ADSCs使用神经干细胞培养基诱导分化,检测诱导后的ADSCs表达神经干细胞标志物和ADSCs分化后表达神经元特异性标志物的情况;同样取第三代ADSCs在体外使用SPIO-PLL复合物行磁性标记,台盼兰拒染试验判断磁性标记对ADSCs的活性有无影响,普鲁士蓝染色和体外MRI判断ADSCs磁性标记的有效性;36只缺血造模成功的Sprague-Dawley大鼠分成缺血对照组、PBS治疗组和磁性标记ADSCs治疗组,每组12只。造模后3天,采用立体定向仪进行细胞移植,移植位点:皮质(前囟后3 mm,旁开3mm,深4 mm),垂直距离以颅骨外板为标准。SPIO标记组大鼠在ADSCs脑内移植后当天和第3周进行磁共振动态观察。采用改良神经损害严重程度评分(改良NSS评分)对ADSCs移植后各组动物进行神经系统行为和运动功能评估。移植后21天处死所有大鼠取下脑组织固定行神经元特异性稀醇化酶(NSE)、CD31免疫组化染色和普鲁士蓝染色。采用SPSS 10.0统计软件,所有数据均以均数±标准差表示,采用t检验,以P<0.05表示差异具有显着性。结果1)由脂肪组织来源的多能干细胞可在体外培养并稳定增殖,ADSCs经免疫荧光染色,绝大多数细胞呈CD44阳性。2)第3代的ADSCs在诱导培养基作用下可被诱导为神经干细胞样生长的细胞团,神经干细胞标记物nestin免疫组化染色阳性,经诱导分化后表达神经元标记物NSE。3)传代至第3代的ADSCs体外行SPIO+PLL复合物标记后进行Prussian Blue染色,几乎所有的磁性标记ADSCs胞质内均可见多少不等的蓝染铁颗粒,标记率为100%,而未经PLL修饰的SPIO标记ADSCs,仅少数细胞胞质内见蓝染的铁颗粒;各时相点磁标记细胞的Typan Blue拒染率与未标记细胞间无统计学意义(P>0.05)。体外MR成像时,SPIO-PLL标记的ADSCs于T2WI上可使MR信号明显减低。4)将SPIO-PLL标记和未标记的ADSCs移植到正常的SD大鼠双侧大脑实质中,1周后使用1.5T MR扫描仪检查,见磁性标记ADSCs移植处在T2WI和T2*WI序列均呈低信号改变,其中以T2*WI序列最为敏感,而未标记ADSCs移植处未见低信号改变。5)在ADSCs脑内移植后进行磁共振动态观察发现,损伤对侧脑内移植的磁性标记ADSCs可通过胼胝体迁移至缺血性脑损伤灶周围。脑组织NSE、CD31免疫组化染色显示部分ADSCs阳性,与MR示踪成像上所显示的低信号区相对应部脑组织普鲁士蓝染色可见染色阳性的移植细胞。6)NSS评分显示ADSCs移植组大鼠神经系统行为和运动功能改善较对照组大鼠明显(P<0.05)。结论ADSCs可在体外一定的诱导条件下诱导成nestin表达阳性的神经干细胞样生长的细胞团,且可进一步分化成神经元样细胞。SPIO-PLL复合物可安全有效地标记ADSCs,MR成像技术可应用于示踪观察移植入受体脑内的ADSCs,ADSCs可通过直接替代分化为神经元或参与缺血后局部新生血管形成过程发挥作用。
高小青,杜杰,杨朝鲜,吴岩,邓莉,袁琼兰[8](2008)在《大鼠骨髓基质细胞体外培养向神经干细胞的诱导分化》文中进行了进一步梳理目的:已证实骨髓基质细胞可分化为中胚层组织细胞,实验予进一步探讨体外分离培养的骨髓基质细胞向神经干细胞分化的可能性,以及是否能继续定向分化为神经细胞及神经胶质细胞,为神经系统疾病细胞移植治疗提供种子细胞。方法:实验于2007-02/09在泸州医学院神经生物学研究室进行。①动物:选择5只普通级SD大鼠,由泸州医学院实验动物中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:大鼠戊巴比妥钠腹腔麻醉,取双侧胫骨和股骨,磷酸盐缓冲液冲洗骨髓腔,采用密度梯度离心法从大鼠骨髓中分离培养骨髓基质细胞,胰蛋白酶与EDTA联合消化,传至第4代,用含20μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20μg/L表皮生长因子、N2辅助因子的DMEM/F12培养液向神经干细胞诱导分化。③实验评估:观察原代、传代培养及诱导分化后的骨髓基质细胞生长情况和形态变化,采用SABC法进行免疫细胞化学检测神经细胞特异性标志的表达。结果:①骨髓基质细胞形态观察:原代细胞接种1d后开始贴壁增殖,3d后多数贴壁,贴壁细胞呈梭形或扁平形;10d后90%细胞融合,以长梭形为主,突起粗大,形成网状、片状;传代后细胞贴壁速度加快,增殖能力更强,7d左右达到融合。