一、人早孕绒毛膜匀浆和脐静脉内皮细胞对早期鼠胚体外发育的影响（论文文献综述）
王晶[1]（2018）在《资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞质量影响的分子机制研究》文中指出第一部分资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞体外受精、体外成熟结局的影响目的:探讨资冲颗粒（ZCKL）对反复超促排卵小鼠卵母细胞质量的影响,并以此作为评价卵母细胞质量的形态学指标。方法:将90只雌性小鼠适应性喂养5天,选用连续观察两个动情周期均正常的75只小鼠纳入实验。随机分为5组:5次促排组（P/H×5 Group）、单次促排组（P/H×1Group）、自然周期组（Control Group）、5次促排+ZCKL高剂量组（ZCKL High Group）、5次促排+ZCKL低剂量组（ZCKL Low Group）,每组15只。反复超促排卵动物模型的造模方法:每个超促排卵周期的第一天下午6时,小鼠腹腔注射PMSG 5IU,48h后即第三天下午6时腹腔注射HCG 5IU,此为一个超促排卵周期,间隔3天,重复该过程,连续5个周期。ZCKL High或Low Group于促排卵同时予中药ZCKL灌胃,分为高、低剂量进行。于HCG日停中药一天。末次注射HCG后14小时,解剖取出输卵管,在体视显微镜下撕破输卵管壶腹部取卵,进行排卵实验及卵裂实验,观察排卵数、IVF受精率、2cell、4cell、8cell、桑椹胚、囊胚形成率,以及GV期卵母细胞体外成熟（IVM）的第一极体（PB1）排出率。探讨资冲颗粒对小鼠卵母细胞质量的影响,以此作为评价卵母细胞质量的形态学标准。结果:1.反复超促排卵对各组小鼠获卵数的差异比较随着超促排卵次数的增加,小鼠排卵总数未减少,其中退化卵数增加,比率增大,P/H×5组获卵413枚,其中162枚退化卵,占39.2%,Control组获卵98枚,其中1枚退化卵,占1%。随着超促排卵次数的增加,导致正常形态的MⅡ期卵母细胞数量随着超促排卵次数的增加而减少,P/H×1组303枚MⅡ卵,占78.7%;P/H×5组251枚,占60.8%。随着促排次数增加,MⅡ期卵母细胞平均获卵数P/H×1组30.3±3.9枚,P/H×5组25.1±2.2枚,故平均获卵数减少。与P/H×5组平均获MⅡ期卵数25.1±2.2枚相比,ZCKL高剂量组平均获MⅡ期卵数27.5±2.2枚有所上升,有统计学意义（P<0.05）。2.反复超促排卵对各组胚胎的形成受精卵率的比较各组受精卵率:Control组100%;P/H×1组97%;P/H×5组94.0%;ZCKL低剂量组96.1%,ZCKL高剂量组95.3%。各组均无统计学差异（P>0.05）。3.反复超促排卵对各组小鼠1-细胞受精卵体外发育潜能的比较:各组2细胞率:Control组:100%;P/H×1组:100%;P/H×5组:94.6%;ZCKL低剂量组:96.2%;ZCKL高剂量组:100%。各组胚胎的2细胞率无统计学差异（P>0.05）。各组胚胎在4细胞、8细胞、桑葚胚、囊胚阶段:与Control组比,P/H×5组、ZCKL低、高剂量组的4细胞、8细胞、桑葚胚、囊胚率明显下降（P<0.01）;在4细胞、8细胞期,P/H×1组与Control组比较有下降趋势,但无统计学意义;在桑椹胚、囊胚阶段,P/H×1组与Control组比,下降明显（P<0.01,P<0.05）。与P/H×5组比,ZCKL高剂量组的8细胞率、囊胚率明显升高（P=0.021、0.031）。反复超促排卵对小鼠卵母细胞体外成熟的影响:随着超促排次数的增加,PB1排出率有下降趋势;ZCKL低、高剂量组PB1排出率有上调趋势,但均无统计学差异（P>0.05）。小结:1.随着反复超促排卵次数增加,退化卵母细胞比率上升,MⅡ期卵母细胞的数量减少,4细胞、8细胞、桑椹胚、囊胚形成率均下降。2.反复超促排卵同时予补肾中药ZCKL干预,可增加有效排卵数,表明补肾填精是卵泡发育的根本。3.反复超促排卵同时予补肾中药ZCKL干预,可降低退化卵母细胞的发生率,其中8细胞率、囊胚率有所提升,ZCKL高剂量组改善更为明显。补肾中药ZCKL可提高卵母细胞质量及促进胚胎发育,具有剂量关联性。第二部分资冲颗粒改善反复超促排卵小鼠卵母细胞质量的分子机制研究第一节资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵巢组织形态及性激素水平的影响目的:补肾中药ZCKL前期实验证明具有雌激素样作用,是否对反复超促排卵小鼠体内激素变化有调节作用。通过检测激素水平、病理分析卵巢组织的结构变化,进一步阐明机理。方法:昆明雌性小鼠,6周龄,共40只,分组及造模方法同第一部分。选取于末次腹腔注射HCG 12小时后的小鼠,Control组则采取阴道涂片的方法进行情期监测,取处于发情前期后12小时的小鼠,行眼眶取血,制备血清,检测E2、P的水平,之后机械法从小鼠体内分离卵巢,称量卵巢重量,并立即将分离的卵巢于4%多聚甲醛中固定进行HE染色。结果:1.ZCKL对反复超促排卵小鼠各级卵泡及黄体数目的影响（1）各组原始卵泡均数无统计学差异（P>0.05）。（2）各组初级卵泡数、次级卵泡数:与Control组比较,P/H×5组、ZCKL低、高剂量组初级、次级卵泡数明显减少（P<0.01）;与P/H×1组比较,P/H×5组、ZCKL低、高剂量组结果同前（P<0.01）;与P/H×5组比较,ZCKL高、低剂量组初级、次级卵泡数明显增多,差异具有统计学意义。ZCKL高剂量组在改善次级卵泡数量方面效果更为显着（P<0.01）。（3）窦卵泡数:与Control组比较,P/H×1、P/H×5组窦卵泡明显减少（P<0.01）,ZCKL低剂量组窦卵泡减少具有统计学意义（P<0.05）,ZCKL高剂量组差异不显着（P>0.05）;与P/H×5组比较,ZCKL高、低剂量组窦卵泡数无明显差异（P>0.05）。（4）黄体数:与Control组比较,P/H×1组、P/H×5组、ZCKL低、高剂量组黄体数增多显着（P<0.01）;P/H×5组、ZCKL低、高剂量组黄体数无统计学差异（P>0.05）。2.补肾中药ZCKL对反复超促排卵小鼠卵巢重量的影响卵巢重量:与Control组比较,P/H×1组、P/H×5组、ZCKL低、高剂量卵巢量明显增加（P<0.01）;P/H×5组、ZCKL高、低剂量组卵巢重量无显着性差异（P>0.05）。3.补肾中药ZCKL对反复超促排卵小鼠激素水平的影响雌激素、孕激素:与Control组比较,P/H×5组、ZCKL低、高剂量E2、P水平明显降低（P<0.01）,P/H×1组E2、P水平增加（P<0.05,P<0.01）;与P/H×1组比较,P/H×5组、ZCKL低、高剂量组E2、P水平明显降低（P<0.01）;与P/H×5组相比,ZCKL高、低剂量组E2、P水平增加（P<0.05,P<0.01）。小结:1.反复促排卵导致窦前卵泡、窦卵泡数明显减少,黄体数目明显增加。2.随着促排卵次数的增加,卵巢重量亦增加,E2、P水平呈下降趋势。3.补肾中药ZCKL有类似雌、孕激素样作用,能够影响反复促排卵大鼠的生殖内分泌环境,增加初级卵泡、次级卵泡数量,量效关系明显,ZCKL高剂量组效果更佳,针对次级卵泡数量增加更为明显。第二节资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞OCT4表达的影响目的:本节研究的目的是调查多能性基因八聚体结合转录因子4（OCT4）在卵母细胞重复超促排卵之后是否与小鼠胚胎的发育潜力相关,及添加补肾中药ZCKL对卵母细胞OCT4表达的影响。方法:昆明雌性小鼠,6周龄,共250只,分组及造模方法同第一部分。实验组选取于末次腹腔注射HCG 4小时后的小鼠,Control组则采取阴道涂片的方法进行情期监测,取处于发情前期后4小时的小鼠。摘取双侧卵巢放入皿内M2微滴中。在体视显微镜下,将卵巢组织切碎、取卵,收集每组COCs约500枚。用0.3mg/ml透明质酸酶处理到卵丘细胞分散开,用吸卵针将MⅡ期卵母细胞分离至PBS微滴中,反复冲洗。每组选取卵母细胞约200枚用于相关基因QPCR的检测,余300枚用于相关基因WB的检测。将去除卵母细胞的剩余的M2微滴转入PCR管中1000rmp离心5min,管底侧壁可见白色物质为卵丘颗粒细胞。将200枚COCs的卵丘颗粒细胞用于相关基因QPCR的检测,余300枚COCS的卵丘颗粒细胞用于相关蛋白的WB检测。结果:各组卵母细胞OCT4蛋白表达:与Control组比较,P/H×5组、ZCKL低、高剂量OCT4蛋白、m RNA表达明显减少（P<0.01）;与P/H×1组比较,P/H×5组、ZCKL低剂量组OCT4蛋白、m RNA表达明显下降（P<0.01）;与P/H×5组比较,ZCKL低、高剂量组OCT4蛋白、m RNA表达明显升高（P<0.01）;与低剂量组相比,ZCKL高剂量组OCT4蛋白、m RNA表达升高明显（P<0.05）。小结:1.OCT-4 m RNA及蛋白的下调触发了细胞凋亡途径,是决定小鼠卵母细胞发育能力的调控者。2.随着超促排卵周期的增加,在卵母细胞中OCT4 m RNA及蛋白表达量的减少,表明反复超促排之后卵母细胞质量恶化,是反复超促排卵组胚胎4细胞阶段卵子质量开始下降的可能机制之一。3.补肾中药ZCKL能够上调卵母细胞OCT4蛋白及m RNA的表达,为补肾中药提高胚胎质量提供了有力的实验依据。