一、人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及免疫学特性分析（论文文献综述）
张淑婷,田海霞,刘青青,康行,樊卫平[1]（2020）在《人巨细胞病毒PP65抗原单克隆抗体的制备及鉴定》文中研究说明目的制备人巨细胞病毒（human cytomegalic virus, HCMV）PP65抗原的单克隆抗体,并通过免疫组化鉴定单克隆抗体与HCMV PP65抗原的反应性。方法诱导PQE30-PP65重组质粒表达PP65蛋白并Ni柱亲和层析纯化。PP65抗原免疫BALB/c小鼠,将血清抗体阳性小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,经HTS筛选,扩大培养获取单克隆抗体。经Protein A亲和层析纯化,并通过间接ELISA鉴定其特异性、效价及亚型。将制备的单克隆抗体应用于临床样本的玻片免疫组化检测。结果获得8株高特异性抗HCMV PP65抗原的单克隆抗体,其亚型均为IgG1型,轻链均为κ链,效价均在1∶2 048 000以上。其中6株单克隆抗体能够通过玻片免疫组化法准确鉴定HCMV激活性感染。结论成功制备了HCMV PP65单克隆抗体。单抗与白细胞中HCMV PP65抗原反应良好。
张淑婷[2]（2020）在《人巨细胞病毒PP65抗原单克隆抗体及纳米抗体的制备》文中认为目的:1.制备人巨细胞病毒（human cytomegalic virus,HCMV）PP65抗原的单克隆抗体,建立HCMV PP65抗原的免疫组化检测方法2.制备HCMV PP65抗原的纳米抗体,并初步鉴定其与PP65抗原的反应性方法:1.诱导PQE30-PP65重组质粒表达PP65抗原,免疫BALB/c小鼠。通过血清抗体阳性小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）的细胞融合,HTS筛选,扩大培养,亲和纯化获得单克隆抗体。对制备的单克隆抗体亚型、效价及特异性进行测定,并将其用于临床样本的玻片免疫组化检测。2.为获得HCMV PP65特异性纳米抗体,本研究以重组PP65蛋白为靶抗原对已构建的非免疫性噬菌体文库进行四轮淘筛后,采用间接ELISA法筛选出8株PP65特异性纳米抗体序列,并将序列构建入pClod低温诱导原核表达载体,进行纳米抗体的重组表达和纯化。进行大量制备,采用间接ELISA法验证制备的纳米抗体与PP65抗原的反应性。结果:1.将PQE30-PP65重组质粒转化至E.coli M15感受态细胞中。加入IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE鉴定,实验组在26-33kDa附近可见明显条带,与预期大小一致,说明重组质粒转化成功并可以表达目的蛋白。2.通过western-blot鉴定,在26-33kDa附近可见一条与HRP标记的抗His单克隆抗体结合的清晰条带,说明该蛋白为目的蛋白且带有his标签,可用镍柱进行纯化。3.对PQE30-PP65重组质粒进行大量诱导表达,超声破碎菌体,利用镍柱亲和层析法对目的蛋白进行纯化,纯化后样品经12%SDS-PAGE结果显示,在26-33kDa附近可见明显的单一条带,与预期大小一致,表明成功制备纯度较高的PP65蛋白。4.以PP65蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,选择血清效价最高的小鼠再次加强免疫。取免疫后的小鼠脾细胞,制备杂交瘤细胞,经过阳性杂交瘤细胞筛选及3次亚克隆化后,共筛选出8株高滴度的抗HCMV PP65特异性的单克隆抗体细胞株。5.对8株单克隆抗体纯化后进行纯度鉴定,经12%的SDS-PAGE检测,发现均可在50kDa左右看到单抗的重链,在25kDa附近看到单抗的轻链,表明纯化的单抗纯度较高。6.使用单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定试剂盒通过间接ELISA的方法鉴定抗体亚类,经鉴定,8株抗体的重链亚类均为IgG1型抗体,轻链均为κ链。7.通过间接ELISA法检测纯化后的8株单克隆抗体效价,确定8株单抗效价均达到1:1024000以上。8.将8株单克隆抗体分别与PP65蛋白及其他4种不同的无关蛋白进行酶联免疫吸附实验,检测其特异性,发现8株单抗与PP65蛋白反应的OD450-630值均明显高于其他无关蛋白。说明8株单抗均能很好的特异性识别PP65目的蛋白,而与其他蛋白的反应性较低,表现出良好的特异性。9.利用纯化后的8株单克隆抗体对临床已知的阳性及阴性标本进行免疫组化检测,证明其中6株单抗能够准确界定阳性及阴性感染。10.以PP65为筛选抗原,对非免疫文库进行四轮淘筛后筛选出8株抗原特异性的纳米抗体。11.将8株纳米抗体对应的基因序列插入pCold I原核表达载体,对8株纳米抗体进行表达鉴定。经SDS-PAGE和Werstern-blot鉴定,8株纳米抗体均与预期分子量大小一致,且能与HRP标记的小鼠抗His抗体结合,说明成功表达8株纳米抗体。12.将8株纳米抗体进行大量诱导表达,用镍柱亲和层析法进行纯化,用超滤离心管对目的蛋白进行缓冲体系置换和浓缩,对纯化后的样品进行SDS-PAGE鉴定,结果显示成功获得纯度较高的8株纳米抗体。13.通过间接ELISA的方法检测8株纳米抗体与PP65抗原的反应性。可见其中2株抗体与PP65抗原反应性较好。结论:1.制备了8株针对HCMV PP65抗原的单克隆抗体,其中6株能够通过玻片免疫组化准确鉴定HCMV激活性感染。研究结果为HCMV感染检测试剂盒的研发提供了材料。2.筛选并制备了2株针对HCMV PP65抗原的纳米抗体,为HCMV感染检测试剂的研发以及抗HCMV靶向药的载体研发提供了材料。