②诱导分化后细胞生长情况和形态变化:第4代骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化7d,成球的细胞脱离瓶底,悬浮在细胞液中。将细胞离心弃上清,换成血清分化液后,细胞球逐渐贴壁,球周围很快发出突起,分化为星形胶质细胞样细胞、神经元样细胞及少突胶质细胞样细胞。③神经细胞特异性标志的表达:骨髓源性细胞球表达巢蛋白,呈棕黄色,为神经干细胞;从细胞球分化的细胞抗胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2及半乳糖脑苷脂均呈阳性。结论:骨髓基质细胞能在体外诱导分化出神经干细胞,且骨髓源性神经干细胞可进一步定向分化为神经细胞及神经胶质细胞。
刘敬霞[9](2007)在《脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生的影响》文中指出背景与目的缺血性脑血管疾病的高致残率严重影响患者的生存质量,脑缺血损伤引起的神经元结构破坏和缺失是引起功能障碍的病理关键。针对脑缺血损伤引起的生化、代谢改变,保护神经元免于受损,或促进脑缺血损伤后神经细胞再生成为干预损伤、恢复功能的重要策略。目前药物性的神经保护研究和临床应用仍欠理想。骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)具有较强的增殖能力和多向分化潜能,可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等神经细胞,成为脑缺血损伤后神经细胞再生理想的种子来源。鉴于骨髓间充质干细胞体外诱导剂的毒副作用和体外分化后移植脑内较弱的存活能力,近年来,对体外纯化、扩增培养的骨髓间充质干细胞移植脑内以治疗脑缺血损伤成为研究的热点。因此,开展骨髓间充质干细胞移植在神经细胞再生和神经功能修复方面的研究对脑缺血损伤具有重要意义。近年来渐有中医药在骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的报道,但研究多集中于对其体外的诱导分化方面,所选药物以单味中药或提取物为主,而中药复方对BMSCs移植后在活体内影响其存活、分化方面的研究少见。脑梗死属中医“中风”范畴,其病机复杂,以浊毒、血瘀和气虚表现尤为突出:气虚血瘀、毒损脑络为脑梗死的主要病机。解毒降浊、益气化瘀为脑梗死的主要治法。据此研制的中药复方脑脉通(大黄川芎人参葛根)具有解毒降浊、益气活血通络功效,可对脑缺血损伤发挥保护作用。动物实验和临床观察表明,脑脉通治疗脑梗死的效果肯定,可显着改善患者的生存质量。鉴于上述,开展中医药联合骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤研究具有重要意义。本研究从脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生方面评价脑脉通、BMSCs移植及其联合的脑保护作用,并从脑脉通对BMSCs移植后脑组织神经营养因子水平、向神经细胞分化的比率及对促神经元突触重建的生长相关蛋白表达的影响方面探讨其可能的作用机制。方法本研究以SD大鼠为研究对象,体外全骨髓贴壁筛选培养法获取骨髓间充质干细胞;移植前48 h用Brdu对骨髓间充质干细胞进行体外标记;栓线阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血再灌注动物模型;脑缺血3 h再灌注24 h由颈内动脉移植骨髓间充质干细胞悬液。动态观察移植后早期(7 d)、中期(14 d)、后期(28 d)大鼠的神经功能和生存状况变化;采用病理形态学、免疫组织化学法以及免疫组织化学双标法,从神经功能综合评分、脑组织含水量、脑梗塞灶、神经细胞超微结构变化方面观察脑脉通对骨髓间充质干细胞移植保护脑缺血损伤的影响;从神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白以及与之相关的神经营养因子表达的变化方面探讨脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对神经细胞的保护作用及可能的作用机制;观察骨髓间充质干细胞移植后在脑内的存活、迁移和分化特点以及脑脉通对其的影响;进一步从神经元突触标志性蛋白表达的变化方面观察骨髓间充质干细胞移植后对神经元突触重建的作用以及脑脉通对其作用的影响。