第三节资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞成熟信号通路的影响目的:本研究基于促性腺激素引导的EGFR/MAPK3/1信号通路及卵母细胞与周边卵丘细胞的相互作用GDF9/SMAD2信号通路,探讨补肾中药改善卵母细胞质量的分子机制。本节以小鼠卵丘颗粒细胞、卵母细胞为研究对象,探究ZCKL对反复超促排卵小鼠卵母细胞质量的影响。方法:同第三部分。结果:1.各组小鼠卵母细胞中GDF9、SMAD2、CDC2 m RNA及蛋白的表达比较与Control组比较,P/H×1组、P/H×5组、ZCKL低、高剂量组GDF9、SMAD2、CDC2 m RNA及蛋白表达明显减少（P<0.01）;与P/H×1组比较,P/H×5组、ZCKL Low组上述表达明显下调（P<0.05）;与P/H×5组比较,ZCKL低、高剂量组GDF9、SMAD2、CDC2 m RNA及蛋白表达均有上升趋势,以ZCKL High组升高显着（P<0.01）。2.各组小鼠卵丘颗粒细胞LHR、EGFR、PKA、MAPK3/1的m RNA、蛋白表达及c AMP的浓度比较与Control组比较,P/H×5组、ZCKL低、高剂量组LHR、EGFR、PKA、MAPK3/1的m RNA、蛋白表达及c AMP的浓度明显下降（P<0.01）,P/H×1组的上述基因蛋白表达有下降趋势,在LHR、EGFR m RNA及蛋白表达下降明显（P<0.01）。与P/H×5组比较,ZCKL高、低剂量组不同程度提升上述基因及蛋白表达,差异具有统计学意义。ZCKL高剂量组在改善EGFR m RNA及蛋白水平方面比低剂量组效果更佳,具有统计学意义（P<0.05）。小结:1.多次促排对LHR有脱敏现象可能,与受体失去偶联有关,导致颗粒细胞c AMP浓度下降,下调PKA,使关键下游效应蛋白MAPK3/1的磷酸化程度下降,MPF激活后易位至细胞核呈现下调趋势,使GV期卵母细胞分解产生MⅡ期卵母细胞,故其数量减少,碎片化卵母细胞增多,致随后卵裂期胚胎比率下降。2.补肾中药ZCKL同促性腺激素联合使用,进一步提升LHR水平,使颗粒细胞c AMP浓度上升,激活PKA,促进关键下游效应蛋白MAPK3/1的磷酸化,MPF激活后易位至细胞核,使GV期卵母细胞分解产生MⅡ期卵母细胞,即核成熟,至细胞质成熟、受精和胚胎发育,MⅡ期卵母细胞数量增多,卵裂期胚胎比率上升。3.补肾中药ZCKL改善卵细胞质量的机制可能是通过上调GDF9/SMAD2致卵丘扩张激活EGFR促进促性腺激素引导的EGFR/MAPK3/1信号通路来实现的,丰富了“肾主生殖”的科学内涵。结论:反复促排卵使退化卵母细胞的比率上升,MⅡ期卵母细胞数量减少,降低了有效卵母细胞的数量和质量,影响了胚胎的进一步发育。反复促排卵使卵巢内窦前卵泡、窦卵泡数明显减少,黄体数目明显增加,随着促排卵次数的增加卵巢重量亦增加。反复促排对LHR有脱敏现象可能,与受体失去偶联有关,导致颗粒细胞c AMP浓度下降,下调PKA,使关键下游效应蛋白MAPK3/1的磷酸化程度下降,MPF的激活后易位至细胞核呈现下调趋势,使GV期卵母细胞分解产生MⅡ期卵母细胞,即核成熟,数量减少,碎片化卵母细胞增多,致随后卵裂期胚胎比率下降。补肾中药ZCKL能够增加MⅡ期卵母细胞IVF的8细胞率、囊胚率,ZCKL高剂量组改善更为显着。补肾中药ZCKL能够增加初级卵泡、次级卵泡的数量,尤以次级卵泡为着,高剂量组效果更佳。补肾中药ZCKL改善反复促排卵小鼠卵母细胞质量的机制可能是通过进一步提升LHR水平,使颗粒细胞c AMP浓度上升,激活PKA,亦可能是上调GDF9/SMAD2致卵丘扩张激活EGFR,促进关键下游效应蛋白MAPK3/1的磷酸化,MPF激活后易位至细胞核,使GV期卵母细胞分解产生MⅡ期卵母细胞,丰富了“肾主生殖”的科学内涵。
郝苏平[2]（2012）在《中药对动物噪音应激诱导流产的安胎作用及机理》文中指出本试验旨在研究自拟中药对小鼠噪音应激诱导流产的安胎作用及机理保护作用。本文通过两部分试验来探讨中药对小鼠噪音应激诱导流产的安胎作用及机理。一、噪音诱导小鼠流产模型的建立。将妊娠小鼠随机分为6组。A组小鼠常规饲养,为空白对照组;B,C,D,E和F组小鼠于孕3d开始,每天每组分别用120分贝（Decibel,dB）、100 dB、80 dB、60 dB和40 dB的噪音刺激5h,连续7d。各组试验鼠于孕第10d剖杀,记录胚胎发育情况、胚胎着床数和死胚数,计算试验各组的流产率、胚胎吸收率。结果表明,各组小鼠因噪音应激均可引起流产。A组,流产率为0.0%,胚胎吸收比率5.49%;B组,120dB导致绝大多数妊娠小鼠流产,妊娠剖检,子宫内无胎儿,无法计算死胎数;C组,小鼠胚胎吸收率为92.77%,妊娠第10d剖检可见100%的妊娠小鼠流产。D组、E组和F组流产率分别是50%、20%和10.0%,胚胎吸收比率分别是44.83%、8.89%和6.52%。因此小鼠从孕3d到第8d,每天用100dB噪音刺激5h,第10d剖检,确定为噪音诱导小鼠流产模型的噪音刺激强度和刺激时间。二、自拟中药防治噪音诱导小鼠流产的安胎作用及机理研究。将受孕小鼠随机分为6组。Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为噪音模型组。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组于小鼠孕第3d开始,每天每只用100dB的噪音刺激5h,连续7d,各组试验鼠于孕第10d剖杀。Ⅰ、Ⅱ组小鼠于孕第4-8d每天灌服PBS 0.4mL;Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ组小鼠于孕第4-8d每天分别各灌石菖蒲煎剂、槲皮素+乙酸龙脑酯药液、黄芩+白术及自拟中药组方煎剂各0.4mL。所有试验鼠均于孕10d时眼球摘除放血后颈椎脱臼处死。打开腹腔,暴露子宫,观察子宫生长情况,记录胚胎着床数和发生胚胎吸收的死胚数。在冰盒上取出完整子宫,剪下周围脂肪及附属物,称重,然后纵向剖开子宫腔,剥离胎儿、胎膜后再称量子宫净重。右侧子宫剪下后称重,加入6倍量含蛋白酶抑制剂0.75μg/mL的pH7.4磷酸缓冲液,在冰水环境中立即进行子宫组织匀浆,4℃,12 000 rpm,离心15 min。取出上清液分装,于超低温冰箱-80℃保存,用于测定IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10和NOS。结果表明,自拟中药对噪音诱导妊娠小鼠流产有一定保胎作用。Ⅰ组无噪音影响,流产率为0.0%,胚胎吸收比率6.45%;Ⅱ组100dB导致绝大多数妊娠小鼠流产,妊娠剖检,子宫内无胎儿,无法计算死胎数。Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ和Ⅵ组小鼠于孕第4-8d每天分别各灌石菖蒲煎剂、槲皮素+乙酸龙脑酯药液、黄芩+白术及自拟中药组方煎剂各0.4mL,流产率分别是50.0%、80.0%、50.0%、30.0%胚胎吸收比率分别是48.15%、72.94%、50.00%、13.18%。Ⅲ和Ⅴ组小鼠流产率、胚胎吸收率显着低于Ⅱ组（p<0.05）;Ⅴ组小鼠流产率、胚胎吸收率与Ⅱ组差异不显着（p>0.05）;Ⅵ组小鼠流产率、胚胎吸收率显着低于Ⅱ组（p<0.01）。Ⅵ组与其它中药组之间差异显着（p<0.05）。说明自拟中药对噪音诱导流产保胎具有一定的效果。小鼠子宫组织匀浆中的IL-2、IFN-γ、NOS的活性含量Ⅵ组高于Ⅰ组（p<0.01）,Ⅵ组低于Ⅱ组（p<0.05）,Ⅲ组和Ⅴ组明显高于Ⅰ组（p<0.05）,Ⅲ组和Ⅴ组低于Ⅱ组（p<0.05）,Ⅳ组高于Ⅰ组,差异极显着（p<0.01） ,Ⅳ组稍低于Ⅱ组,无明显差异（p>0.05）,与Ⅲ和Ⅴ组差异显着（p<0.05）与Ⅵ差异极显着（p<0.01）。Ⅵ组低于Ⅱ组,差异极显着（p<0.01）。同样IL-4、IL-10小鼠子宫组织匀浆中含量低于Ⅰ组和高于Ⅱ组。Ⅵ组与其它中药组之间差异显着（p<0.05）。结论:本试验用噪音诱导小鼠流产,随着噪音分贝的增大,小鼠的流产率和胚胎丢失率逐渐增高,使小鼠大部分发生流产。胚胎吸收率上升,使小鼠机体Th1/Th2平衡偏向Th1型反应,导致免疫排斥而诱发小鼠流产,对生产中常见的噪音造成的妊娠失败而言,是良好的实验模型。石菖蒲煎剂、槲皮素+乙酸龙脑酯药液、黄芩+白术及自拟中药组方流产率、胚胎吸收率低于噪音模型组。因此,自拟中药对噪音诱导小鼠流产具有一定保胎作用。
张旭东[3]（2012）在《胰岛素样生长因子-II及基质金属蛋白酶-9与早期自然流产的相关性研究》文中进行了进一步梳理目的：初步探讨胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在正常早孕绒毛发育过程中及早期自然流产发生机制中的作用，以及两者的相关性。方法：选择2011年3月至2011年10月因计划生育因素自愿到泰安市中心医院计划生育门诊行人工流产术的正常早孕妇女20例和同期不明原因早期自然流产患者30例为研究对象。采集两组患者的绒毛组织，部分组织用于提取组织总RNA，采用实时荧光定量PCR技术检测两组绒毛中IGF-ⅡmRNA及MMP-9mRNA的表达量；部分组织进行固定、石蜡包埋、切片，采用免疫组织化学染色法进行IGF-Ⅱ及MMP-9蛋白在两组绒毛组织中的定位及半定量分析。结果：1、实时荧光定量PCR显示两组绒毛组织中均有IGF-ⅡmRNA及MMP-9mRNA表达，两组表达量分别为2.16土0.246,0.632土0.194和0.281士0.052，0.152土0.039，早期自然流产组IGF-ⅡmRNA和MMP-9mRNA的表达水平与正常早孕组相比均明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。2、免疫组织化染色分析发现，IGF-Ⅱ及MMP-9在早期自然流产组及正常早期妊娠组绒毛组织中均有表达，但主要在绒毛小叶的合体滋养细胞及细胞滋养细胞表达，半定量分析示两种蛋白在早期自然流产组表达均明显低于对照组（P<0.05），两组平均光密度（M0D）分别为0.539土0.020，0.271土0.032和0.464土0.061，0.237土0.085，二者呈正相关，差异有统计学意义（r=0.491，P<0.05）。结论：IGF-Ⅱ及MMP-9蛋白参与早孕绒毛的发育，两者表达降低与早期自然流产密切相关，其机制可能为IGF-Ⅱ及MMP-9在绒毛中的表达下降，导致绒毛滋养细胞浸润能力不足，侵入过浅，从而导致流产的发生。
