一、早孕因子的研究现状及进展（论文文献综述）
王哲,王会岩[1]（2022）在《奶牛早期妊娠诊断及妊娠相关糖蛋白（PAG）ELISA检测技术进展》文中进行了进一步梳理奶牛配种后,及时且准确了解奶牛的妊娠状况至关重要。奶牛早期妊娠诊断可显着缩短平均育种间隔,提高奶牛养殖效率。随着早期妊娠诊断技术不断发展,检测牛妊娠相关糖蛋白（PAG）逐渐被人们重视,尤其是酶联免疫吸附试验（ELISA）得到更多的开发与利用。目前国外已有PAG ELISA牛妊娠检测试剂盒用于检测怀孕早期PAGs,该方法快速、准确、灵敏,而国内现存的试纸条准确率低。本文综述了传统的奶牛早期妊娠诊断方法和PAG ELISA方法的发展现状,对ELISA检测方法在动物繁殖领域的应用进行展望。
郭腾龙,汝振远,任尚,杨贤树,张翔栋,申屠璐燕,张运海,曹祖兵[2]（2021）在《牛早期妊娠诊断的研究进展》文中研究表明随着规模化、集约化养牛产业的飞速发展,急需更加准确、高效和方便的早期妊娠诊断方法,以缩短母牛产犊间隔,减少空怀期母牛饲养成本,提高养殖效益。目前养牛行业使用的早期妊娠诊断方法主要包括直肠触诊、超声波诊断以及通过检测妊娠相关生物标志物的免疫学诊断等。然而,这些早期妊娠诊断方法都存在一定的弊端,很难满足当前养牛行业的需求。本文阐述了几种早期妊娠诊断方法的优缺点,力求找出母牛最合适的早期妊娠诊断方法,以利于妊娠早期母牛的精细化管理和母牛繁殖效率的提高。
金海,赵拴平,徐磊,贾玉立,贾玉堂[3]（2018）在《肉牛妊娠初期血、尿中孕酮、妊娠相关糖蛋白、早孕因子的变化》文中提出[目的]探讨肉牛妊娠初期血液和尿液中孕酮（P4）、妊娠相关糖蛋白（PAG）、早孕因子（EPF）的变化,为肉牛早期妊娠诊断奠定基础。[方法]采集肉牛配种后第0、1、8、17、21、28、35天的血、尿液,通过ELISA检测血、尿中P4、PAG、EPF 3种激素的浓度。[结果]在配后0～35 d,妊娠与非妊娠母牛血、尿中P4和PAG浓度变化平缓,而EPF差异较明显,3种激素血液中浓度均高于尿液中。其中,妊娠牛血液中EPF浓度在配后第8天显着（P<0.05）高于非妊娠牛。[结论]血、尿中EPF浓度变化能反映肉牛的妊娠状态。
孙培培[4]（2017）在《基于EPF检测的奶牛早期妊娠诊断方法的研究》文中认为目前,在我国奶牛早期妊娠诊断技术不断发展的同时,国外早期妊娠诊断产品也不断出现。随着奶牛养殖规模化程度的提高,简单有效、经济的妊娠诊断方法对适应产业发展形势越来越重要。奶牛早孕因子（early pregnancy factor,EPF）是目前所知最早确认妊娠的生物化学标志物之一,它的有无可作为早期妊娠诊断的重要指标。妊娠所产生的EPF来源不同,可能与子宫、卵巢、输卵管、受精卵、胎盘、垂体等有关。采用实时荧光定量PCR技术,从基因水平检测生物体基因拷贝数,定量分析奶牛子宫、胎盘、卵巢、输卵管、外阴皮肤和阴道黏液组织中的EPF基因的表达量,对准确诊断奶牛早期妊娠状况具有重要意义。胶体金技术具有易制备、成本低、结果直观可靠等优点。利用奶牛早孕因子结合胶体金技术制备免疫层析胶体金快速诊断试纸条,对现场快速诊断奶牛妊娠状况有重要意义。本研究首先利用实时荧光定量PCR方法检测46岁孕牛和未孕牛子宫、胎盘、卵巢、输卵管、外阴皮肤和阴道黏液组织中的EPF基因的表达量差异,研究实时荧光定量PCR方法检测EPF表达量作为奶牛早期妊娠的可行性。同时,采用双抗体夹心ELISA方法筛选出配对单克隆抗体,探讨了免疫层析胶体金快速检测奶牛早期妊娠试纸条方法。具体研究结果如下:1、实时荧光定量PCR发现子宫和外阴部皮肤中EPF表达量与阴性对照组相比差异不显着;卵巢和胎盘中的EPF表达量与阴性对照组相比差异显着（P<0.05）;输卵管和阴道黏液中EPF表达量与阴性对照组相比差异极显着（P<0.01）。孕牛EPF存在于子宫、卵巢、胎盘、输卵管、阴道黏液和外阴皮肤中。阴道黏液的采集相对方便,且不伤害家畜,通过实时荧光定量PCR检测EPF基因表达量可以作为诊断奶牛早期妊娠的一种有效方法。2、双抗体夹心ELISA方法成功筛选出配对单抗六对,检测人工重组牛EPF蛋白的线性检测范围可达234937ng/mL,检测灵敏度约为60ng/mL,但未检测出孕牛血清中的EPF。3、利用配对单抗制备的胶体金免疫层析试纸条（GICA）检测人工重组牛EPF蛋白的最低检出率是1.5μg/mL,但临床上未检测出孕牛血清和阴道黏液中的EPF。