刘浩[3]（2020）在《光激化学发光分析法定性检测血清CMV-IgM抗体》文中进行了进一步梳理目的:巨细胞病毒（CMV）是全世界范围内可引起先天性和围生期感染的重要病原体之一,尽早确诊巨细胞病毒感染有助于优生优育、发病风险评估以及后期抗病毒治疗。目前临床上通常将血清CMV-Ig M抗体作为预防产妇围生期以及小儿先天性CMV感染的常用指标。为了改善传统方法干扰因素多,反应时间长,过程繁琐等缺点,本研究旨在基于光激化学发光分析法（Li CA）技术,以鼠抗人Ig M单克隆抗体、CMV重组抗原、发光微球以及感光微球等为实验原材料,建立检测血清CMV-Ig M抗体的一套完整的Li CA分析体系,为临床提供能够微量、便捷高效的检测血清CMV-Ig M抗体的研究平台。方法:1.血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的建立基于Li CA技术建立两种分析模式,确认血清CMV-Ig M抗体的最佳检测模式,并优化反应条件,包括反应缓冲液、抗原浓度、抗体和待检血清稀释比例、感光微球加样量、加样顺序等。（1）间接法分析模式检测血清CMV-Ig M抗体将CMV重组抗原包被的发光微球,生物素标记鼠抗人Ig M单克隆抗体和待检血清共同置于液相中温浴,获得发光微球（抗原）-待检血清（Ig M抗体）-生物素（第二抗体）的复合物;随后加入链霉亲和素包被的感光微球;最后检测偶联后的荧光信号并判定结果。（2）捕获法分析模式检测血清CMV-Ig M抗体将鼠抗人Ig M单克隆抗体包被的发光微球,生物素标记CMV重组抗原和待检血清共同置于液相中温浴,获得发光微球（第二抗体）-待测血清（Ig M抗体）-生物素（抗原）的复合物;加入链霉亲和素包被的感光微球,检测偶联后的荧光信号并判定结果。2.血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的检测性能评价对本研究探讨的Li CA-CMV-Ig M抗体的分析体系进行方法学评价,其中包括确定临界指数、精密度、特异性、干扰实验、类风湿因子、血浆与血清样本检测结果的一致性。并且分别利用本研究的分析体系和LIAISON-CMV-Ig M抗体分析体系检测100例临床样本,将二者的检测结果做比对和一致性分析以评估Li CA-CMV-Ig M抗体分析体系的临床应用价值。结果:1.血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的建立优选间接法作为Li CA检测血清CMV-Ig M抗体的最终分析模式,其分析体系由CMV抗原包被的发光微球、生物素标记鼠抗人Ig M单克隆抗体与链霉亲和素包被的感光微球共同组成。经过分析条件优化,采用缓冲液0.1 mol/L p H 8.0Tris-HCl缓冲液+0.3 mol/L Na Cl溶液+0.01%吐温-20+10 mg/m L BSA、CMV抗原包被的发光微球浓度2.50μg/ml、生物素标记鼠抗人Ig M单克隆抗体稀释比例1:500、待检血清稀释比例1:400、链霉亲和素包被的感光微球加样量175μl、Li CA一步法检测血清CMV-Ig M抗体作为该检测体系的最终工作条件。2.血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的检测性能评价本研究初步建立的Li CA-CMV-Ig M抗体分析体系具有良好的检测性能。该方法的批内和批间精密度分别5.3%～6.1%和6.9%～9.8%,均<10%;与弓形虫、风疹病毒等不存在交叉反应,证明该方法具有较高特异性;血红蛋白、胆红素、甘油三酯对实验的干扰作用均较小;ROC曲线分析显示,曲线下面积为0.997,灵敏度为100%,特异度为98.9%;在100例血清样本的检测中,本方法与LIAISON分析体系的结果总体符合率为95.0%,其中阳性符合率为92.5%,阴性符合率为96.7%,灵敏度为94.9%,特异度为95.1%;并且经一致性检验,kappa=0.895,P<0.01,二者之间无统计学差异。结论:本研究初步建立了基于Li CA技术采用间接法分析模式检测血清CMV-Ig M抗体,该检测方法操作简单、快速、灵敏度高,具有良好的分析性能,可为临床提供一种新的微量,便捷高效的检测血清CMV-Ig M抗体的新方法,进一步研发将有助于未来的临床推广应用。
贺美荣,张柳明,焦东丽,陕柏峰,樊卫平[4]（2020）在《自制人类巨细胞病毒检测试剂》文中提出目的制备重组人巨细胞病毒（HCMV）PP65蛋白,建立检测HCMV免疫球蛋白（Ig）G抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测方法。方法采用基因工程技术制备并纯化具有强抗原表位的HCMV重组PP65蛋白;包被酶标板,方阵滴定法优化各步检测条件,建立检测HCMV IgG抗体的ELISA检测方法;确定批内、批间变异系数;通过检测是否与单纯疱疹病毒（HSV）、EB病毒（EBV）阳性血清发生交叉反应进一步验证试剂的特异度;通过对100份样品的检测与市售进口HCMV IgG检测试剂进行了符合率比较。结果成功研制了检测HCMV IgG抗体的间接ELISA检测方法。结论建立的检测HCMV IgG抗体的ELISA检测方法可以推广到临床。
曾健雄[5]（2019）在《HCMV UL124基因生物信息学分析及多克隆抗体的制备和检测》文中研究说明人巨细胞病毒（HCMV）是一种广泛存在的病原体,会感染世界上大多数人群。和其它疱疹病毒一样,HCMV可引起生产性和潜伏性感染。对于免疫力正常的宿主,HCMV潜伏感染通常是无症状的,然而当宿主免疫力异常时,则会引起多种疾病甚至死亡。HCMV潜伏期已经进行了几十年的研究,但对于其潜伏的分子机制仍然只有有限的了解。HCMV UL124基因是在病毒潜伏感染的细胞中被发现,属于反义潜伏转录物之一,推测其在病毒建立和维持潜伏期发挥作用。然而到目前为止,对于该基因的研究仍然很少。为了能够更加深入认识和研究UL124基因,本研究进行了生物信息学分析和多克隆抗体的制备及检测,这为后续研究奠定基础。具体研究如下:1.利用生物信息学相关软件和网站,预测UL124基因编码蛋白的基本性质以及相应的结构与功能,分析UL124基因的免疫性特性和gene ontology,研究UL124基因的同源性和多态性。结果表明UL124蛋白分子量大约为15kDa,为疏水性蛋白,N端含有信号肽,80-100氨基酸区域含有跨膜域和螺旋结构,非跨膜区域含有多个糖基化位点和磷酸化位点。