赵延涛[4]（2011）在《LPS致流产作用及保胎中药的调控效应研究》文中研究指明繁殖障碍是使家畜繁殖力降低的主要原因,引起繁殖障碍的重要原因之一就是流产。哺乳动物尤其是反刍家畜又以妊娠早期的胚胎丢失几率最高。流产不仅造成胎儿夭折和母畜产奶量损失,延长母畜产仔间隔,而且常常引起胎衣滞留,造成子宫内膜炎,及母畜的习惯性流产,甚至使母畜失去繁殖性能,直接影响家畜的繁殖、品种的改良,给国家和企业造成巨大的经济损失,已经引起人们的高度重视。内毒素（感染或水平上升）是造成流产的一个重要原因,故本研究运用LPS建立小鼠肠道和肝脏损伤、流产和胚胎着床障碍的三种模型,并结合体外细胞培养的方法,探讨内毒素对肝脏的损伤机制及肝脏对内毒素的清除,同时研究LPS诱导小鼠流产和着床障碍的分子机制以及保胎中药的作用机理,为阐明LPS与妊娠母胎界面的免疫关系,寻找能够有效预防和调控妊娠早期胚胎丢失的药物并探索其作用机制,从而减少流产在动物生产中的发生,提高母畜的繁殖力和畜牧业养殖的经济效益。通过对LPS致小鼠肝损伤模型进行研究,发现LPS导致肠道的通透性增加,肠黏膜紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达降低,推测破坏肠黏膜机械屏障可能是LPS对肠黏膜屏障损伤的重要机制之一。同时腹腔注射LPS引起回肠ROS大量蓄积,提示ROS可能参与调节LPS引发的肠黏膜屏障损伤过程。LPS处理组小鼠血清中的ALT/AST显着升高,说明肝细胞受损,肝功能下降。肝脏MDA含量剧增,抗氧化酶SOD、CAT、GPx活性明显降低,意味着LPS引起肝脏ROS的大量蓄积,并引起了脂质过氧化损伤。通过DHE荧光法检测发现LPS同样能引起人肝癌细胞HepG2产生大量的ROS,这一点与体内试验结果一致。同时LPS导致小鼠血中有大量的NO,肝脏的TNF-α、KC的含量明显升高,KC mRNA表达显着升高,肝脏的iNOS蛋白和肝细胞核内的NF-κB表达上升。LPS刺激HepG2之后能使其分泌大量的IL-8,且通过免疫荧光染色发现胞浆中静态的NF-κB被激活,转位于细胞核,参与调节趋化因子IL-8（或KC）的转录。LPS处理24h后,血清中内毒素水平仍明显高于对照组,说明受损的肝脏尚未能彻底清除血液中的内毒素,另一方面肠道通透性增加有可能导致肠腔内大量的内毒素被吸收入血。对LPS诱导孕鼠流产模型研究发现,LPS可显着减低孕鼠的子宫重量和子宫局部的Th2型细胞因子（IL-4和IL-10）含量,升高子宫Th1型细胞因子（主要是IFN-γ,对IL-2作用不明显）含量,使母-胎界面的Th1/Th2细胞因子平衡向着Th1方向偏移,同时诱导子宫内膜内的CD4+T细胞和F4/80巨噬细胞大量聚集,但基本不影响CD8+T细胞的含量。预口服保胎无忧散、泰山磐石散和白术散三种中药方剂的水煎液能调节子宫微环境,提高子宫重量,抑制Th1型细胞因子的分泌,提高Th2型细胞因子的水平,还能显着降低LPS引起的CD4+T细胞和巨噬细胞的增加,同时使子宫CD8+T细胞的数量显着增加,从而调节Th1/Th2的免疫平衡,使其向着有利于正常妊娠的方向发展,显着降低了孕鼠的流产率和胚胎吸收率,并对LPS造成的子宫损伤有一定的修复作用。采用孕3d小鼠腹腔注射LPS的方法成功建立胚胎着床障碍模型。研究发现,LPS处理后,小鼠血清和子宫组织中NOS活性明显增加,子宫中IFN-γ含量显着上升、IL-10含量无显着变化,且呈剂量依赖性,使Th1/Th2平衡向Th1反应方向移动,因此改变了着床期小鼠子宫免疫微环境,导致了胚胎着床障碍。口服0.5 mg或1 mg黄芩苷或槲皮素均能明显拮抗LPS诱导的着床障碍,使平均着床胚胎数显着上升,着床率升高。黄芩苷显着抑制LPS引起的子宫组织中IFN-γ水平的上升,提高子宫IL-10的含量,降低子宫和血清的NOS活性,从而减少NO的过量合成,使其接近于正常妊娠状态。以上结果在LPS处理的体外培养着床期小鼠子宫内膜细胞的模型中,也得到证实。此外槲皮素能通过显着抑制LPS诱导的子宫IFN-γmRNA的高表达,上调子宫组织中TGF-β1 mRNA的表达来调节子宫局部的免疫平衡。黄芩苷和槲皮素均调节子宫局部的免疫平衡,使其向着有利于妊娠建立的Th2反应偏移,发挥保胎促孕功效。综上,LPS通过导致肠道紧密连接蛋白表达降低,肠黏膜屏障受损,引发内毒素血症。大量的LPS刺激Kupffer细胞和肝细胞,产生大量ROS,抗氧化酶活性降低,激活NF-κB,产生大量的炎性介质,加重了肝损伤,清除内毒素的能力下降。LPS诱导的孕鼠流产和着床障碍,主要是通过破坏母胎界面的Th1/Th2免疫平衡状态;而中药方剂和中药成分能够显着拮抗LPS的破坏作用,改善和修复子宫的免疫平衡,使其有利于正常妊娠和着床,发挥其保胎促孕功效。
杨倩[5]（2011）在《槲皮素抗LPS致小鼠胚泡着床障碍作用的研究》文中指出本试验旨在研究中药单体槲皮素对着床期小鼠子宫微环境的影响。通过检测细胞因子TGF-β1 mRNA的表达来探讨槲皮素对该时期子宫保护作用的可能机制。体内试验,以细菌脂多糖（lipopolysaccharide, LPS ）为诱导药物建立阻碍胚胎着床的模型,将孕鼠分为对照组、无菌生理盐水组及0.001、0.0005、0.0001mg不同剂量LPS组,于孕7d尾静脉注射,孕9d采样观察流产状况,并统计胚胎着床结果。结果0.0001mgLPS组流产率为60%,胚胎着床数与对照组比较差异显着（P<0.05）,且该组小鼠着床率显着低于对照组,子宫微环境不利于胚胎着床。因此选择0.0001mg剂量继续下面的实验。槲皮素是一种天然黄酮类化合物,是中药是中药菟丝子、桑寄生等的主要成分,菟丝子、桑寄生对妊娠期细胞因子平衡有着重要影响,但是对其单体成分保胎作用的研究较少。试验选用黄芩黄酮类有效成分槲皮素对抗LPS诱导的着床失败,探讨其可能的保胎作用机制。小鼠分为5组,A组为对照组,B组为LPS模型组,C-E组分别为不同剂量槲皮素组分别于孕1-7d灌胃给药,孕7d尾静脉注射LPS（0.0001mg/鼠）,孕9d脱臼处死,统计着床结果、流产率,并用原位杂交方法检测子宫中TGF-β1的mRNA表达和RT-PCR方法测定子宫中IFN-γmRNA的表达丰度。结果给予槲皮素的各组小鼠,着床数增多,流产率降低,子宫组织中TGF-β1的mRNA表达增多,IFN-γmRNA的表达丰度降低,中高剂量组与模型组比较差异均显着（P<0.05或P<0.01）,1.5mg槲皮素组表现最为明显。体外实验,通过0.25%胰蛋白酶和0.04% EDTA消化获得妊娠4.5d小鼠子宫内膜细胞,用不同浓度的LPS、槲皮素作用于对数生长期子宫内膜细胞,MTT法检测细胞增殖活力来确定LPS和槲皮素的适宜浓度,确定LPS剂量为100ng/mL,槲皮素浓度为10、50、100μmol/L。将24孔细胞板中生长良好的对数期子宫内膜细胞分为六组（对照组,LPS干扰组,3个剂量槲皮素+LPS组,中药槲皮素组）,48小时后观察各组细胞形态,测定细胞活性。中高浓度槲皮素组细胞活力逐渐升高,与模型组比较差异极显着（P<0.01）,高剂量（100μmol/L）槲皮素组与正常对照组差异不显着。另外,单独添加100μmol/L槲皮素组的子宫细胞活力要高于正常对照组。结论:槲皮素可明显对抗LPS诱导的胚胎着床障碍,有效降低流产率,增加胚胎着床率,提高妊娠母体TGF-β1 mRNA的表达,降低子宫中IFN-γmRNA的表达,使Th1/Th2免疫平衡向有利于妊娠的Th2方向偏移,从而起到促孕保胎的作用。体外试验发现槲皮素不但未对体外培养的子宫内膜细胞的生长有毒害作用,反而促进子宫细胞的活力。
李海军,仓明,王立民,刘东军,旭日干[6]（2006）在《血管内皮生长因子对牛早期胚胎发育的影响》文中研究表明为了探明血管内皮生长因子VEGF对牛体外受精胚胎早期发育的影响,本试验采用了成分明确的体外发育培养系统.通过在体外发育培养液中分别添加0、1、5、10 ng/mL的VEGF,对868枚胚胎的发育能力进行检测.研究结果显示:对照组与添加1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL VEGF的各实验组卵裂率分别为61.99%、75.69%、76.81%、68.92%;8-细胞期发育率分别为51.82%、61.21%、65.41%、63.40%;囊胚期发育率分别为27.74%、24.85%、23.90%、22.88%;囊胚孵化率分别为5.11%、4.85%、5.66%、3.27%.添加1、5、10 ng/mLVEGF与对照组比较,卵裂率、8-细胞期发育率有所增加,囊胚期发育率和囊胚孵化率表现下降趋势,但实验组与对照组间上述几项发育指标差异均不显着（P>0.05）.