卜建华,雷静,李艳艳,脱征军,梁小军[5]（2015）在《奶牛早期妊娠诊断研究进展》文中进行了进一步梳理奶牛早期妊娠诊断是确保繁殖机能正常发挥、缩短胎间距、提高经济效益的重要手段。现阶段该技术在规模化程度较高的奶牛场被广泛应用,能及时发现空怀奶牛;同时,若配合同期发情技术,可使空怀奶牛实现及时发现、及时处理、及时参配,可以提高奶牛场的繁殖效率。本文综述了奶牛的早期妊娠诊断技术及其研究进展。
宋立峰[6]（2014）在《绵羊早孕因子蛋白的表达及其多克隆抗体的制备》文中提出早孕因子（Early pregnancy factor，EPF）是目前在哺乳动物妊娠早期血清中发现的最早的与妊娠相关的免疫抑制因子和生长调节因子，其可检测时间远远早于人绒毛膜促性腺激素（HCG），并且早孕因子对妊娠母体具有很高的特异性，对早孕因子检测方法的开发与应用对于畜牧生产具有重要意义。目的：应用原核表达技术制备早孕因子蛋白，将其与弗氏佐剂混合后对家兔进行免疫，制备抗早孕因子多克隆抗体，为进一步研究开发早孕因子检测试剂盒奠定基础。方法：以妊娠绵羊卵巢组织为样本提取总RNA，反转录得到单链cDNA，通过PCR扩增分别得到带有EcoRⅠ与XhoⅠ酶切位点和NcoⅠ与XhoⅠ酶切位点的两条绵羊早孕因子编码基因。然后进行TA克隆，双酶切反应，经T4连接酶分别与表达载体pGEX-4T-1与pET20b重组，并转化表达菌株BL21（DE3）感受态。在异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导下，表达产生融合GST标签与His标签的早孕因子蛋白。通过GST亲和吸附层析柱与Ni亲和吸附层析系统得到融合蛋白纯品，经SDS-PAGE和Western Blot鉴定分析重组蛋白的表达。使用纯化得到的融合GST标签的早孕因子蛋白与弗氏佐剂按等比例混匀后，免疫家兔制备早孕因子多克隆抗体。以融合His标签的早孕因子蛋白为包被原，通过间接ELISA法测定抗体效价，并通过Western Blot试验检测血清抗体对早孕因子蛋白的识别、结合能力。通过临床试验检测20只绵羊妊娠情况，进行血清抗体实际应用验证。结果：大肠杆菌原核表达得到的早孕因子融合GST标签的早孕因子蛋白分子量约为36kDa，融合His标签的早孕因子蛋白分子量约为12kDa，与理论值相符。两种重组早孕因子融合蛋白在大肠杆菌中确实得到了高效表达和理想的纯化效果，免疫家兔57d后血清抗体滴度达到了1:12000，血清抗体能够识别早孕因子蛋白，并且血清抗体实际检测应用检测正确率达95%。早孕因子重组子在大肠杆菌中得到了丰富表达，制备的早孕因子多克隆抗体具有良好的生物活性与特异性。
张兴会,宋先忱,郭丹,韩迪[7]（2013）在《绒山羊早孕因子的活性检测及分离纯化》文中研究指明检测怀孕绒山羊早孕因子的活性,并对其进行分离纯化,以期为EPF快速检测方法的建立提供依据。采集妊娠14个月健康孕羊血清,通过DEAE-52离子交换层析、Con A-Sepharose4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析分离纯化技术,从孕羊血清中分离出纯化的EPF。用E玫瑰花环抑制试验对各阶段产物EPF活性进行检测。结果表明,受精后的绒山羊在2230h能够检测出早孕因子活性,怀孕羊和未怀孕羊血清的E玫瑰花环抑制滴度差异显着（P<0.05）,纯化出的EPF通过E玫瑰花环抑制试验显示具有活性,其分子质量为47.7ku,等电点为6.7。