主要研究结果如下:结果1.脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用1.1体外全骨髓贴壁筛选培养法纯化骨髓的效果理想,可在短期内获取移植所需的骨髓间充质干细胞;颈动脉移植骨髓间充质干细胞操作易行,细胞悬液少有外漏,移植途径可取。1.2脑缺血再灌注损伤后大鼠体重变化呈现由减轻到增加的趋势,且体重的变化与大鼠全身状况一致;大鼠神经功能随脑缺血再灌注时间的延长逐渐恢复;脑组织水肿程度、梗塞灶的大小及神经细胞超微结构的改变随脑缺血再灌注时间的延长出现由加重到减轻的改变。1.3骨髓间充质干细胞由颈内动脉移植对脑缺血损伤的保护作用与其移植脑内后的时间相关,BMSCs移植后早期未显出明显的保护作用;移植中期的神经功能恢复,脑组织水肿、梗塞灶大小和神经细胞超微结构有改善趋势;移植后期的神经功能恢复和神经细胞超微结构的改善明显。1.4脑脉通对脑缺血再灌注损伤不同时间的均有不同程度的改善作用;BMSCs移植联合脑脉通对脑缺血再灌注损伤的保护作用较单纯BMSCs移植的作用提前,联合应用对神经功能的修复和对神经细胞病理损伤的改善作用明显增强,且随移植后BMSCs在脑内时间的延长,联合应用的保护作用更为显着。2脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞再生及神经营养因子的影响2.1随着脑缺血再灌注时间的延长,脑组织神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白的表达减弱;神经生长因子和胶质源性神经营养因子的变化随脑缺血再灌注时间的延长呈现先增高再降低特点。2.2 BMSCs移植后早期神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白无明显增高;随BMSCs移植脑内时间的延长,神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白的表达增强,其中神经元特异性烯醇化酶的增强较胶质纤维酸性蛋白明显,以移植后期的增强更为显着。BMSCs移植后早期对神经生长因子和胶质源性神经营养因子的水平变化无明显影响,随移植后时间的延长,其上调神经营养因子的作用增强。2.3脑脉通联合BMSCs移植后早期神经元特异性烯醇化酶的表达较单纯移植组增强;联合组后期的神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达均有增强。脑脉通联合BMSCs可明显提高移植中期胶质源性神经营养因子水平,并使移植后期神经生长因子的表达明显增强。3.脑脉通对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植后向神经细胞分化的影响3.1 BMSCs移植后在脑实质内和血管腔内的分布比例随移植后时间的延长而增加。移植后早期,大多BMSCs位于血管腔内,黏附血管内皮呈丛簇样聚集,脑实质内有少量散在的BMSCs,分布未见明显规律;移植后中期,BMSCs大多从血管壁通过血脑屏障进入脑实质内,并向缺血侧部位迁移,血管腔内可见到少数标记的BMSCs;移植后期,血管腔内未见Brdu细胞,存活的BMSCs全部由血管进入脑实质,并迁移至缺血侧,对侧少有Brdu细胞;联合脑脉通可使OBMSCs移植后在脑实质内存活的数量明显增多,但脑实质和血管腔内BMSCs的比例及进入脑实质后的迁移方向未见明显改变。3.2 BMSCs移植后向神经细胞的分化随植入时间的延长出现分化率和分化方向的改变。BMSCs移植后早期在脑实质内的分化率低,未显示出分化方向的差异性;移植后中期的分化率明显增高,以向神经胶质细胞的分化明显;移植后期,BMSCs向神经元细胞的分化明显增强,而向神经胶质细胞的分化相对减弱;脑脉通对BMSCs移植后不同阶段在促进BMSCs向神经细胞分化方面的作用具有差异性,表现为在移植中期促进神经胶质细胞分化,而移植后期则使BMSCs向神经元方向的分化增强。4.脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元突触重建的影响4.1脑缺血再灌注损伤后神经元结构破坏,神经丝排列紊乱,变短,数量减少,稀疏,分布不均匀,且随脑缺血再灌注时间的延长而加重;促进受损后神经元突触重建的生长相关蛋白-43和标志神经元突触重建的蛋白表达减弱,且随脑缺血再灌注时间的延长呈现递减趋势。