周玉峰[7]（2006）在《先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常及其机制研究》文中研究说明【研究背景】人巨细胞病毒（HCMV）是导致胎儿中枢神经系统（CNS）损害的首要病因，严重影响儿童生存质量，揭示其神经损伤机制，对防治策略的制定和全面提高人口素质具有重大社会和经济意义。但其发病机制研究成效甚微，原因在于：①巨细胞病毒（CMV）具严格种属特异性，不能建立HCMV感染的动物模型；②CMV是最大的DNA病毒和蛋白嵌合体，其基因动态表达，蛋白种类多、功能复杂；③CMV宫内感染致脑发育异常与发育阶段性密切相关，如何在动态发育的过程中抓住关键时空进行研究也是难点问题。小鼠巨细胞病毒（MCMV）与HCMV具相似生物学特性，其先天性感染的CNS病理表现亦与人相似，且不存在伦理问题，因而成为模拟研究HCMV宫内感染神经损害机制的有效工具。CMV感染所致CNS损伤主要见于胎儿期，既往认为胎儿免疫系统不成熟，不能保护脑组织免受感染是其主要原因。但近年研究发现，CMV对发育中的脑组织有特殊亲嗜性，这与细胞的内在原因有关。因此，CMV感染所致CNS损伤是一种与脑发育有关的疾病，必须在CNS动态发育过程中研究其发病机制。【目的】建立适合整体水平研究CMV先天感染的小鼠模型，观察病毒对不同发育阶段胎脑发育的影响及其CNS损伤的病理特点。进一步利用神经干细胞（NSCs）和胚胎干细胞（ES cells）向神经细胞分化的细胞模型，在体外模拟神经细胞发育过程，在细胞和分子水平上动态研究CMV对ES、NSCs及不同发育阶段神经细胞功能和发育的影响，并探讨其中可能涉及的分子机制，为阐明CMV感染致脑发育异常机制奠定实验和理论基础，为寻找有效防治措施提供新策略。【方法】1 MCMV先天感染小鼠模型建立与整体研究在BALB／c孕鼠孕8d（E8d，孕中期，神经管开始形成）和孕13.5d（E13.5d，孕中后期，神经元形成高峰期），采用宫内注射法接种含有Lac Z报告基因的MCMV重组毒株RM461（104PFU、103PFU和102PFU），并以同期注射DMEM细胞培养基的孕鼠作为对照。于E18.5d剖宫取出胎鼠，通过X-gal染色和组织切片分析，观察MCMV接种时妊娠阶段和病毒载量对妊娠结局、胎鼠CNS发育和病理损伤特点的影响。2 MCMV对神经干细胞分化发育细胞模型的影响从E13.5d胎鼠脑组织中分离、培养和鉴定NSCs，建立NSCs向神经细胞分化发育的细胞模型；在MCMV RM461感染后，用X-gal染色监测感染过程，透射电镜观察超微结构改变和病毒颗粒，PCR检测受染细胞和培养上清中病毒DNA，并结合观察培养上清接种到小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）的细胞病变效应共同评估NSCs对MCMV的易感性和感染状态；采用细胞生长曲线和MTT实验，观察MCMV对NSCs增殖的影响；采用细胞免疫化学和流式细胞术分析Nestin、GFAP、NSE和NF-200表达，探讨MCMV对NSCs分化的影响；采用FITC-Annexin V+PI染色和流式细胞术分析病毒对NSCs凋亡的影响；采用Western blot联合RT-PCR法检测MCMV对NSCs分化相关基因Wnt-1和Ngn1表达的影响。3 MCMV对胚胎干细胞定向分化发育细胞模型的影响以小鼠ES细胞系D3为研究对象，在4-／4+方案诱导ES细胞定向生成神经元的基础上，利用ATRA联合星形胶质细胞高效诱导ES细胞定向生成神经干／前体细胞和神经元；通过形态学观察、畸胎瘤形成实验、碱性磷酸酶染色、RT-PCR检测胚胎干细胞标志Oct-4表达对ES细胞的全能性进行鉴定；用免疫组织化学结合流式细胞术检测ES细胞来源的NSCs的数量和纯度；用分化实验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测；最后利用ES细胞向神经细胞分化的细胞模型探讨MCMV对ES细胞及ES细胞向神经细胞分化的影响。【结果】1 MCMV先天感染模型建立与整体研究1)用宫内注射法成功建立MCMV先天感染小鼠模型：高病毒载量宫内感染极易导致死胎和吸收胎，仅少数胎鼠存活（5.9％）；低病毒载量感染组存活率明显提高（47.1％），但脑组织病毒阳性率随之下降（12.5％）。103PFU为建立MCMV先天感染模型的合适剂量，其存活率和脑组织病毒阳性率分别为27.8％和80％。2)采用103PFU病毒载量，E8d宫内注射MCMV组胎鼠的存活率（26.9％）和体重显着低于同期DMEM对照组，而吸收胎率（55.8％）高于对照组；E13.5d宫内注射MCMV组胎鼠存活率（52.0％）低于同期DMEM对照组，而吸收胎率（14.0％）与对照组无明显差异。E8d与E13.5d病毒注射组相比，前者存活率低于后者，而吸收胎率高于后者，且发现小头畸形鼠3例。3) MCMV感染胎鼠的脑、心、肝、脾、肺、肾等组织X-gal染色呈阳性反应，并且均可分离到病毒，说明该模型是一种全身播散型感染。脑组织X-gal染色显示阳性细胞主要位于脑室管膜下区、海马区和大脑皮层的外周部分。2 MCMV对神经干细胞分化发育的影响1)体外培养的NSCs可在体外连续传代，仍保持球形生长的能力，nestin表达强阳性，可进一步分化NSE、NF-200阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞。2) MCMV感染NSCs可形成产毒性感染：在感染48h后，细胞出现肿胀，体积增大，神经球边缘的细胞发生脱落和死亡，细胞形态改变随病毒感染复数（MOI）的增加而更加明显；X-gal染色显示，24h受染细胞即可出现阳性改变，48h达高峰；病毒感染72h时，受染细胞及培养上清中MCMV DNA呈阳性，培养上清接种到小鼠MEF细胞后可出现明显细胞病变；电镜下受染细胞胞浆中存在病毒颗粒，细胞器肿胀明显。3) MCMV可明显抑制NSCs的增殖，抑制作用随MOI增加而增强。4)MCMV可明显抑制NSCs的分化：流式细胞仪检测发现，NSCs分化培养2d时感染组和未感染组nestin阳性细胞分别为（62.2±1.8）％和（37.2±2.4）％，差异有极显着性（P＜0.01）；而GFAP阳性细胞比率分别为（37.4±1.6）％和（50.3±1.8）％，NSE阳性细胞比率分别为（8.9±0.8）％和（23.4±1.3）％，差异均有极显着性（P＜0.01）。5)MCMV对NSCs细胞凋亡的影响：MCMV感染组与对照组的早期凋亡率和晚期凋亡率均无明显差异。但感染组细胞死亡率自感染48h始上升，明显高于对照组，至第5d可达（15.2±3.8）％，显着高于对照组的（5.1±0.3）％。6)MCMV感染可抑制Wnt-1和Ngn1的表达：RT-PCR检测发现，感染组Wnt-1基因表达量在12h，24h，48h时低于对照组（P＜0.01），Ngn1基因表达量在12h，24h，48h，72h时均低于对照组（P＜0.01）；Western blot分析发现，感染组Wnt-1蛋白表达量在24h，48h时低于对照组（P＜0.01）。3 MCMV对胚胎干细胞定向分化发育的影响1)体外培养的小鼠ES细胞-D3在胚胎成纤维饲养层细胞上连续传代培养，仍保持向三胚层分化的能力，在免疫缺陷鼠体内可形成畸胎瘤；ES细胞AKP染色和Oct-4表达阳性。2) ATRA可促进ES细胞向神经元方向分化：采用4-／4+方案诱导分化的NF-200阳性细胞为（27.3±1.2）％，而未加ATRA对照组（4-／4-）仅为（2.1±0.4）％（P＜0.01）。3) 2-／2+ATRA联合星形胶质细胞（基质诱导细胞）可高效诱导ES细胞分化为神经前体细胞和神经元，最终可诱导形成纯度高达91.4％的nestin阳性细胞；nestin阳性细胞在含血清培养基中可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞，联合诱导组NF-200和NSE阳性率为（42.7±2.6）％，而2-／2+／4-ATRA对照组阳性率仅为（11.2±1.8）％（P＜0.01）。4) MCMV感染未分化的ES细胞不能形成产毒性感染，但分化的ES细胞可形成产毒性感染；MCMV感染不影响未分化ES细胞的增殖。5) MCMV感染可抑制ES细胞来源的神经元形成，感染组NF-200阳性细胞为（10.2±0.3）％，显着低于对照组的（29.3±0.8）％（P＜0.01）。【结论】1．成功建立了先天性MCMV感染的小鼠模型与NSCs和ES细胞向神经细胞分化的细胞模型，为体内、外探讨CMV先天感染致脑发育机制提供了较为切实可行的、理想的细胞和整体研究模型。2．MCMV先天感染可导致明显的脑发育异常；MCMV对妊娠结局的影响与病毒载量、感染的妊娠阶段有关，小鼠妊娠中期对MCMV的敏感性要高于晚期。3．MCMV可感染体外培养的NSCs，并能形成产毒性感染；MCMV可明显抑制NSCs的增殖、分化并可导致NSCs死亡；MCMV可通过抑制Wnt-1和Ngn1基因表达而影响NSCs分化；MCMV抑制NSCs的增殖与分化可能与先天性CMV感染致脑发育异常有关。4．星形胶质细胞不仅可提高ES来源的NSCs数量，还可促进NSCs向神经元方向分化，利用星形胶质细胞可改善诱导ES生成NSCs的培养体系，此模型可进一步用于体外动态研究神经细胞分化发育机制。5．MCMV不能使未分化的ES细胞形成产毒性感染，未分化的ES细胞对MCMV有一定的抵抗力；ES细胞在分化过程中可获得形成产毒性感染的能力；MCMV感染可抑制ES细胞来源的神经元形成。