贺加双,马卫明,邓立新,宋移福,刘莲莲,曹永芝,谢冰[8]（2011）在《肉牛早孕因子（EPF）的活性检测及分离纯化》文中研究说明【目的】检测怀孕肉牛早孕因子（Early pregnancy factor,EPF）的活性,并对其进行分离纯化,以期为EPF快速检测方法的建立提供依据。【方法】采集妊娠19个月的肉牛血样,并进行妊娠诊断,通过玫瑰花环抑制试验（Rosette inhibition test,RIT）检测其早孕因子的活性。对有活性的血样依次进行DEAE-52离子交换层析、ConASepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析,分离纯化EPF,对纯化产物进行SDS-PAGE检测,并测定其等电点。【结果】怀孕牛和未怀孕牛血清的玫瑰花环抑制滴度差异显着（P<0.05）。玫瑰花环抑制试验显示,纯化出的EPF具有活性,其分子质量为53.6 ku,等电点为6.8。【结论】利用玫瑰花环抑制试验检测早孕因子活性,可以鉴定肉牛的妊娠状态;利用层析的方法可以分离出早孕因子的活性蛋白。
贺加双[9]（2011）在《肉牛早孕因子（EPF）的活性检测及分离纯化》文中进行了进一步梳理早孕因子（Early Pregnancy Factor,EPF）是存在于妊娠早期母体血清中的一种具有免疫抑制及生长调节作用的蛋白质。1974年由澳大利亚学者Morton等在孕鼠血清中首次发现,由于在小鼠交配6 h后就可检测到,因此被命名为早孕因子。早孕因子是哺乳动物受精后最早在血液中出现的具有妊娠相关免疫抑制活性的多肽物质。普遍认为它是热激蛋白家族成员伴侣蛋白10的同系物。可用E玫瑰花环抑制试验（E Rosette Inhibition Test,E-RIT）做生物学鉴定。妊娠早期分泌的EPF能阻止母体的免疫系统将胎儿识别为外源物质,及对胎儿产生应答。早孕因子的产生依赖于一个合适的激素环境,与卵巢、输卵管、受精卵、胎盘、垂体等有关。早孕因子在动物受精数小时后即可在母体血液中被检测出来,在整个孕期持续存在。在母体分娩以后EPF随即消失。EPF可以用于早期妊娠诊断,预测早期胚胎死亡与流产、鉴定胚胎移植效果、监测胎儿的状态等,其次,EPF作为一种温和的、天然的免疫抑制物,在治疗自身免疫性疾病、预防器官移植后排斥反应等领域有研究价值。因此研究这种蛋白质对牛业生产具有重要意义。本实验采集授精后20 h,25 h与30 h后的肉牛血清和阴道粘液,尝试建立简单有效的E玫瑰花环抑制实验,以快速准确地检测早孕因子活性,并测定血液及阴道粘液中早孕因子的最早可检测时间,以确定进行早期妊娠检测的最早时机和最佳方法。采集妊娠1～9个月健康孕牛血清,通过DEAE-52离子交换层析,Con A-Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析分离纯化技术,从孕牛血清中分离出纯化的EPF。用E玫瑰花环抑制实验对各阶段产物EPF活性进行检测。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳对纯化的EPF等电点进行分析。结果表明,授精后的肉牛在20h之间能够检测出早孕因子活性,阴道粘液的可检测时间是25h,怀孕牛和未怀孕牛血清的E玫瑰花环抑制滴度差异显着（P < 0.05）,纯化出的EPF通过E玫瑰花环抑制实验显示具有活性,其分子质量为53.6 ku,等电点为6.8。结论是通过E玫瑰花环抑制实验检测早孕因子活性可以鉴定肉牛的妊娠状态,且最早可以在授精20h之内在血液中检测出,纯化出的EPF通过E玫瑰花环抑制实验具有活性,经SDS-PAGE出现分子量为53.6Ku一条蛋白质区带。经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法检测EPF的等电点为6.8。