脑脉通对脑缺血再灌注早期的神经元结构受损具有保护作用,神经元突触素蛋白的表达增强,但对生长相关蛋白-43的表达无显着影响。4.2 BMSCs移植后早期对神经元结构受损未显出明显的保护作用;移植后中期,神经元突触重建特异性标志蛋白显示增加趋势;移植后期神经丝蛋白、促突触重建的生长相关蛋白-43和神经元突触素蛋白的表达增强。BMSCs对脑缺血再灌注损伤神经元突触重建的促进作用与移植脑内存活的时间相关,该作用随移植后时间的延长而增强。4.3脑脉通联合BMSCs移植可使早期神经丝蛋白表达增强、神经元结构破坏减轻;神经生长相关蛋白-43的表达提前,并增强其后期的表达;移植后期神经元突触素蛋白的表达增强。结论综合上述研究,结果提示,①体外全骨髓贴壁筛选纯化、培养和扩增BMSCs的方法可行,Brdu标记BMSCs的效果理想,由颈内动脉移植BMSCs悬液易于操作,移植后的BMSCs可在脑内存活、迁移,对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。②脑缺血再灌注损伤后神经功能、脑组织水肿、梗塞灶大小和神经细胞超微结构改变可随脑缺血再灌注时间延长有不同程度恢复;脑脉通对脑缺血再灌注损伤不同阶段具有不同程度的保护作用,以早期的作用明显;BMSCs对脑缺血再灌注损伤的保护作用与其移植后的时间相关,移植后早期未显出明显的脑保护作用,但随着BMSCs移植脑内时间的延长,其保护作用逐渐增强。③神经细胞随脑缺血再灌注损伤时间的延长持续受损、数量减少,神经营养因子出现先增高再降低特点,其在早期的升高对神经细胞受损具有保护作用,后期水平降低则不利于神经细胞的再生和修复;脑脉通对神经细胞的保护作用与其早期和中期上调胶质源性神经营养因子、后期上调神经生长因子表达有关;BMSCs移植对保护神经细胞和上调神经营养因子表达的作用随移植后时间的延长而增强;脑脉通联合BMSCs移植可使其对神经细胞的保护作用提前,并使后期的作用增强,以对神经元的作用尤为明显,这可能与脑脉通促进BMSCs移植后上调神经营养因子表达的作用有关。④随移植后时间的延长,BMSCs逐渐从血管壁通过血脑屏障进入脑实质内存活、向缺血侧迁移,出现神经细胞分化,但未显示出分化方向的差异性;脑脉通可使移植后BMSCs在脑内的存活增强,并在促进其向神经细胞分化方面显示出差异性,表现为促进中期BMSCs向神经胶质细胞分化和后期向神经元细胞分化。⑤神经元突触重塑是其结构重建与功能修复的基础,神经元突触重塑功能随脑缺血再灌注时间的延长有减弱趋势,这可能与促进神经元突触重建生长相关蛋白的表达下调有关;脑脉通在脑缺血再灌注早期可保护神经元结构受损,后期可增强神经元突触重建;BMSCs对神经元突触重建作用随移植后时间的延长逐渐增强;脑脉通联合BMSCs可使脑缺血再灌注损伤后早期神经元突触重建提前,并可增强中期与后期的神经元突触重建,其作用可能是通过上调促神经元突触重建的生长相关蛋白-43的表达实现。因此认为,脑脉通联合BMSCs移植对脑缺血再灌注神经细胞再生具有促进作用,其作用与脑脉通使BMSCs移植后上调神经营养因子、促进向神经细胞分化及增强促神经元突触重建的生长相关蛋白表达的作用在早期提前和在后期增强有关。研究可为BMSCs移植治疗脑缺血损伤以及相关领域中药的深入研究提供科学依据,并对进一步中医药学及其与细胞治疗学应用的研究具有重要价值。
池京洋[10](2007)在《静脉移植骨髓基质细胞治疗大鼠脑外伤》文中进行了进一步梳理研究目的1.观察大鼠骨髓基质细胞的体外分离和培养,为移植骨髓基质细胞治疗大鼠脑外伤奠定基础。2.将培养传三代BMSCs尾静脉注射移植脑外伤大鼠体内,观察骨髓基质细胞(BMSCs)能否促进细胞分化,增加脑利钠肽(BNP)表达以及促进脑外伤(TBI)大鼠神经功能的恢复。研究方法1.取60~90g Wistar大鼠,腹腔内注射5-氟尿嘧啶(150 mg/kg)以杀死外周血细胞促进骨髓的再生,3天后处死,密度梯度离心结合贴壁培养法体外培养骨髓基质细胞,利用倒置相差显微镜观察原代及不同传代细胞的生长形态特点,并用流式细胞仪鉴定原代以及不同传代细胞表型。2.第3代骨髓基质细胞移植前3d培养液中加入Brdu(3μg/ml),继续培养3d,胰酶消化后收集细胞悬液,离心细胞沉淀,PBS悬浮后计算细胞密度,制成终浓度3×106/ml,移植备用。