王焕英[8]（2004）在《小鼠早期胚胎滋养层细胞与恶性肿瘤细胞侵袭性比较研究》文中研究表明肿瘤是导致人类死亡的第二位原因，是人类健康最受关注和被广泛研究的课题之一。在征服肿瘤的努力中，人们做了大量的工作，但至今尚未取得决定性的突破。近20年来肿瘤病人的死亡率非但没有下降，反而在上升，80％～90％的肿瘤患者死于肿瘤的侵袭转移及相关并发症。这是由于人类还没有弄清肿瘤的起源和发生机制问题，从而不能针对根源采取对策。 早在1829年，法国生物学家Lobstein和Recamier就提出了肿瘤的胚胎性起源的概念。近年，随着细胞生物学、分子肿瘤学、实验胚胎学、实验肿瘤学以及免疫胚胎学的发展，对肿瘤形成与胚胎发育对比研究不断深入。大量的实验研究发现在肿瘤形成与胚胎发育之间存在着诸多的相似之处，提示两者具有同源性。这主要表现在肿瘤细胞与早期胚胎细胞均为发育学上“年轻”的细胞，具有强大的生命力和旺盛的增殖与生长能力，有许多相同的基因表达（癌基因／抑癌基因、异位激素、异位同功酶、胚胎抗原等），有相似的血管形成和免疫逃逸机制，特别是在肿瘤细胞侵袭与胚胎植入（滋养层细胞侵袭子宫内膜）重庆医科大学博士论文过程中具有活跃的侵袭细胞外基质能力。本课题以肿瘤形成与胚胎发育同源性为理论基础，以恶性肿瘤细胞与胚胎滋养层细胞侵袭性相似性为切入点，进行以下研究:第一部分小鼠外胎盘锥滋养层细胞体外侵袭恶性肿瘤细胞的实验观察 目的:通过建立单纯的滋养层细胞与恶性肿瘤细胞体外共培养体系，观察这两种侵袭特性的细胞直接接触后的相互侵袭关系。以期证明单纯的胚胎滋养层细胞，在脱离了胚胎整体性调控后，体外侵袭能力仍强于恶性肿瘤细胞。在细胞水平上，重新认识和了解具有侵袭特性的胚胎滋养层细胞和恶性肿瘤细胞。 方法:建立孕D8.5小鼠外胎盘锥滋养层细胞与多种不同组织学来源的恶性肿瘤细胞（人子宫内膜癌细胞株RL95一2、人肝癌细胞株HePGZ及SMMC一7721、人乳腺癌细胞株Bcap一37及MDA一MB一231、人卵巢癌细胞株SKOV3、人宫颈癌细胞株Hela、人鼻咽癌细胞株HNEI、人胃癌细胞株SGC一7901、大鼠骨肉瘤细胞株LMS、人骨肉瘤细胞株R0517/2.8、小鼠黑色素瘤细胞株B16、大鼠乳腺癌细胞株SHZ一88）和正常细胞（鼠成纤维细胞NIH3T3和L929、人脐静脉内皮细胞ECV-304和人气道上皮细胞gHTE）体外共培养体系，倒置显微镜下观察这两种侵袭特性的细胞直接接触后的相互侵袭关系，及在体外相同的微环境 重庆医科大学博卜论文下，表现出的整体生物学行为。 结果:小鼠外胎盘锥滋养层细胞可以在恶性肿瘤细胞上呈侵袭性扩展生长。在共培养48h一96h之间，外胎盘锥滋养层细胞扩展生长速度最快，在144h其扩展面积基本达峰值，形成近似“S”形的扩展面积曲线。共培养72h（扩展高峰期）和144h（扩展面积峰值），肿瘤细胞组的外胎盘锥滋养层细胞扩展面积均显着大于正常细胞组（P<0.05）。小鼠外胎盘锥周围的恶性肿瘤细胞有生长方向的改变，呈隆起的圆形或椭圆形状，重叠式生长，堆积、环绕在新生滋养层细胞周围。小鼠外胎盘锥滋养层细胞与恶性肿瘤细胞之间形成清晰的界限。 结论:小鼠胚胎滋养层细胞作为机体正常的组织细胞，在脱离胚胎整体性调控后，其体外侵袭能力仍强于恶性肿瘤细胞，并表现为自限性的过程。恶性肿瘤细胞可以促进小鼠外胎盘锥滋养层细胞侵袭性扩展生长。
王伟,李继俊,陈子江,李明江,曲春晓[9]（2003）在《人早孕绒毛膜匀浆和脐静脉内皮细胞对早期鼠胚体外发育的影响》文中提出目的:观察人早孕绒毛膜匀浆（UPHC）和人脐静脉内皮细胞（ECHUV）对早期鼠胚体外发育的影响。方法:观察早期鼠胚在UPHC培养液及ECHUV联合培养液中的发育情况;用ELISA法检测两培养系统上清液中表皮生长因子（EGF）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和血管内皮生长因子（VEGF）的含量。结果:在UPHC培养系统和ECHUV联合培养系统中,早期鼠胚的桑葚胚形成率分别为79.5%和81.2%,囊胚形成率分别为60.2%和61.2%,囊胚孵出率分别为41.0%和42.1%,均明显高于对照组（P<0.05）。早期鼠胚A和B级桑葚胚形成率,在UPHC培养系统中分别为45.2%和32.3%,在ECHUV培养系统中分别为44.6%和27.7%,均显着高于对照组（P<0.05）。UPHC培养系统和ECHUV联合培养系统中,EGF的浓度分别为（52.65±7.37）pg/ml和（58.14±3.03）pg/ml;GM-CSF的浓度分别为（11.81±3.76）pg/ml和（9.20±2.59）pg/ml;VEGF的浓度分别为（61.43±11.38）pg/ml和（256.54±9.15）pg/ml,均显着高于对照组（P<0.05）;ECHUV培养系统的VEGF浓度又显着高于UPHC培养系统（P<0.01）。结论:UPHC和ECHUV培养系统促进早期鼠胚体外发育,提高桑葚胚和囊胚形成率、囊胚孵出率和胚胎质量,其作用与EGF、GM-CSF及VEGF有关。
李大强[10]（2003）在《恶性肿瘤细胞与囊胚滋养层细胞侵袭性生物学行为的比较性研究》文中认为研究背景恶性肿瘤逐渐成为了威胁人类健康的主要疾患之一。随着人类基因组草图的完成和多种模式生物全基因组序列的获得，人类对恶性肿瘤等基本生命现象内在机制的研究, 已步入了后基因组学（post-genomics）和蛋白质组学（proteomics）时代。但据1995年美国国立癌症研究所（NCI）报道，近20年来恶性肿瘤病人的死亡率并没有下降，反而在上升，这主要归因于人类尚未攻破其最坚固的堡垒-侵袭和转移。约70%的侵袭性肿瘤患者在首诊时已有微转移或可见转移灶，术后有40%60%的患者发生复发和转移，80%90%的肿瘤患者死于侵袭转移及相关并发症。由于恶性肿瘤细胞基因的多态性、生物学行为的复杂性以及缺乏理想的实验模型，目前对肿瘤侵袭和转移内在机制的研究仍处于探索阶段。自1829年Lobstein等提出肿瘤的胚胎性起源概念以来，早期胚胎细胞与恶性肿瘤细胞生物学行为的相似性研究日益受到重视。Murray等研究证实，侵袭性生物学行为不仅是恶性肿瘤细胞转移信号级联反应中的前提和基础，而且是囊胚滋养层细胞植入母体子宫内膜（胚胎植入）信号转导通路中的关键。两者在病理生理过程、细胞增殖分裂、基因表达（癌基因、细胞黏附分子、细胞外基质和基质降解酶等）、新生血管形成、细胞凋亡和免疫逃逸等诸多方面具有惊人的相似性。然而，与恶性肿瘤细胞无限侵袭和转移相比，侵袭特性的囊胚滋养层细胞在机体原癌基因、癌基因、细胞外基质、细胞黏附分子和基质降解酶等网络调控下，通过与子宫内膜对话（cross-talk）, 从而有序侵袭母体内膜。故Even-Ram等认为，所谓胚胎植入是“假恶性”（pseudomalignant）的囊胚滋养层细胞发生的生理性转移（physiological metastasis）。其中细胞周期、信号<WP=8>转导和癌基因-抑癌基因平衡等精确调控，蕴藏了阴阳平衡等中医学整体思维和基因时序差异表达等现代科学哲理，为研究恶性肿瘤侵袭和转移的内在机制建立了天然的实验（分子）模型。21世纪的生命科学将是一个多学科创造性融合的时代。因此，两者研究方法学和哲学思维的交叉、渗透和融合，不仅对阐释囊胚滋养层细胞和恶性肿瘤细胞侵袭性生物学行为的内在机制，以及为开发和研究新的抗肿瘤侵袭转移的药物和技术等提供新的思路，而且对认识生命现象的多样性和生命本质的一致性具有重要意义。目 的1. 细胞是一切生命活动的基本单位，且细胞与细胞以及细胞与细胞外基质之间的相互作用和通讯，更是胚胎植入和恶性肿瘤细胞侵袭转移等基本生命现象的本质。通过建立小鼠囊胚和恶性肿瘤细胞共培养模型，探讨这两种侵袭特性的生命形式细胞在体外相同的微环境（microenvrionment）下，动态的相互作用和侵袭性差异以及细胞侵袭相关基因的差异表达，试图从细胞社会学和微环境等整体思维的角度来解读这两种生命现象。2. 探讨在多种肿瘤组织和细胞中丧失表达的抑癌基因等负性调控分子，在体内囊胚滋养层细胞有序侵袭信号转导通路中的作用，从天然的抗组织侵袭模型-胚胎植入的角度，来阐释肿瘤无限侵袭转移的分子机制及其治疗靶点。3. 探讨抗囊胚侵袭的药物-米非司酮对人低分化淋巴结转移胃腺癌细胞株SGC-7901生长、侵袭和转移的影响，从而为促进两学科的交叉性研究以及临床应用等提供新的思路。意 义早期胚胎（有人称之为良性肿瘤）的高速、有序的增殖分化，以及“假恶性”的囊胚滋养层细胞有序侵袭子宫内膜，为研究恶性肿瘤细胞无限增殖和侵袭转移的内在机制建立了天然的实验（分子）模型。两者研究方法学和哲学思维的交叉、渗透和融合，为解读目前这两大生物学之谜的内在机制和临床治疗等提供新的思路。材料与方法1. 建立KM系小鼠围植入期囊胚细胞与正常细胞株（鼠成纤维细胞L929和NIH3T3、人气道上皮细胞9HTE和人脐静脉内皮细胞ECV-304）、不同组织学来源的<WP=9>恶性肿瘤细胞株（人鼻咽癌细胞HNE1、人胃癌细胞BGC-823和SGC-7901、人肾癌细胞786-0、人膀胱癌细胞BIU-87及BADM-60、人成骨肉瘤细胞Ros17/2.8和Saos-2、人子宫内膜癌细胞RL95-2及大鼠乳腺癌细胞SHZ-88）以及不同侵袭转移潜能的人肝癌（HepG2、SMMC-7721、QGY-7703及MHCC97-H）和乳腺癌细胞株（T47D、MCF-7、ZR75-30、Bcap-37、MDA-MB-231及MDA-MB-435s）共培养模型，探讨两种侵袭特性的生命形式细胞，在体外相同的微环境下动态地相互作用及整体生物学行为变化。2. 采用H.E染色、Giemsa染色、甲基绿-派洛宁染色以及扫描电镜检测，观察恶性肿瘤细胞和囊胚细胞在共培养系统中的形态学变化; 采用免疫细胞化学和原位杂交技术，探讨细胞侵袭相关基因整合素αv、焦点黏附激酶（FAK）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、CD44v6、Ki-67和Cyclin D1在共培养系统中的差异表达。3. 采用免疫组织化学及原位杂交技术，探讨在肿瘤侵袭转移信号级联反应中下调或丧失表达的抑癌基因p16INK4a 蛋白及nm23/NDPK mRNA，在体内囊胚滋养层细胞有序侵袭信号转导通路中的作用。4. 采用细胞培养和建立裸鼠移植瘤模型，初步探讨抗囊胚侵袭的药物-米非司酮（MIF）对人低分化淋巴结转移胃腺癌细胞株SGC-7901生长及侵袭转移的影响。结 果1. 小鼠囊胚与不同组织学来