王林林[10]（2011）在《抗人早孕因子单克隆抗体的制备》文中进行了进一步梳理目的：通过制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组表达蛋白和合成多肽,生产鉴定抗人早孕因子单克隆抗体。方法：以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamH I和XhoⅠ双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以0.5 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。分别以纯化的GST-EPF11融合蛋白和MC29合成多肽为免疫原,免疫Balb/c小鼠,免疫四次,每次免疫间隔时间为三周,四免后测定抗体效价。将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,经ELISA筛选与克隆化,生产鉴定单克隆抗体。结果：构建了缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组表达载体pGEX6P-EPF11,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达GST-EPF11融合蛋白,破碎表达菌体,获取上清,成功获得纯化的GST-EPF11融合蛋白,分子量为35000。GST-EPF11融合蛋白免疫Balb/c小鼠和多肽免疫Balb/c小鼠,四免后测定小鼠效价分别为1：12 800和1：6 400,融合小鼠成功制备并筛选出四株抗人早孕因子单克隆抗体,分别为1E11、2D7、3F8和5G12,效价均在1：3 200以上。结论：在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,以重组蛋白和合成多肽免疫小鼠,成功制备了抗人早孕因子的单克隆抗体。
二、早孕因子的研究现状及进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、早孕因子的研究现状及进展（论文提纲范文）
（1）奶牛早期妊娠诊断及妊娠相关糖蛋白（PAG）ELISA检测技术进展（论文提纲范文）
| 1 奶牛早期妊娠诊断的传统方法 |
| 2 PAG ELISA检测方法 |
| 2.1 妊娠相关糖蛋白(PAG)的研究现状 |
| 2.2 PAG检测方法 |
| 2.3 PAG ELISA方法的应用 |
| 3 展望 |
（2）牛早期妊娠诊断的研究进展（论文提纲范文）
| 1 临床诊断 |
| 1.1 直肠检查 |
| 1.2 超声波诊断法 |
| 2 免疫学诊断 |
| 2.1 孕酮(P4)检测 |
| 2.2 早期妊娠因子(EPF)检测 |
| 2.3 妊娠相关蛋白(PAGs)检测 |
| 2.4 IFN-τ检测 |
| 3 展望 |
（4）基于EPF检测的奶牛早期妊娠诊断方法的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词英汉对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 奶牛早期妊娠诊断的意义 |
| 2 奶牛早期妊娠诊断技术的研究进展 |
| 2.1 直肠检查法 |
| 2.2 超声波检查法 |
| 2.3 牛妊娠相关物质诊断法 |
| 2.3.1 妊娠相关糖蛋白（PAG）诊断法 |
| 2.3.2 妊娠特异性蛋白B（PSP-B）诊断法 |
| 2.3.3 血清酸滴定法 |
| 2.4 早孕因子诊断法 |
| 2.4.1 硫酸铜法 |
| 2.4.2 玫瑰花环抑制试验 |
| 2.4.3 酶联免疫测定法 |
| 2.4.4 胶体金试纸条检测法 |
| 3 早孕因子的研究进展 |
| 3.1 早孕因子的化学本质 |
| 3.2 早孕因子的结构 |
| 3.3 早孕因子的来源 |
| 3.4 早孕因子的生物学作用 |
| 3.5 早孕因子的纯化 |
| 3.6 早孕因子的临床应用 |
| 3.6.1 诊断肿瘤 |
| 3.6.2 预测流产 |
| 3.6.3 超早孕检测 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 qRT-PCR检测奶牛不同生殖部位EPF基因的表达量 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 方法原理 |