免疫学特性分析筛选出两条抗原性强的表位肽,可用于后续抗体制备等研究。Gene ontology预测显示该蛋白和膜结构相关,主要通过蛋白间相互作用发挥功能。UL124基因及其编码氨基酸同源性和多态性分析表明,该基因在HCMV不同病毒株间保守性很高,在CMV和β疱疹病毒中保守性不高,但在结构上有一定相似性。2.利用HCMV TB40/E文库成功克隆出UL124基因全长,表达得到重组蛋白,且基本为包涵体。优化表达条件,确定最佳表达温度为30℃,最佳IPTG浓度为0.8mM,最佳表达时间为6h。通过优化后的条件,培养得到足够重组蛋白。重组蛋白经镍柱亲和层析法纯化,然后经过透析除盐和超滤浓缩后免疫新西兰大白兔,最后采血用ELISA检测效价。效价达105,然后收集兔子全身血并经过纯化得到纯度较高的多克隆抗体。利用制备的多克隆抗体检测到UL124基因在293T细胞中的过表达,另外也检测到其在HCMV潜伏期和裂解期都存在转录和表达,同时发现其定位于细胞核周围。
王蒙[6]（2017）在《人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及重组蛋白的抗原特性分析》文中认为人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）在自然界中广泛存在,属于疱疹病毒科的双链DNA病毒。研究表明,HCMV参与多种疾病的发生,尤其易造成免疫系统缺陷人群的感染以及胎儿的感染。由于HCMV感染所引发的严重疾病日益增加,学者开始致力于研究关于HCMV感染的防治工作。HCMV的药物治疗方法会产生较强的副作用,因此制备HCMV疫苗是当下防治HCMV最有效的方法。包膜糖蛋白B（Glycoprotein B,gB）和外被磷蛋白65（Phosphoprotein65,pp65）是目前研究最多的,也是被证明能分别产生较强的体液免疫和细胞免疫反应的两种靶蛋白。根据文献及生物信息学方法分析,pp65蛋白的490-508位氨基酸序列和gB蛋白的607-621位氨基酸序列具有较强的免疫原性,是HCMV的免疫优势表位。本研究分别选取pp65蛋白的490-508aa和gB蛋白的607-621aa的基因片段,人工合成编码基因;以合成编码基因序列作为模板,经PCR扩增后,连接表达载体pET-32a（+）,转化BL21（DE3）plys菌株,表达成融合蛋白,通过Ni柱亲和层析法纯化目的蛋白,得率为30.5%。纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,分离血清,Western blotting法测抗体的特异性,结果显示抗体具有较好的特异性。间接ELISA法测得抗体的效价为1:102400,建立了HCMV间接ELISA检测方法。结果显示重组蛋白能诱导小鼠产生较强的体液免疫反应。用流式细胞仪测得免疫后小鼠外周血中CD4+T细胞和CD8+T细胞的数量分别是48.65%和16%,与对照组（38.05%和13.15%）相比,数量有显着提高（P<0.01）;用双抗夹心ELISA法测得小鼠血清中IFN-γ,IL-2,IL-12的含量分别是2.39 pg/L,87.07ng/L,188.02 ng/L,与对照组（1.85 pg/L,52.95 ng/L,88.51 ng/L）相比,含量有显着提高（P<0.01）。因此重组蛋白能诱导小鼠产生较强的细胞免疫反应。综上所述,通过制备含有pp65蛋白和gB蛋白优势抗原表位基因的融合蛋白,可以使小鼠产生较强的体液免疫反应和细胞免疫反应;可作为HCMV亚单位疫苗,有效防治HCMV感染,为今后相关疫苗研究以及HCMV相关疾病的防治奠定基础。
赖伟健[7]（2017）在《肠道病毒71型的检测与分型及人类巨细胞病毒包膜蛋白UL115原核表达与分离纯化》文中研究表明1.2012年沙窝镇手足口病疫情中肠道病毒71型的检测与分型肠道病毒71型（EV71）感染人后通常会伴随手足口病的发生。在中国,每年有成千上万的儿童感染肠道病毒71型,该病毒严重影响公众的健康。研究肠道病毒71型的病毒学特性对预防与控制手足口病的爆发是十分关键的。本实验研究报道了2012年9月至10月期间湖北沙窝镇感染手足口病的105个患儿的情况。实验通过反转录PCR技术,荧光定量PCR技术,分离及培养病毒技术来检测病毒。对肠道病毒71型的VP1基因进行测序分析,同时构建系统进化树对肠道病毒71型进行基因分型。病例表明,多于90%的患儿小于9周岁,3-6周岁大的患儿比例占50%左右。患儿普遍感染肠道病毒71型,表明在沙窝镇爆发的手中口病大多数是肠道病毒71型的感染并引起相关的并发症。这些手足口病的病例中,有66位确诊是肠道病毒感染引起的,48位患儿被肠道病毒71型感染,另外,柯萨奇病毒A16型感染患儿数目达到16位。测序与进化树分析结果表明,沙窝镇出现的肠道病毒71型病毒株属于C4基因亚型。值得注意的是,沙窝与南昌的地理距离较远,而与武汉的地理距离较近,但是,系统进化分析显示沙窝出现的肠道病毒71型病毒株,与曾经爆发过手足口病的南昌的肠道病毒71型病毒株的遗传距离较为接近,但与同样曾经爆发过手足口病的武汉的肠道病毒71型病毒株的遗传距离较远。沙窝镇感染手足口病的患儿中,女患儿感染肠道病毒71型的比例较高。然而,曾经出现肠道病毒感染的武汉和南昌,男患儿感染肠道病毒71型的比例较高。通过该实验研究,加深了对肠道病毒的认识,特别是在中国引起流行性手足口病的肠道病毒。本实验对预防与控制肠道病毒的的爆发有很大的研究意义。2.人类巨细胞病毒包膜蛋白UL115原核表达与分离纯化人巨细胞病毒（HCMV）,是感染人类的一种疱疹病毒。对于免疫系统发育不全和免疫抑制患者可引起相关病症,甚至致死。HCMV拥有20个以上的包膜蛋白,它们位于病毒的最外层,与病毒趋向性,吸附,融合,子代病毒包装,成熟,传播过程密切相关。了解清楚HCMV包膜蛋白的结构,生物学功能,可为病毒的生物学机制提供新的认识,加深病毒与宿主间关系的理解。同时提供新的思路去设计,研发抗人巨细胞病毒的相关药物,并且对病毒疫苗的研制,具有重要的研究基础和临床意义。