二、人早孕绒毛膜匀浆和脐静脉内皮细胞对早期鼠胚体外发育的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人早孕绒毛膜匀浆和脐静脉内皮细胞对早期鼠胚体外发育的影响（论文提纲范文）
（1）资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞质量影响的分子机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩写 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 资冲颗粒对反复促排卵小鼠卵母细胞体外受精、体外成熟结局的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 试剂配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 设计与分组 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 用药剂量 |
| 2.4 造模与分组方法 |
| 2.5 服药方法 |
| 2.6 小鼠卵母细胞体外受精操作流程 |
| 2.6.1 供精、供卵鼠的准备 |
| 2.6.1.1 供精鼠 |
| 2.6.1.2 供卵鼠 |
| 2.6.2 超促排卵 |
| 2.6.3 培养皿准备 |
| 2.6.3.1 精子获能皿 |
| 2.6.3.2 体外受精培养皿 |
| 2.6.3.3 胚胎培养皿 |
| 2.6.4 吸卵针的制作 |
| 2.6.5 采集精子、精子获能 |
| 2.6.6 取卵 |
| 2.6.7 授精 |
| 2.6.8 镜下观察 |
| 2.6.9 监测指标 |
| 2.6.9.1 排卵实验 |
| 2.6.9.2 卵裂实验 |
| 2.7 小鼠卵母细胞体外成熟操作流程 |
| 2.7.1 超促排卵 |
| 2.7.2 GV期卵子采集及体外成熟 |
| 2.7.3 检测指标 |
| 2.8 统计分析 |
| 结果 |
| 1 反复超促排卵对各组小鼠获卵数、受精率、1细胞受精卵体外发育潜能的比较 |
| 1.1 反复超促排卵对各组小鼠获卵数差异的比较 |
| 1.2 反复超促排卵对各组小鼠卵母细胞受精率差异的比较 |
| 1.3 反复超促排卵对各组小鼠1细胞受精卵体外发育潜能的比较 |
| 2 反复超促排卵对小鼠卵母细胞体外成熟的影响 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 1 反复超促排卵的临床现状 |
| 1.1 反复超促排卵影响卵母细胞的数量和质量 |
| 1.2 反复超促排卵致胚胎移植的妊娠率和着床率下降 |
| 2 反复超促排卵与肾精的关系 |
| 2.1 生殖能力由肾精、天癸决定 |
| 2.2 卵泡的发生以肾精为基础 |
| 2.3 胚胎质量及发育潜能由肾精主导 |
| 2.4 反复超促排卵导致肾精亏虚 |
| 3 反复超促排卵动物模型的建立 |
| 3.1 造模方法 |
| 3.2 造模成功率的探讨 |
| 4 研究结果分析 |
| 4.1 反复超促排卵对小鼠卵母细胞的影响 |
| 4.2 资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞质量的影响 |
| 5 提高卵母细胞质量的治疗现状 |
| 6 资冲颗粒的方药研究背景 |
| 6.1 资冲颗粒渊源 |
| 6.2 资冲颗粒的组方配伍特色 |
| 6.2.1 补肾填精,固护养阴 |
| 6.2.2 阳中求阴,水火既济 |
| 6.3 资冲颗粒组方分析及药理学研究 |
| 6.4 资冲颗粒的前期临床及基础研究 |
| 6.4.1 临床研究 |
| 6.4.2 动物实验 |
| 6.4.2.1 促卵泡发育,产生雌激素样效应 |
| 6.4.2.2 促卵巢血管再生,调控卵巢功能 |
| 6.4.3 体外细胞实验 |
| 6.4.3.1 促进早孕流产胚胎脐带血管周围干细胞(FTM-PVCs)分化为卵母细胞样细胞 |
| 6.4.3.2 促进人胚胎干细胞体外分化为类卵巢颗粒细胞及类卵泡细胞 |
| 6.4.3.3 促进小鼠胚胎干细胞(mESC)、大鼠间充质干细胞(rMSCs)向生殖细胞分化 |
| 6.4.3.4 促进小鼠颗粒细胞雌激素的生成 |
| 6.4.3.5 促进人、小鼠未成熟卵母细胞体外成熟 |
| 6.4.3.6 影响子宫内膜容受性 |
| 6.4.3.7 改善雌激素缺乏的阴道萎缩症状 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 资冲颗粒改善反复超促排卵小鼠卵母细胞质量的分子机制研究 |
| 第一节 资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵巢组织形态及性激素水平的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 试剂耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 用药剂量 |
| 2.3 造模方法 |
| 2.4 服药方法 |
| 2.5 标本采集 |
| 2.5.1 血清制备 |
| 2.5.2 卵巢的分离及称重 |
| 2.6 血清P的测定 |
| 2.6.1 准备试剂与收集血样 |
| 2.6.2 检测程序 |
| 2.6.3 检测程序结果计算与判断 |
| 2.7 小鼠雌二醇定量测定 |
| 2.7.1 样本要求 |
| 2.7.2 检验方法 |
| 2.7.3 ELISA实验数据处理与分析 |
| 2.8 组织切片病理检验 |
| 2.8.1 方法 |
| 2.8.2 图像采集 |
| 2.8.3 卵巢内卵泡数量统计 |
| 2.9 统计分析 |
| 结果 |
| 1 补肾中药对反复促排卵小鼠各级卵泡及黄体数目的影响 |
| 2 补肾中药对反复超促排卵小鼠卵巢重量的影响 |
| 3 补肾中药对反复促排卵小鼠雌、孕激素水平的影响 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 1 反复超促排卵导致窦前卵泡、窦卵泡数目减少,黄体数目增加。 |
| 2 随着促排卵次数的增加,E2、P水平呈下降趋势。 |
| 3 随着促排卵次数的增加,卵巢重量亦增加。 |
| 4 补肾中药ZCKL能够增加初级卵泡、次级卵泡数量,量效关系明显。 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二节 资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞OCT4表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 试剂耗材 |
| 1.4 试剂配伍 |
| 1.5 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 用药剂量 |
| 2.3 造模方法 |
| 2.4 服药方法 |
| 2.5 标本采集 |
| 2.5.1 卵母细胞采集 |
| 2.5.2 卵丘颗粒细胞采集 |
| 2.6 RT-PCR检测卵母细胞OCT4mRNA的表达 |
| 2.6.1 分别提取五组卵母细胞总RNA |
| 2.6.2 RNA纯度测定 |
| 2.6.3 合成cDNA |
| 2.6.4 引物设计 |
| 2.6.5 PCR扩增 |
| 2.6.6 RT-PCR实验数据处理与分析 |
| 2.7 Western blot检测小鼠卵母细胞OCT4蛋白的表达 |
| 2.7.1 分别提取五组卵母细胞内总蛋白 |
| 2.7.2 总蛋白量的测定 |
| 2.7.3 SDS-PAGE电泳、银染标准操作规程 |
| 2.8 统计分析 |
| 结果 |
| 1 各组卵母细胞OCT4蛋白表达的差异比较 |
| 2 各组卵母细胞OCT4mRNA表达的差异比较 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 1 OCT4与“先天之精”功能相似 |
| 2 反复超促排卵之后OCT4在卵母细胞中表达下调,致卵母细胞质量恶化 |
| 3 OCT-4的下调触发了细胞凋亡途径 |
| 4 补肾中药ZCKL能够上调卵母细胞OCT4蛋白及mRNA的表达,为提高胚胎质量提供实验依据 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三节 资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞成熟信号通路的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 试剂耗材 |
| 1.4 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 用药剂量 |
| 2.3 造模方法 |
| 2.4 服药方法 |
| 2.5 标本采集 |
| 2.6 RT-PCR检测卵母细胞中GDF9、Smad2、CDC2mRNA的表达,卵丘颗粒细胞中LHR、EGFR、PKA、MAPK3/1mRNA的表达 |
| 2.7 Western blot检测小鼠卵母细胞GDF9、Smad2、CDC2的蛋白表达及卵丘颗粒细胞EGFR的蛋白表达 |
| 2.8 ELISA检测小鼠卵丘颗粒细胞中cAMP的浓度 |
| 2.9 统计分析 |
| 结果 |
| 1 各组小鼠卵母细胞中GDF-9、SMAD2、CDC2mRNA及蛋白的表达比较 |
| 1.1 DF9mRNA表达的比较 |
| 1.2 GDF9蛋白表达的比较 |
| 1.3 SMAD2mRNA表达的比较 |