| 1.5 引物设计与合成 |
| 1.6 Trizol法提取组织总RNA |
| 1.7 组织RNA的反转录 |
| 1.8 电泳检测目的基因、内参基因的PCR反应条件 |
| 1.9 实时荧光定量PCR反应条件 |
| 1.10 重复性试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 EPF基因的PCR扩增 |
| 2.2 重复性试验 |
| 2.3 qRT-PCR检测牛EPF基因的表达水平 |
| 3 讨论与分析 |
| 试验二 基于EPF检测的奶牛早孕诊断双抗体夹心ELISA方法的初步建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要试剂的配置 |
| 1.4 方法原理 |
| 1.4.1 双抗体夹心ELISA原理 |
| 1.4.2 双抗体夹心ELISA方法的步骤 |
| 1.5 小鼠抗牛EPF腹水单抗的初步筛选 |
| 1.6 小鼠腹水单抗效价的测定 |
| 1.7 酶标抗牛EPF单克隆抗体的效价检测 |
| 1.8 确定6株抗牛EPF单抗是否针对不同的抗原表位 |
| 1.9 确定包被抗体与酶标抗体的最佳工作浓度 |
| 1.10 孕牛血清检测单抗效果 |
| 2 结果 |
| 2.1 初步筛选小鼠腹水标准曲线的建立 |
| 2.2 小鼠腹水效价的测定 |
| 2.3 酶标抗体的效价检测结果 |
| 2.4 双抗体夹心ELISA检测十种配对组合 |
| 2.5 确定包被抗体与酶标抗体的最佳工作浓度 |
| 2.6 双抗体夹心ELISA检测孕牛血清 |
| 3 讨论与分析 |
| 试验三 基于EPF检测的奶牛早孕诊断胶体金免疫层析试纸条方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要试剂的配置 |
| 1.5 胶体金免疫层析试纸条的制备 |
| 1.5.1 玻璃器皿的清洁 |
| 1.5.2 柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液 |
| 1.5.3 胶体金溶液的质量鉴定 |
| 1.5.4 抗牛EPF单克隆抗体的标记条件 |
| 1.5.5 免疫胶体金复合物的制备 |
| 1.5.6 金标抗牛EPF单克隆抗体复合物的鉴定 |
| 1.6 斑点金渗滤实验 |
| 1.6.1 渗滤卡的组装及单抗点膜 |
| 1.6.2 检测人工重组牛EPF蛋白 |
| 1.7 试纸条的组装及检测 |
| 1.7.1 上样垫的预处理 |
| 1.7.2 结合垫的预处理 |
| 1.7.3 NC膜的预处理 |
| 1.7.4 NC膜上金标抗牛EPF单克隆抗体最适稀释度的确定 |
| 1.7.5 喷金法制备金标垫 |
| 1.7.6 免疫层析试纸条的组装 |
| 1.7.7 免疫层析胶体金试纸条检测系统的建立 |
| 1.7.8 阳性组织的试纸条检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 最适柠檬酸三钠加入量 |
| 2.2 胶体金的表征 |
| 2.3 抗牛EPF单克隆抗体的最佳标记条件 |
| 2.4 金标抗体复合物的鉴定 |
| 2.5 金标垫的最佳优化条件及封闭剂的选择 |
| 2.6 上样垫的最佳优化条件及封闭剂的选择 |
| 2.7 卡盒检测人工重组牛EPF结果 |
| 2.8 胶体金试纸条的检测结果 |
| 2.8.1 四组配对单抗检测结果 |
| 2.8.2 检测试纸条灵敏度 |
| 2.8.3 检测试纸条特异性 |
| 2.8.4 检测试纸条稳定性 |
| 2.8.5 胶体金试纸条的临床检测 |
| 2.8.6 阴道黏液组织的试纸条检测结果 |
| 3 讨论与分析 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 附件 |
（5）奶牛早期妊娠诊断研究进展（论文提纲范文）
| 1 直肠触诊法 |