UL115（g L）蛋白是包膜蛋白的其中一员,UL115包膜蛋白作为外来抗原,除了具有良好的免疫反应性外,还有免疫原性,可为制备相应的抗原诊断单克隆抗体和开发HCMV快速诊断试剂盒提供可选原料。因此,研究HCMV-UL115生物学功能对阐明HCMV致病机制及疫苗的研制是有重要价值的。本实验首先通过常规PCR技术克隆UL115基因,接着构建UL115克隆重组菌株以及重组表达菌株,成功表达带有组氨酸标签的UL115重组蛋白。经实验鉴定,该重组蛋白在原核细胞内,以包涵体形式表达。在此基础上,浅层摸索优化了表达菌株的表达条件。本实验的摸索的较好诱导表达重组蛋白的条件为:31℃,0.03 m M/L IPTG,诱导时间9 h。经过镍柱分离纯化,获得该重组蛋白。使用BCA法对初步纯化的UL115重组蛋白进行定量,该重组蛋白浓度可达到0.105μg/μl。本实验成功构建UL115重组蛋白原核表达体系,并且探索了表达体系表达条件,分离纯化后获得该重组蛋白。这为研究UL115蛋白单克隆抗体相关生物学功能打下基础,对诊断检测试剂盒和疫苗的研制有重要意义,同时也为其他包膜蛋白的原核表达提供了相关实验经验。
陈武娟,贺美荣,杨蓉,李娜,樊卫平[8]（2017）在《人类巨细胞病毒IgG抗体ELISA检测试剂的研制》文中研究指明目的建立并评价人类巨细胞病毒PP65 Ig G抗体间接ELISA检测试剂。方法原核表达并纯化重组HCMV PP65332561蛋白,包被酶标板,优化试剂检测条件,试制HCMV-Ig G间接ELISA试剂,分析试剂的精密度,并通过对100份样本的检测,与市售进口HCMV-Ig G间接ELISA试剂比较,分析了自制试剂的特异性、敏感性和符合率。结果试制的ELISA试剂批内和批间变异度均小于10%,与其他疱疹病毒感染血清均无交叉反应;与进口试剂的总符合率达到95%。结论该方法具有良好的特异性、敏感性,稳定性和可重复性,为HCMV病毒感染的流行病学调查提供了新的备选方法。
彭杰雄,谭洪,陆建国,林连成,邓兆享,林文浩[9]（2015）在《人巨细胞病毒pp65基因片段的原核表达及鉴定》文中研究说明目的利用基因工程方法表达人巨细胞病毒pp65基因片段,并对表达的目的蛋白进行鉴定。方法根据genebank所查的HCMV PP65基因和相关文献选取特异性反应的基因片断,PCR扩增目的基因,将PCR产物切胶回收后与pET-28a载体连接,转化BL21,筛选。对重组质粒进行诱导表达,采用ELISA间接法鉴定纯化的GST/pp65融合蛋白的抗原性进行鉴定。结果目的蛋白经诱导后表达于上清液中,经鉴定目的蛋白具有预期的抗原活性。结论 GST/pp65融合蛋白的获得,为进一步研制以重组蛋白代替传统的全病毒作为检测抗原的新型人巨细胞病毒特异性免疫学检测试剂盒奠定了基础。
黄超洋[10]（2015）在《巨细胞病毒IE-1亚单位疫苗和核酸疫苗的免疫保护研究》文中研究表明人巨细胞病毒（HCMV）感染新生儿、艾滋病人和器官移植病人等免疫低下人群后,易引起严重的HCMV相关疾病。接种疫苗是控制病毒感染的最好手段,然而目前研究的HCMV疫苗免疫效果欠佳,尚未应用于临床。HCMV抗原能否提供有效的抗感染保护以及采用怎样的免疫策略,是很值得探讨的问题。本文根据前期的大量准备和实验基础,以鼠巨细胞病毒（MCMV）感染小鼠为模型,选择与HCMV同源的MCMV即刻早期蛋白IE-1的DNA疫苗和蛋白疫苗为研究对象,探讨以下问题:1)原核表达的rIE-1蛋白疫苗免疫小鼠后诱导的免疫应答和抗致死剂量MCMV感染的保护效果,以及通过不同途径（腹腔注射或滴鼻途径）免疫小鼠后的保护效果;2)IE-1 DNA疫苗和rIE-1蛋白疫苗联合免疫小鼠后诱导的免疫应答和保护效果;3)包括IE-1 DNA在内的五种表达不同抗原的DNA疫苗在小鼠中提供免疫保护的能力。论文由以下五个部分组成:（一）引言简单综述HCMV及其致病性与免疫性、疫苗的研究进展、主要基因和编码蛋白特征功能、以及针对IE-1的免疫应答对宿主的潜在保护力等;（二）即刻早期蛋白IE-1的原核表达将MCMV IE-1基因插入原核表达质粒p ET28a,经IPTG诱导在大肠杆菌中表达纯化出重组蛋白rIE-1,对rIE-1的诱导条件进行优化以及纯化后对rIE-1作简单鉴定;（三）IE-1亚单位疫苗抗病毒感染的研究以不同剂量的rIE-1蛋白疫苗经腹腔注射或滴鼻途径免疫小鼠两次,免疫后以致死剂量（3×LD50）的高毒力SG-MCMV攻击小鼠。该疫苗免疫均可在小鼠体内诱导出MCMV IE-1特异性的体液免疫和细胞免疫,并且应答水平与疫苗的剂量呈剂量相关性。小鼠在攻毒后体重丢失减少且脾脏中病毒滴度降低。经腹腔免疫的小鼠存活率最高为87.5%,而经滴鼻免疫的小鼠存活率最高仅为25%,说明rIE-1蛋白经腹腔免疫途径诱导的保护效果优于滴鼻免疫。同时,为了增强rIE-1蛋白疫苗的免疫效果,我们分别以rIE-1蛋白+MF59佐剂经腹腔免疫小鼠和rIE-1蛋白+CTB*粘膜佐剂经滴鼻免疫小鼠。结果表明加了MF59佐剂的rIE-1蛋白疫苗诱导小鼠产生的IE-1特异性IgG抗体滴度、分泌IFN-γ的CD8+T细胞数目与相同剂量rIE-1单独免疫的小鼠相比均显着上升;加了CTB*佐剂后免疫的小鼠比单独免疫的小鼠产生的IE-1特异性IgG滴度、分泌IFN-γ的CD8+T细胞数目有显着性差异。辅以两种佐剂后rIE-1蛋白疫苗相比单独蛋白疫苗能提供小鼠更好的抗MCMV保护力,减少体重丢失,显着降低脾脏中病毒滴度,但是小鼠脾脏中仍能检测到病毒。更重要的是添加了MF59佐剂的rIE-1蛋白疫苗经腹腔注射可以提供小鼠完全保护力,而辅以CTB*佐剂的rIE-1蛋白提供小鼠的保护力不超过50%。本实验证明了rIE-1蛋白具有较好的免疫原性,添加了MF59或CTB*佐剂的rIE-1蛋白疫苗免疫小鼠,IE-1特异性的体液应答和T细胞应答水平均显着上升;同时腹腔注射小鼠提供的免疫保护优于滴鼻免疫,单独或辅以佐剂后能提供小鼠抗MCMV感染的保护力,特别是MF59/rIE-1可提供小鼠抗MCMV感染的完全保护。