| 1.4 SMAD2蛋白表达的比较 |
| 1.5 CDC2mRNA表达的比较 |
| 1.6 CDC2蛋白表达的比较 |
| 2 各组小鼠卵丘颗粒细胞LHR、EGFR、PKA、MAPK3/1的mRNA和或蛋白及cAMP浓度的比较 |
| 2.1 LHRmRNA表达的比较 |
| 2.2 EGFRmRNA表达的比较 |
| 2.3 EGFR蛋白表达的比较 |
| 2.4 PKAmRNA表达的比较 |
| 2.5 cAMP浓度的比较 |
| 2.6 MAPK3mRNA表达的比较 |
| 2.7 MAPK1mRNA表达的比较 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 1 标本采集时间的选择 |
| 2 卵母细胞成熟是卵母细胞获得成功受精和随后的胚胎发育能力的关键步骤之一 |
| 3 调节卵母细胞成熟的信号通路 |
| 3.1 cAMP/PKA/MAPK信号通路 |
| 3.2 GDF9/SMAD2信号通路 |
| 3.3 EGFR/MAPK3/1信号通路 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新性评价 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 附录一：综述:补肾中药干预体外受精-胚胎移植的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附件二：在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（2）中药对动物噪音应激诱导流产的安胎作用及机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 噪音对妊娠期小鼠的影响 |
| 1.1.1 噪音应激的反应机理 |
| 1.1.2 噪音对消化系统的影响 |
| 1.1.3 噪音对中枢神经系统的损伤 |
| 1.1.4 噪音对免疫系统的影响 |
| 1.1.5 噪音与流产关系 |
| 1.2 流产发生的免疫学机理 |
| 1.2.1 Th1 和Th2 细胞因子与妊娠的关系 |
| 1.2.2 Th1/Th2 细胞因子平衡的偏离与妊娠结局关系密切 |
| 1.3 中药对噪音流产小鼠的保护作用 |
| 1.3.1 中药保胎机理 |
| 1.3.2 几种常用安胎中药 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 药品及试剂 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 试验仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 噪音诱导小鼠流产模型的建立 |
| 2.2.2 中药防治噪音诱导小鼠流产 |
| 3 结果 |
| 3.1 噪音诱导小鼠流产模型的确定 |
| 3.1.1 噪音对小鼠妊娠的影响 |
| 3.1.2 噪音对小鼠临床表现的影响 |
| 3.1.3 噪音对小鼠组织器官病理变化的影响 |
| 3.2 中药防治噪音诱导小鼠流产的效果 |
| 3.2.1 中药对妊娠小鼠流产的影响 |
| 3.2.2 中药对噪音诱导流产小鼠临床表现的影响 |
| 3.2.3 中药对噪音诱导流产小鼠组织器官病理变化的影响 |
| 3.3 中药对噪音诱导流产小鼠细胞因子变化的影响 |
| 3.3.1 对IL-2 含量变化的影响 |
| 3.3.2 对IFN-γ含量变化的影响 |
| 3.3.3 对IL-4 含量变化的影响 |
| 3.3.4 对IL-10 含量变化的影响 |
| 3.3.5 对子宫组织及血清中NOS 活性的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 噪音诱导小鼠流产模型的确定 |
| 4.2 中药防治噪音诱导小鼠流产的作用及机理 |
| 4.2.1 安神与安胎关系密切 |
| 4.2.2 石菖蒲的安胎作用 |
| 4.2.3 黄芩的安胎作用 |
| 4.2.4 中药对噪音诱导流产小鼠细胞因子变化的影响 |
| 4.2.5 中药对噪音诱导流产小鼠NO 的影响 |
| 4.2.6 自拟中药组方对噪音诱导小鼠流产的安胎作用 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
（3）胰岛素样生长因子-II及基质金属蛋白酶-9与早期自然流产的相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（4）LPS致流产作用及保胎中药的调控效应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 内毒素 |
| 1.1.1 内毒素的结构 |
| 1.1.2 内毒素的生物学特性 |
| 1.1.3 内毒素的检测方法 |
| 1.1.4 LPS 的信号转导通路 |
| 1.2 内毒素对肠道和肝脏的损伤 |
| 1.2.1 LPS 对肠道的损伤 |
| 1.2.2 LPS 对肝脏的损伤 |
| 1.2.3 肝脏的排毒 |
| 1.3 免疫调控与妊娠 |
| 1.3.1 MHC 与妊娠 |
| 1.3.2 激素与妊娠 |
| 1.3.3 免疫细胞与妊娠 |
| 1.3.4 细胞因子与妊娠 |
| 1.3.5 NO 与妊娠 |
| 1.3.6 TGF-β与妊娠 |
| 1.4 中药保胎促孕 |
| 2 LPS 对肝脏和肠道的损伤机制研究 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 细胞系 |
| 2.1.3 试验试剂 |
| 2.1.4 试验仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 动物处理 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 肠道通透性的体外检测 |
| 2.2.4 荧光法检测组织细胞内活性氧 |
| 2.2.5 肝损伤的测定 |
| 2.2.6 内毒素测定, |
| 2.2.7 ELISA 法测定肝脏KC、TNF-α和细胞IL-8 水平 |
| 2.2.8 肝脏MDA 的测定 |
| 2.2.9 肝脏SOD，CAT，GPx 活性的测定 |
| 2.2.10 紧密连接蛋白的蛋白免疫印迹 |
| 2.2.11 核蛋白的提取 |
| 2.2.12 细胞内ROS 测定 |
| 2.2.13 RT-PCR 测定肝脏KC mRNA 的表达 |
| 2.2.14 NF-κB 的免疫荧光染色 |
| 2.2.15 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 LPS 对肠道的损伤 |
| 2.3.2 LPS 对肝脏的损伤 |
| 2.3.3 LPS 对HepG2 的损伤 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 中药方剂对LPS 致流产的保护作用和机理研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 试验药品与试剂 |
| 3.1.3 试验仪器 |
| 3.1.4 溶液配制 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 动物处理 |
| 3.2.2 胚胎吸收率（死亡率）和流产率计算 |
| 3.2.3 试验取样 |
| 3.2.4 子宫组织及血清中4 种细胞因子含量的测定 |
| 3.2.5 子宫组织孕酮含量的测定 |
| 3.2.6 子宫的组织学观察 |
| 3.2.7 免疫组化测定子宫CD4~+、CD8~+T 淋巴细胞及F4/80 巨噬细胞的分布及数量 |
| 3.2.8 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 中药方剂保胎作用结果 |
| 3.3.2 LPS 与中药方剂对小鼠子宫重量的影响 |
| 3.3.3 中药方剂对LPS 诱导流产小鼠细胞因子含量的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 保胎中药方剂对抗LPS 诱导流产的效果 |
| 3.4.2 LPS 和保胎中药对Th1/Th2 型细胞因子的调节 |
| 3.4.3 LPS 及保胎中药对子宫组织孕酮分泌的影响 |
| 3.4.4 LPS 诱导流产及中药保胎方剂对子宫免疫细胞的调节 |
| 3.5 小结 |
| 4 中药成分黄芩苷槲皮素对LPS 诱导着床障碍的保护作用 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 试验试剂 |
| 4.1.3 试验仪器 |
| 4.1.4 溶液配制 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 LPS 阻碍小鼠胚胎着床模型的建立 |
| 4.2.2 黄芩苷对LPS 生殖损伤的保护作用 |
| 4.2.3 槲皮素对LPS 生殖损伤的保护作用 |
| 4.2.4 子宫组织及血清中IFN-γ、IL-10 含量的测定 |
| 4.2.5 子宫组织及血清中一氧化氮合成酶活性测定 |
| 4.2.6 原位杂交法检测子宫组织TGF-β1mRNA 的表达 |
| 4.2.7 RT-PCR 检测子宫组织中IFN-γmRNA 的表达 |
| 4.2.8 统计处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 LPS 阻碍小鼠胚胎着床 |
| 4.3.1.1 LPS 诱导小鼠着床失败 |
| 4.3.1.2 LPS 对子宫IFN-γ、IL-10 含量的影响 |