| 2 超声波检查法 |
| 3 血清酸滴定法 |
| 4 硫酸铜法 |
| 5 电子探针诊断法 |
| 6 孕酮测定诊断法 |
| 7 血小板计数法 |
| 8 早孕因子诊断法 |
（6）绵羊早孕因子蛋白的表达及其多克隆抗体的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 1 引言 |
| 1.1 早孕因子的来源 |
| 1.2 早孕因子的本质及生物学特性 |
| 1.3 早孕因子的生物学作用 |
| 1.3.1 免疫抑制调节作用 |
| 1.3.2 生长调节中的作用 |
| 1.4 早孕因子的应用 |
| 1.4.1 超早孕检测 |
| 1.4.2 胚胎监控 |
| 1.4.3 肿瘤细胞的早期诊断 |
| 1.4.4 其他方面的应用 |
| 1.5 早孕因子分离纯化 |
| 1.6 早孕因子的检测 |
| 1.7 早孕因子的应用前景 |
| 1.8 研究目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 实验动物与主要试剂 |
| 2.1.3 主要溶液配制 |
| 2.2 实验步骤 |
| 2.2.1 总 RNA 的提取和检测 |
| 2.2.2 反转录合成 cDNA |
| 2.2.3 目的基因扩增 |
| 2.2.4 目的基因的克隆 |
| 2.2.5 PCR 鉴定 TA 克隆 |
| 2.2.6 酶切鉴定 TA 克隆 |
| 2.2.7 TA 克隆基因测序 |
| 2.2.8 目的基因与表达载体双酶切 |
| 2.2.9 切胶回收 |
| 2.2.10 目的基因与表达载体连接 |
| 2.2.11 表达重组子 PCR 鉴定 |
| 2.2.12 表达重组子酶切鉴定 |
| 2.2.13 表达重组子基因测序 |
| 2.2.14 表达重组质粒转化表达感受态 |
| 2.2.15 蛋白表达与检测 |
| 2.2.16 蛋白纯化 |
| 2.2.17 透析袋的使用预处理： |
| 2.2.18 免疫动物 |
| 2.2.19 抗体滴度检测 |
| 2.2.20 多克隆抗体特异性检测 |
| 2.2.21 绵羊妊娠检测多克隆抗体 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 目的基因的获得 |
| 3.2 TA 克隆重组质粒 PCR 鉴定 |
| 3.3 TA 克隆重组质粒酶切结果 |
| 3.4 表达重组子 PCR 鉴定结果 |
| 3.5 表达重组子酶切鉴定结果 |
| 3.6 测序结果 |
| 3.7 Western Blot 结果 |
| 3.8 绵羊 EPF 抗血清效价检测 |
| 3.9 抗体特异性鉴定 |
| 3.10 羊妊娠检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 早孕因子蛋白的制备 |
| 4.2 多克隆抗体的制备 |
| 4.3 展望 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
（7）绒山羊早孕因子的活性检测及分离纯化（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 血样的采集与处理 |
| 1.2.2 绒山羊外周血淋巴细胞悬液的制备 |
| 1.2.3 绵羊红细胞(SRBC)的制备 |
| 1.2.4 玫瑰花环形成率检测 |
| 1.2.5 早孕因子活性在孕羊体内最早可检测时间的测定 |
| 1.2.6 EPF的分离与纯化 |
| 1.2.6. 1 DEAE-52阴离子交换层析 |
| 1.2.6. 2 ConA Sepharose 4B亲和层析 |
| 1.2.6. 3 Heparin Sepharose CL 6B亲和层析 |
| 1.2.7 EPF分离纯化结果的检测 |
| 1.2.8 EPF等电点的测定 |
| 1.2.9 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 绒山羊血清中EPF活性的检测 |