（四）IE-1核酸疫苗和亚单位蛋白疫苗联合免疫抗病毒感染的研究小鼠用IE-1 DNA疫苗（D1组）或rIE-1蛋白疫苗（P1组）免疫一次,或以IE-1 DNA初免接着以rIE-1蛋白加强一次（D1P1组）,或蛋白疫苗免疫二次（P2组）。DNA疫苗采用肌肉注射辅以电击方式接种,而rIE-1蛋白分别采用腹腔注射或滴鼻免疫方式接种小鼠。免疫后用致死量（3LD50）病毒攻击小鼠。结果表明,pIE-1 DNA单独免疫一次,诱导小鼠产生了较高的CD8+T细胞数目,并提供小鼠37.5%的保护。而当rIE-1蛋白疫苗采用腹腔途径免疫时,P1、P2和D1P1组小鼠保护率和CD8+T细胞数目依次增加,脾脏中病毒滴度依次下降;D1P1组小鼠CD8+T细胞数目分别和前两组小鼠之间有显着性差异;D1P1组（100%）或P2组（75%）小鼠的存活率相比对照组（0%）小鼠存活率显着上升。当rIE-1蛋白采用滴鼻方式免疫后,各组小鼠存活率与对照组小鼠相比无显着性差异,D1P1组小鼠存活率最高,达到50%;P1、P2和D1P1三组小鼠CD8+T细胞数目依次增加,脾脏中病毒滴度依次下降;并且D1P1组小鼠脾脏病毒滴度和P1组小鼠之间有显着性差异。本实验证明了IE-1 DNA疫苗和蛋白联合免疫的“异源初免-加强”策略相比蛋白单独免疫能增强小鼠的T细胞应答,降低脾脏中的病毒滴度,相比IE-1DNA疫苗和蛋白疫苗单独免疫能提供更好的保护力。（五）几种核酸疫苗的免疫保护效果比较克隆五个MCMV基因（m04、M84、M105、IE-1和M55）,分别构建成五种DNA疫苗,其中前四种分别编码MCMV gp34、p65、DNA解旋酶和IE-1 pp89（IE-1）蛋白,这些抗原主要诱导CD8+T细胞应答,而M55编码gB蛋白,是中和抗体的诱导者。小鼠分别经DNA疫苗免疫1～4次,随后用免疫后用致死量（3LD50）病毒攻击小鼠。结果发现,M84DNA免疫一次以上或m04、IE-1免疫两次以上,能使小鼠在致死剂量MCMV感染后存活率达到100%,而免疫M55或M105 DNA疫苗四次小鼠存活率为62.5%;这些DNA疫苗能有效降低唾液腺和脾脏器官中的病毒滴度,但不能完全清除器官中的残留病毒。本研究表明DNA疫苗能有效提供小鼠抗高毒力MCMV的感染,通过诱导的CD8+T免疫提供的保护效果优于gB特异性抗体。本文的研究成果可为HCMV疫苗的研发提供一些有益的参考。
二、人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及免疫学特性分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及免疫学特性分析（论文提纲范文）
（1）人巨细胞病毒PP65抗原单克隆抗体的制备及鉴定（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞、质粒、菌株和实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 抗原制备 |
| 1.4 动物免疫 |
| 1.5 杂交瘤细胞的建立 |
| 1.6 单克隆抗体的制备与纯化 |
| 1.7 单克隆抗体特性鉴定 |
| 1.7.1 单抗特异性鉴定 |
| 1.7.2 单抗效价测定 |
| 1.7.3 单抗亚型鉴定 |
| 1.8 单抗与HCMV PP65抗原反应性的免疫组化鉴定 |
| 1.8.1 样本来源及处理 |
| 1.8.2 单抗对玻片固定的白细胞内HCMV |
| 1.8.3 8株单抗对相同阳性及阴性标本鉴定的比较 |
| 1.9 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组蛋白的诱导表达与纯化 |
| 2.2 抗体的制备 |
| 2.3 抗体纯度的鉴定 |
| 2.4 特异性的鉴定 |
| 2.5 抗体效价的检测 |
| 2.6 抗体亚类的鉴定 |
| 2.7 单抗与HCMV PP65抗原反应性的免疫组化鉴定 |
| 3 讨论 |
（2）人巨细胞病毒PP65抗原单克隆抗体及纳米抗体的制备（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 人巨细胞病毒PP65抗原单克隆抗体的制备及免疫组化检测方法的建立 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 细胞 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要试剂配方 |
| 2 方法 |
| 2.1 抗原制备 |
| 2.2 动物免疫 |
| 2.3 小鼠血清抗体效价检测 |
| 2.4 杂交瘤细胞的建立 |
| 2.5 杂交瘤细胞株的筛选 |
| 2.6 单克隆抗体的制备与纯化 |
| 2.7 单克隆抗体特性鉴定 |
| 2.8 PP65 抗原免疫组化检测法的建立 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 重组PP65 抗原的鉴定 |
| 3.2 重组PP65 抗原的纯化 |
| 3.3 单克隆抗体的制备 |
| 3.4 单克隆抗体特性鉴定 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 抗人巨细胞病毒PP65 抗原新型纳米抗体的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要试剂配方 |
| 2 方法 |
| 2.1 非免库的淘筛 |
| 2.2 抗PP65 蛋白特异性纳米抗体的筛选 |
| 2.3 抗PP65 蛋白特异性纳米抗体的制备 |
| 3 结果 |
| 3.1 抗HCMV PP65 蛋白纳米抗体的筛选 |
| 3.2 抗HCMV PP65 蛋白纳米抗体的诱导鉴定 |
| 3.3 抗HCMV PP65 蛋白纳米抗体的表达与纯化 |
| 3.4 纳米抗体与PP65 抗原反应性的初步鉴定 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）光激化学发光分析法定性检测血清CMV-IgM抗体（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的建立 |