3.选取清洁级3月龄Wistar大鼠共72只,随机分为假手术组(n=24):切开皮肤移除相同大小颅骨,没有受到脑外伤,未作特殊处理;TBI+PBS组(n=24):在脑外伤后第一天通过尾静脉注射1ml PBS;TBI+BMSCs组(n=24):在脑外伤后一天通过尾静脉注射1ml PBS,内含BMSCs(3×106)。移植前3天细胞培养液内加入BrdU(3μg/ml)用来标记新生细胞。所有实验动物均在实验期间腹腔注射BrdU(50 mg/kg),每天两次。正常大鼠和脑外伤大鼠,包括BMSCs组和PBS组,在脑外伤前和脑外伤后第3d、7d被处死(每个治疗组每次6只),留取脑组织,测定BNP mRNA表达。在脑外伤前和脑外伤后第3d、7d采集血液用作放射免疫方法分析,测定血浆BNP浓度(每个治疗组每次6只)。在脑外伤后第15d处死剩余大鼠,将包含损伤临界区(BZ)、脑室下区(SVZ)和海马部位(HZ)的脑组织灌注固定,石蜡切片,厚度为6μm。脑冠状切片应用二氨基联苯胺(DAB)染色免疫组织化学检查测定新生5—溴脱氧尿核苷(BrdU)阳性细胞;为了测定新生细胞是否向神经元方向分化,脑冠状切片进行异硫氰酸荧光素(FITC)和Cy5标记双染色测定神经元标记Tuzil、doublecortin和NeuN。实验期间应用mNSS平分标准在移植前和移植后2d、5d、8d、11d和第15d对动物进行行为学检查,进行神经功能评估。结果1.培养的骨髓基质细胞第3代,骨髓基质细胞的细胞表面标志CD90表达阳性的细胞已占到91.5%±1.87%。造血干细胞的细胞表面标志CD45表达阳性的细胞己从原代的73.3%±2.16%降低到5.8%±1.47%。2.BMSCs显着提高脑外伤大鼠神经功能的恢复。与PBS治疗组相比,mNSS在治疗后的第8天、11天和第15天,BMSCs治疗组大鼠的mNSS显着降低,神经功能缺失得到明显改善。3.治疗后第15d,大鼠同侧大脑半球和对侧大脑半球内BrdU阳性细胞数比较结果:与假手术组对比,在PBS治疗组大鼠的同侧大脑半球和对侧大脑半球的SVZ、HZ BrdU阳性细胞数显着增多(p<0.05);与PBS治疗组相比,BMSCs治疗组同侧和对侧SVZ、HZ和BZ区BrdU阳性细胞数显着增多(p<0.05)。4.与PBS治疗组相比,在BMSCs治疗组的SVZ,BZ及HZ中免疫组化荧光双标记显示出BrdU阳性细胞中表达Tuj 1、doublecortin和NeuN的比例显着升高(p<0.05)。5.治疗前三组大鼠脑内BNP mRNA无显着差别。在脑外伤后的第3天和第7天,在PBS治疗组和BMSCs治疗组BNP mRNA的表达显着增加(p<0.05),而假手术组无明显变化(p>0.05)。与假手术组相比,PBS治疗组BNP mRNA在脑外伤后的第3天和第7天显着提高(p<0.05)。与PBS组相比较,在伤后第3天和第7天,BMSCs治疗组大鼠脑内BNP mRNA的表达显着增加(p<0.05)。6.治疗前大鼠血浆内BNP的浓度三组之无显着差别(p>0.05)。在第3天和第7天,PBS治疗和BMSCs治疗组BNP的浓度显着增加,而假手术组无明显变化。与假手术组相比,PBS治疗组BNP浓度在脑外伤后的第3天和第7天显着提高(p<0.05)。与PBS组相比较,在伤后第3天和第7天,BMSCs治疗组大鼠血浆内BNP的浓度显着增加(p<0.05)。结论1.传3代的骨髓基质细胞可作为理想的细胞移植治疗的细胞来源;2.静脉应用BMSCs能促进脑外伤后大鼠神经细胞的再生和分化,促进神经功能恢复。一些抵抗脑水肿和血管活性因子,如BNP,可能对这种治疗效果的产生起到促进作用。
二、骨髓基质细胞诱导为神经原及胶质细胞(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、骨髓基质细胞诱导为神经原及胶质细胞(论文提纲范文)
(1)帕金森病PARK16、PARK17、PARK18和BST1基因多态分析及多基因关联分析(论文提纲范文)
摘要 ABSTRACT 缩略词表 前言 第一节 |
PARK16、PARK17、PARK18和BST1基因多态分析 1 |
研究对象和方法 2 |
结果 3 |
讨论 第二节 |
帕金森病多基因关联分析 1 |
实验方法 2 |
结果 3 |
讨论 结论 参考文献 综述 参考文献 附录一 附录二 致谢 攻读学位期间主要的研究成果 |