| 2.2 玫瑰花环形成情况 |
| 2.2.1 对照组 |
| 2.2.2 怀孕羊组 |
| 2.3 孕羊血清中EPF的分离与纯化 |
| 2.3.1 DEAE-52离子交换层析 |
| 2.3.2 ConA Sepharose 4B亲和层析 |
| 2.3.3 Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析 |
| 2.4 EPF分离纯化结果的检测 |
| 2.5 EPF等电点的测定 |
| 3 结论与讨论 |
| 3.1 结论 |
| 3.2 讨论 |
（9）肉牛早孕因子（EPF）的活性检测及分离纯化（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1.1 早孕因子的本质与特性 |
| 1.2 早孕因子的来源 |
| 1.3 早孕因子的存在形式及存在位置 |
| 1.4 早孕因子的生物学作用 |
| 1.4.1 免疫抑制调节作用 |
| 1.4.2 生长调节中的作用 |
| 1.5 早孕因子的作用机理 |
| 1.5.1 早孕因子的免疫抑制作用 |
| 1.5.2 早孕因子的生长调节作用 |
| 1.6 早孕因子的应用 |
| 1.6.1 超早孕检测 |
| 1.6.2 胚胎监控 |
| 1.6.3 肿瘤细胞的早期诊断 |
| 1.6.4 免疫相关疾病方面的应用 |
| 1.7 早孕因子分离纯化 |
| 1.7.1 纯化方法一 |
| 1.7.2 纯化方法二 |
| 1.8 早孕因子活性的检测 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验主要仪器与材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂及配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 血样的采集与处理 |
| 2.2.2 牛外周血淋巴细胞悬液的制备 |
| 2.2.3 绵羊红细胞（SRBC）的制备 |
| 2.2.4 玫瑰花环形成率检测 |
| 2.2.5 早孕因子活性在孕牛体内最早可检测时间的测定 |
| 2.2.6 EPF 的分离与纯化 |
| 2.2.7 EPF 分离纯化结果的检测 |
| 2.2.8 EPF 等电点的测定 |
| 2.2.9 数据分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 肉牛血清中 EPF 活性的检测 |
| 3.2 早孕因子活性在孕牛体内最早可检测时间的测定 |
| 3.2.1 授精后不同时间肉牛血液中的早孕因子活性 |
| 3.2.2 肉牛授精后不同时间阴道粘液中的早孕因子活性 |
| 3.3 玫瑰花环形成情况 |
| 3.3.1 对照组 |
| 3.3.2 怀孕牛组 |
| 3.4 孕牛血清中EPF 的分离与纯化 |
| 3.4.1 DEAE-52 离子交换层析 |
| 3.4.2 ConA Sepharose 4B 亲和层析 |
| 3.4.3 Heparin Sepharose CL 6B 亲和层析 |
| 3.5 EPF 分离纯化结果的检测 |
| 3.6 EPF 等电点的测定 |
| 4 分析 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 硕士期间论文发表情况 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 |
（10）抗人早孕因子单克隆抗体的制备（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 EPF的本质和生化特性 |
| 1.2 EPF的产生 |
| 1.3 EPF的纯化 |
| 1.4 检测EPF的主要方法:玫瑰花环抑制实验 |
| 1.5 EPF与Hsp10的关系 |
| 1.6 EPF的免疫抑制作用 |