| 1 对象与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 化学试剂 |
| 1.3 生物试剂 |
| 1.4 试剂配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 确定检测体系 |
| 2.2 抗原抗体最佳组合 |
| 2.3 分析体系优化 |
| 2.4 检测体系的建立 |
| 3 小结 |
| 二、血清CMV-Ig M抗体光激化学发光分析法的检测性能评价 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 检测性能验证 |
| 2.2 临床应用价值 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 巨细胞病毒感染与血清学检测研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）自制人类巨细胞病毒检测试剂（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 HCMV PP65重组蛋白的制备 |
| 1.3.2 HCMV IgG间接ELISA方法的基本流程 |
| 1.3.3 间接ELISA反应条件优化 |
| 1.3.3. 1 抗原最佳包被浓度及血清稀释度优化： |
| 1.3.3. 2 抗原最佳包被条件优化： |
| 1.3.3. 3 最佳封闭液优化： |
| 1.3.3. 4 待测血清样品最佳作用时间优化： |
| 1.3.3. 5 酶标二抗最适稀释倍数优化： |
| 1.3.3. 6 酶标二抗最适工作时间优化： |
| 1.3.4 临界值的确定 |
| 1.3.5 特异度分析 |
| 1.3.6 可靠性分析 |
| 1.3.7 符合率分析 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（5）HCMV UL124基因生物信息学分析及多克隆抗体的制备和检测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 人巨细胞病毒(HCMV)概述 |
| 1.2 HCMV潜伏期简介 |
| 1.3 UL124 基因研究进展 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 1.5 研究技术路线 |
| 第二章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 HCMV UL124 基因生物信息学分析 |
| 3.2 pET32a(+)-UL124 重组表达载体的构建 |
| 3.3 重组蛋白的原核表达 |
| 3.4 重组蛋白镍柱纯化 |
| 3.5 多克隆抗体的制备和纯化 |
| 3.6 UL124 基因在293T细胞中的检测 |
| 3.7 UL124 基因在HCMV潜伏期的检测 |
| 3.8 UL124 基因在HCMV裂解期的检测 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 总结和展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间学术交流和发表的论文 |
| 致谢 |
（6）人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及重组蛋白的抗原特性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 人巨细胞病毒 |
| 1.1.1 人巨细胞病毒概述 |
| 1.1.2 人巨细胞病毒的感染及危害 |
| 1.1.3 人巨细胞病毒中免疫原性蛋白质 |
| 1.2 人巨细胞病毒诱导的免疫反应 |
| 1.2.1 体液免疫 |
| 1.2.2 细胞免疫 |
| 1.3 人巨细胞病毒的防治 |
| 1.3.1 化学药物 |
| 1.3.2 中药 |
| 1.3.3 毒性T淋巴细胞和免疫球蛋白 |
| 1.3.4 人巨细胞病毒疫苗 |
| 1.4 本论文的研究思路和研究内容 |
| 2 重组HCMV抗原表位的基因克隆、原核表达及产物纯化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 主要仪器 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 pp65_(490-508-g)B_(607-621) 基因的获得 |
| 2.3.2 pET-32a-pp65_(490-508-g)B_(607-621) 重组质粒的构建 |
| 2.3.3 重组质粒的诱导表达 |
| 2.3.4 重组蛋白的分离纯化 |
| 2.3.5 SDS-PAGE检测重组蛋白的表达 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 PCR扩增目的基因片段 |
| 2.4.2 重组质粒pET-32a-pp65_(490-508-g)B_(607-621) 的构建及双酶切验证 |
| 2.4.3 重组蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 3 重组蛋白的体液免疫效果评价 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 主要仪器 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 动物免疫 |
| 3.3.2 Western blot法检测抗血清的特异性 |
| 3.3.3 间接ELISA方法的建立 |
| 3.3.4 间接ELISA法测定抗血清的效价 |