(2)骨髓基质干细胞的生物学特性及对胶质瘤的趋向效应的实验研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
文献回顾 |
第一部分 骨髓基质干细胞生物学特性 |
第二部分 脑胶质细胞 的治疗策略 |
实验一 骨髓基质干细胞的生物学特性实验研究 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
实验二 骨髓基质干细胞向胶质 细胞的趋向效应 研究 |
1 实验材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
小结 |
参考文献 |
附录 |
个人简历和研究成果 |
致谢 |
(5)脊髓骨髓间充质干细胞促进损伤脊髓修复和神经干细胞的分化(论文提纲范文)
内容提要 |
第1章 前言 |
第2章 综述 |
2.1 脊髓损伤研究现状 |
2.2 脊髓急性损伤修复的研究现状及策略 |
2.3 骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤现状 |
第3章 大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养 |
3.1 试验材料 |
3.2 大鼠骨髓间质干细胞(rBMSC)的分离培养 |
第4章 完全性脊髓损伤动物模型的制作 |
4.1 钳夹法制作完全性脊髓损伤动物模型 |
4.2 讨论 |
4.3 大鼠脊髓损伤后相关护理 |
第5章 BMSC移植和联合应用FK560对神经功能恢复的影响 |
5.1 材料及方法 |
5.2 结果 |
5.4 小结 |
第6章 BMS移植和联合应用FK560对神经细胞凋亡的影响 |
6.1 试验材料与方法 |
6.2 结果 |
6.3 小结 |
第7章 BMSC移植和联合应用FK560对神经胶质增生的影响 |
7.1 材料与方法 |
7.2 结果 |
7.3 小结 |
第8章 BMSC移植和联合应用FK560对残留空洞大小的影响 |
8.1 材料及方法 |
8.2 结果 |
8.3 结论 |
第9章 BMSC移植后脑脊液对神经干细胞球分化的影响 |
9.1 材料和方法 |
9.2 移植MSCs后的脑脊液(MSCc-CSF)培养神经干细胞 |
9.3 试验结果 |
9.4 小结 |
第10章 BMS移植后脑脊液联合雪旺细胞促进神经干细胞分化 |
10.1 材料和方法 |
10.2 试验结果 |
10.3 结论 |
第11章 讨论 |
第12章 结论 |
参考文献 |
附图 |
攻读博士期间发表的论文 |
致谢 |
论文摘要 |
ABSTRACT |
(6)丹参、藜芦对大鼠MSCs分化为神经元样细胞及SMNmRNA表达的影响(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
1. MSCs研究进展 |
2. 诱导MSCs向神经样细胞分化研究进展 |
3. 丹参反藜芦考证 |
4. 脊髓性肌萎缩症研究进展 |
5. 本实验研究思路、内容和目的 |
实验一 MSCs的分离、培养及鉴定 |
1. 实验材料 |
2. 实验方法 |
3. 实验结果 |
4. 讨论 |
5. 实验一结论 |
实验二 丹参、藜芦水煎液对MSCs分化为神经元样细胞的干预研究 |
1. 实验材料 |
2. 实验方法 |
3. 实验结果 |
4. 讨论 |
5. 实验二结论 |
实验三 丹参、藜芦水煎液对分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的影响 |
1. 实验材料 |
2. 实验方法 |
3. 实验结果 |
4. 讨论 |
5. 实验三结论 |
实验四 丹参、藜芦含药血清对MSCs分化为神经元样细胞的干预研究 |
1. 实验材料 |
2. 实验方法 |
3. 实验结果 |
4. 讨论 |
5. 实验四结论 |
课题结论 |
创新之处 |
展望 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
(7)脂肪源性干细胞移植治疗缺血性脑损伤的实验研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
英语缩略语说明 |
前言 |