| 1.6.1 EPF抑制迟发型超敏反应 |
| 1.6.2 EPF抑制淋巴细胞的增殖 |
| 1.7 EPF的检测意义 |
| 1.7.1 EPF在免疫系统中的调控作用 |
| 1.7.2 EPF作为癌症的标志物 |
| 1.7.3 EPF作为胚胎的基本生存因子 |
| 1.7.4 EPF与自身免疫疾病的关系 |
| 1.8 其他的妊娠相关抑制因子 |
| 1.9 三种检测EPF方法的基本原理 |
| 1.10 单克隆抗体的原理 |
| 1.11 EPF的研究现状 |
| 1.12 EPF的免疫学研究进展 |
| 1.13 EPF诊断技术的研究进展 |
| 1.14 小结 |
| 2 缺失免疫抑制位点的早孕因子重组蛋白的表达及纯化 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 质粒、菌种、试剂和实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂配方 |
| 2.1.4 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 人EPF基因片段的PCR扩增 |
| 2.2.2 重组原核表达质粒的构建与鉴定 |
| 2.2.3 EPF11的诱导表达的优化 |
| 2.2.4 Western blot检测结果 |
| 2.2.5 重组蛋白的可溶性表达 |
| 2.2.6 表达蛋白的纯化 |
| 2.3 讨论 |
| 3 抗人早孕因子单克隆抗体的制备 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 质粒、菌种、试剂和实验动物 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.1.3 主要试剂配方 |
| 3.1.4 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 小鼠三免后效价测定结果 |
| 3.2.2 间接ELISA法鉴定血清特异性 |
| 3.2.3 杂交瘤细胞株的筛选 |
| 3.3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录A:英文缩略词表(Abbreviations) |
| 作者简历 |
| 学习经历 |
| 科研经历 |
| 硕士在读期间撰写和已发表的论文 |
| 致谢 |
四、早孕因子的研究现状及进展（论文参考文献）
- [1]奶牛早期妊娠诊断及妊娠相关糖蛋白（PAG）ELISA检测技术进展[J]. 王哲,王会岩. 畜牧与兽医, 2022(03)
- [2]牛早期妊娠诊断的研究进展[J]. 郭腾龙,汝振远,任尚,杨贤树,张翔栋,申屠璐燕,张运海,曹祖兵. 畜牧与兽医, 2021(08)
- [3]肉牛妊娠初期血、尿中孕酮、妊娠相关糖蛋白、早孕因子的变化[J]. 金海,赵拴平,徐磊,贾玉立,贾玉堂. 中国牛业科学, 2018(06)
- [4]基于EPF检测的奶牛早期妊娠诊断方法的研究[D]. 孙培培. 石河子大学, 2017(05)
- [5]奶牛早期妊娠诊断研究进展[J]. 卜建华,雷静,李艳艳,脱征军,梁小军. 宁夏农林科技, 2015(11)
- [6]绵羊早孕因子蛋白的表达及其多克隆抗体的制备[D]. 宋立峰. 河北农业大学, 2014(03)
- [7]绒山羊早孕因子的活性检测及分离纯化[J]. 张兴会,宋先忱,郭丹,韩迪. 现代畜牧兽医, 2013(11)
- [8]肉牛早孕因子（EPF）的活性检测及分离纯化[J]. 贺加双,马卫明,邓立新,宋移福,刘莲莲,曹永芝,谢冰. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2011(06)
- [9]肉牛早孕因子（EPF）的活性检测及分离纯化[D]. 贺加双. 山东农业大学, 2011(08)
- [10]抗人早孕因子单克隆抗体的制备[D]. 王林林. 郑州大学, 2011(04)