| 3.3.5 双抗夹心ELISA法检测抗原特异性 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Western blot检测抗血清的特异性 |
| 3.4.2 间接ELISA方法的建立 |
| 3.4.3 间接ELISA法测定抗血清的效价 |
| 3.4.4 双抗夹心ELISA法检测抗原特异性 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 重组蛋白的细胞免疫效果评价 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 主要仪器 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 收集血清抗凝血 |
| 4.3.2 流式细胞仪检测 |
| 4.3.3 小鼠血清中IFN-γ 浓度的测定 |
| 4.3.4 小鼠血清中IL-2 浓度的测定 |
| 4.3.5 小鼠血清中IL-12 浓度的测定 |
| 4.3.6 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 流式细胞仪检测 |
| 4.4.2 小鼠血清中IFN-γ 浓度的测定 |
| 4.4.3 小鼠血清中IL-2 浓度的测定 |
| 4.4.4 小鼠血清中IL-12 浓度的测定 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 缩略语表及名称说明 |
| 附录B pET-32(a)载体质粒 |
| 附录C pET-32a-pp65_(490-508-g)B_(607-621) 测序结果 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（7）肠道病毒71型的检测与分型及人类巨细胞病毒包膜蛋白UL115原核表达与分离纯化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一篇 2012年沙窝镇手足口病疫情中肠道病毒71型的检测与分型 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 肠道病毒概述 |
| 1.2 肠道病毒71型概述 |
| 1.3 肠道病毒71型病毒结构与基因分型 |
| 1.4 肠道病毒71型毒力位点及宿主对病毒的免疫应答 |
| 1.5 肠道病毒相关检测技术概述 |
| 1.6 肠道病毒71型治疗药物以及疫苗研究进展 |
| 1.7 课题研究设计 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 2.1 主要实验仪器和设备 |
| 2.2 主要实验材料 |
| 2.3 主要实验溶液和试剂 |
| 2.4 实验方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 实验设计 |
| 3.2 沙窝镇在中国所处的地理位置 |
| 3.3 肠道病毒，肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的检测 |
| 3.4 手足口病以及相关肠道病毒感染的患儿随时间变化分布特点 |
| 3.5 手足口病患儿的年龄分布 |
| 3.6 感染相关肠道病毒患儿的年龄分布 |
| 3.7 手足口病患儿性别比例情况 |
| 3.8 手足口病临床症状 |
| 3.9 手足口病患儿临床症状平均消退恢复时间 |
| 3.10 沙窝镇手足口病患儿地理分布情况 |
| 3.11 肠道病毒71型VP1基因部分序列分析 |
| 3.12 肠道病毒71型VP1基因系统进化分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 本文结论 |
| 5.2 实验设想与展望 |
| 5.3 安全信息 |
| 参考文献 |
| 第二篇 人类巨细胞病毒包膜蛋白UL115原核表达与分离纯化 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 疱疹病毒及人类巨细胞病毒概述 |
| 1.2 人类巨细胞病毒基因多样性概述 |
| 1.3 人类巨细胞病毒对宿主细胞的趋向性概述 |
| 1.4 人类巨细胞病毒吸附和融合机制概述 |
| 1.5 人类巨细胞病毒潜伏感染和增殖性感染机制概述 |
| 1.6 人类巨细胞病毒DNA复制，病毒组装，成熟机制概述 |
| 1.7 人类巨细胞病毒逃避人体免疫机制概述 |
| 1.8 母体感染人类巨细胞病毒对婴儿感染机制的概述 |
| 1.9 人类巨细胞病毒预防与检测 |
| 1.10 人类巨细胞病毒治疗研究 |
| 1.11 课题研究思路 |
| 第二章 实验材料和方法 |
| 2.1 主要实验仪器设备 |
| 2.2 主要实验材料 |
| 2.3 主要实验溶液和试剂 |
| 2.4 实验方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 UL115基因PCR |
| 3.2 pET32a质粒双酶切鉴定 |
| 3.3 重组质粒克隆菌菌落PCR鉴定 |
| 3.4 克隆菌重组质粒双酶切鉴定 |
| 3.5 克隆菌重组质粒样品测序 |
| 3.6 重组质粒表达菌菌落PCR鉴定 |
| 3.7 表达菌重组质粒双酶切鉴定 |
| 3.8 表达菌重组质粒样品测序 |
| 3.9 UL115重组蛋白表达鉴定以及表达状态鉴定 |
| 3.10 不同温度培养对UL115重组蛋白表达量试验 |
| 3.11 不同浓度IPTG诱导UL115重组蛋白表达试验 |
| 3.12 不同培养时间与UL115重组蛋白表达量试验 |
| 3.13 UL115重组蛋白质初步分离纯化 |
| 3.14 UL115重组蛋白的定量 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 本文结论 |