第一章 大鼠脂肪干细胞的分离培养和体外诱导分化 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第二章 磁性标记对大鼠ADSCs的活性影响及标记后MRI研究 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第三章 磁性标记ADSCs移植治疗缺血性脑损伤的MRI示踪成像 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
全文总结 |
综述一 |
综述一参考文献 |
综述二 |
综述二参考文献 |
致谢 |
攻读博士期间发表的论文 |
(8)大鼠骨髓基质细胞体外培养向神经干细胞的诱导分化(论文提纲范文)
0 引言 |
1 材料和方法 |
2 结果 |
2.1 骨髓基质细胞形态观察 |
2.2 诱导分化后细胞生长情况和形态变化 |
2.3 诱导分化后神经细胞特异性标志的表达 |
3 讨论 |
(9)脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
英文缩略语 |
第一部分 文献综述 |
1 干细胞治疗脑缺血损伤的研究进展 |
2 骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的研究概况 |
3 中医药影响骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的研究述评 |
4 中医药促进脑缺血损伤神经元重塑的研究 |
第二部分 研究思路 |
中医药联合骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血再灌注损伤研究的思路与策略 |
第三部分 实验研究 |
前言 |
1 流行病学概况 |
2 脑缺血神经细胞损伤的级联反应机制 |
3 脑缺血损伤后神经细胞保护与修复策略 |
4 骨髓间充质干细胞移植保护神经细胞的基础和潜能 |
5 中医药保护脑缺血神经细胞损伤的优势 |
6 中医药对骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的影响 |
7 脑脉通对脑缺血神经细胞损伤保护作用的探索 |
参考文献 |
实验一 脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
实验二 脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞及神经营养因子的影响 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
实验三 脑脉通对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植后向神经细胞分化的影响 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
实验四 脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元突触重建的影响 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
第四部分 结语 |
结语 |
第五部分 附录 |
病理照片 |
致谢 |
个人简历 |
(10)静脉移植骨髓基质细胞治疗大鼠脑外伤(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
符号说明 |
第一部分 骨髓基质细胞的分离、培养和鉴定 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第二部分 骨髓基质细胞的体内移植 |
前言 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
文献综述 |
文献综述 |
参考文献 |
发表文章和参加科研活动 |
致谢 |
四、骨髓基质细胞诱导为神经原及胶质细胞(论文参考文献)
- [1]帕金森病PARK16、PARK17、PARK18和BST1基因多态分析及多基因关联分析[D]. 田锦勇. 中南大学, 2012(12)
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