| 5.2 实验设想与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（8）人类巨细胞病毒IgG抗体ELISA检测试剂的研制（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 HCMV PP65322~56l重组蛋白的制备 |
| 1.3 HCMV-Ig G ELISA检测方法的建立和优化 |
| 1.3.1 最适蛋白包被质量浓度和待测血清稀释倍数的选择 |
| 1.3.2 包被温度与时间、封闭液及显色时间的选择 |
| 1.3.3 临界值的确定 |
| 1.3.4 检测步骤 |
| 1.4 特异性检测 |
| 1.5 精密度分析 |
| 1.6 符合率分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组抗原表达及纯化 |
| 2.2 最适蛋白包被质量浓度和待测血清稀释倍数的选择 |
| 2.3 包被温度与时间、封闭液及显色时间的选择 |
| 2.4 临界值的确定 |
| 2.5 特异性检测 |
| 2.6 精密度分析 |
| 2.7 符合率检验 |
| 3 讨论 |
（9）人巨细胞病毒pp65基因片段的原核表达及鉴定（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 2结果 |
| 3讨论 |
（10）巨细胞病毒IE-1亚单位疫苗和核酸疫苗的免疫保护研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1 HCMV简介 |
| 1.1 HCMV生物特征 |
| 1.2 HCMV的致病性 |
| 2 HCMV诱导的免疫应答 |
| 2.1 HCMV诱导的免疫应答 |
| 2.2 HCMV和 MCMV的免疫逃逸机制 |
| 3 HCMV的疫苗研究 |
| 3.1 HCMV候选疫苗的研究 |
| 3.2 HCMV疫苗佐剂 |
| 3.3 HCMV疫苗研究中的动物模型 |
| 4 即刻早期蛋白IE-1简介 |
| 4.1 IE-1基因及表达产物 |
| 4.2 HCMV IE-1 特异性免疫应答的保护作用 |
| 5 本研究的内容与意义 |
| 第二章 即刻早期蛋白IE-1的原核表达 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 IE-1 基因PCR产物和pET28a/IE-1 的鉴定 |
| 2.2 rIE-1蛋白表达条件的优化 |
| 2.3 诱导的rIE-1蛋白可溶性鉴定 |
| 2.4 纯化过程中杂蛋白和rIE-1的洗脱效果 |
| 2.5 SDS-PAGE和 Western Blot检测超滤纯化的rIE-1 蛋白 |
| 2.6 rIE-1蛋白的浓度检测 |
| 3 讨论 |
| 第三章 IE-1亚单位疫苗抗病毒感染的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 rIE-1单独或辅以佐剂免疫对小鼠的保护效果 |
| 2.2 rIE-1单独或辅以佐剂免疫后小鼠体内的免疫应答 |
| 3 讨论 |
| 第四章 IE-1核酸疫苗和亚单位蛋白疫苗联合免疫抗病毒感染的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 pIE-1 核酸疫苗和rIE-1 蛋白疫苗联合免疫后对小鼠的保护效果 |
| 2.2 pIE-1 核酸疫苗和rIE-1 蛋白疫苗联合免疫后体内的免疫应答 |
| 3 讨论 |
| 第五章 几种核酸疫苗的免疫保护效果比较 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 小鼠抗致死剂量SG-MCMV感染的存活率 |
| 2.2 致死剂量SG-MCMV感染后小鼠的体重变化 |
| 2.3 攻毒后小鼠器官中病毒滴度 |
| 2.4 DNA疫苗诱导的体液免疫 |
| 2.5 DNA疫苗诱导的细胞免疫 |
| 3 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 缩写表 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
四、人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及免疫学特性分析（论文参考文献）
- [1]人巨细胞病毒PP65抗原单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 张淑婷,田海霞,刘青青,康行,樊卫平. 第三军医大学学报, 2020(12)
- [2]人巨细胞病毒PP65抗原单克隆抗体及纳米抗体的制备[D]. 张淑婷. 山西医科大学, 2020(12)
- [3]光激化学发光分析法定性检测血清CMV-IgM抗体[D]. 刘浩. 天津医科大学, 2020(06)
- [4]自制人类巨细胞病毒检测试剂[J]. 贺美荣,张柳明,焦东丽,陕柏峰,樊卫平. 实用医技杂志, 2020(02)
- [5]HCMV UL124基因生物信息学分析及多克隆抗体的制备和检测[D]. 曾健雄. 暨南大学, 2019(02)
- [6]人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及重组蛋白的抗原特性分析[D]. 王蒙. 大连理工大学, 2017(04)
- [7]肠道病毒71型的检测与分型及人类巨细胞病毒包膜蛋白UL115原核表达与分离纯化[D]. 赖伟健. 暨南大学, 2017(02)
- [8]人类巨细胞病毒IgG抗体ELISA检测试剂的研制[J]. 陈武娟,贺美荣,杨蓉,李娜,樊卫平. 免疫学杂志, 2017(04)
- [9]人巨细胞病毒pp65基因片段的原核表达及鉴定[J]. 彭杰雄,谭洪,陆建国,林连成,邓兆享,林文浩. 国际检验医学杂志, 2015(16)
- [10]巨细胞病毒IE-1亚单位疫苗和核酸疫苗的免疫保护研究[D]. 黄超洋. 湖南师范大学, 2015(04)