| 4.3.1.3 不同剂量 LPS 对 NOS 活性的影响 |
| 4.3.2 黄芩苷对LPS 诱导的胚胎着床失败的保护作用 |
| 4.3.3 槲皮素对LPS 诱导的胚胎着床失败的保护作用 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 建立LPS 诱导小鼠胚胎着床障碍模型 |
| 4.4.2 阻碍胚胎着床的不同剂量LPS 对于IFN-γ、IL-10 和NOS 活性的调节 |
| 4.4.3 黄芩苷对于LPS 诱导着床障碍的保护机制 |
| 4.4.4 槲皮素对于LPS 诱导着床障碍的保护机制 |
| 4.5 小结 |
| 5 中药成分对LPS 诱导子宫内膜细胞损伤的保护作用 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 试验动物 |
| 5.1.2 试验试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 溶液配制 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 小鼠着床期子宫内膜细胞原代培养 |
| 5.2.2 LPS 对小鼠着床期子宫内膜细胞的干扰剂量MTT 法筛选 |
| 5.2.3 黄芩苷对LPS 损伤子宫内膜细胞的保护作用 |
| 5.2.4 槲皮素对LPS 损伤子宫内膜细胞的保护作用 |
| 5.2.5 ELISA 检测子宫内膜细胞培养上清液中IFN-γ、IL-10 的含量 |
| 5.2.6 子宫内膜细胞上清液中NOS 活性检测 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 小鼠着床期子宫内膜细胞原代分离培养结果 |
| 5.3.2 LPS 及黄芩苷作用于子宫内膜细胞的有效剂量筛选结果 |
| 5.3.3 黄芩苷和槲皮素对LPS 损伤子宫内膜细胞的保护 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 着床期小鼠子宫内膜细胞的分离培养 |
| 5.4.2 LPS 对小鼠子宫内膜细胞损伤模型的建立 |
| 5.4.3 黄芩苷对LPS 诱导子宫内膜细胞损伤的保护 |
| 5.4.4 槲皮素对LPS 诱导子宫内膜细胞损伤的保护 |
| 5.5 小结 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在读期间发表的学术论文 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（5）槲皮素抗LPS致小鼠胚泡着床障碍作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 胚泡着床期的免疫调控 |
| 1.2 TGF-β1 在妊娠过程中的作用 |
| 1.3 中药安胎现状 |
| 1.4 槲皮素的药理作用研究现状 |
| 1.5 原位杂交原理 |
| 1.6 子宫内膜细胞的培养 |
| 1.7 研究意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验药品 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 小鼠胚胎着床障碍模型的建立 |
| 2.2.2 不同剂量槲皮素对胚胎着床保护作用的研究 |
| 2.2.3 子宫组织原位杂交检测TGF-β1mRNA 的表达 |
| 2.2.4 子宫中IFN-γmRNA 丰度的测定 |
| 2.2.5 小鼠着床期正常子宫内膜细胞原代培养 |
| 2.2.6 LPS 对小鼠着床期子宫内膜细胞的干扰剂量筛选 |
| 2.2.7 槲皮素对小鼠着床期子宫内膜细胞的保护作用 |
| 2.3 统计处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 细菌脂多糖的流产效果 |
| 3.1.1 细菌脂多糖流产效果的判定 |
| 3.1.2 不同浓度细菌脂多糖对子宫重量的影响 |
| 3.2 不同浓度槲皮素保胎作用的比较 |
| 3.2.1 槲皮素对胚胎着床的保护作用 |
| 3.2.2 不同浓度槲皮素对子宫重量的影响 |
| 3.2.3 子宫组织TGF-β1 原位杂交结果 |
| 3.2.4 RT-PCR 方法研究IFN-γ总RNA 的表达规律的结果 |
| 3.3 着床期小鼠子宫内膜细胞原代分离培养结果 |
| 3.3.1 小鼠子宫内膜细胞的形态特征 |
| 3.3.2 小鼠子宫内膜细胞生长曲线 |
| 3.4 LPS 及槲皮素作用于体外子宫内膜细胞剂量的筛选 |
| 3.4.1 LPS 对着床期小鼠子宫内膜细胞干扰剂量筛选试验结果 |
| 3.4.2 槲皮素对妊娠4.5d 小鼠子宫内膜细胞保护浓度范围的确定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 着床期小鼠子宫激素网络的调节 |
| 4.2 TGF-β1 在胚胎着床中的作用 |
| 4.4 着床期小鼠子宫内膜细胞的原代培养 |
| 4.5 槲皮素对小鼠胚胎着床期子宫的保护作用 |
| 4.6 存在的问题 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 A |
| 附录 B |
| 在读期间发表的论文情况 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
（6）血管内皮生长因子对牛早期胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 引 言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 牛卵母细胞的采集、体外成熟培养和体外受精 |
| 1.2.1 牛卵母细胞的采集与体外成熟培养 |
| 1.2.2 体外受精 |
| 1.3 发育培养 |
| 2 结 果 |
| 3 讨 论 |
（7）先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常及其机制研究（论文提纲范文）
| 一 符号说明 |
| 二 中文摘要 |
| 三 英文摘要 |
| 四 前言 |
| 五 正文 |
| 第一部分 先天性巨细胞病毒感染小鼠模型建立与整体研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 照片 |
| 第二部分 小鼠巨细胞病毒对神经干细胞分化发育细胞模型的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 照片 |
| 第三部分 小鼠巨细胞病毒对胚胎干细胞定向分化发育细胞模型的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 照片 |
| 六 全文小结 |
| 七 参考文献 |
| 八 综述/专论 |
| 1 HCMV免疫逃避分子机制研究进展 |
| 2 抗病毒药物在儿科的应用 |
| 九 附录 小鼠胚胎发育与人类胚胎发育对照表 |
| 十 博士研究生期间发表论文及获奖励情况 |
| 十一 致谢 |
（8）小鼠早期胚胎滋养层细胞与恶性肿瘤细胞侵袭性比较研究（论文提纲范文）
| 英文缩写词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 正文 小鼠早期胚胎滋养层细胞与恶性肿瘤细胞侵袭性比较研究 |
| 前言 |
| 第一部分 小鼠外胎盘锥滋养层细胞体外侵袭恶性肿瘤细胞的实验观察 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 小鼠囊胚对恶性肿瘤细胞侵袭性的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 肿瘤转移抑制基因KAI1／CD82、MRP-1／CD9、ME491／CD63在围植入期小鼠子宫的表达及作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 展望 |
| 图片及说明 |
| 文献综述 肿瘤形成与胚胎发育同源性研究 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
（10）恶性肿瘤细胞与囊胚滋养层细胞侵袭性生物学行为的比较性研究（论文提纲范文）
| 英文缩写及中英文对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 前言 |
| 第二部分 小鼠囊胚与不同组织学来源和不同侵袭转移潜能的恶性肿瘤细胞株共培养及其生物学行为观察 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 小鼠囊胚体外植入及侵袭恶性肿瘤细胞生物学行为的初步探讨 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 抑癌基因p16~(INK4a)蛋白及nm23/NDPKmRNA的表达在体内囊胚滋养层细胞有序侵袭信号转导通路中的作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 抗囊胚侵袭性药物米非司酮对人胃癌细胞生长及侵袭转移潜能的影响 |
| 第一节 米非司酮抑制体外培养的人胃腺癌细胞株SGC-7901生长和侵袭转移的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二节 米非司酮移植瘤裸鼠胃癌移植瘤生长和侵袭转移的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第六部分 结语与展望 |
| 附图 |
| 文献综述一 胚胎植入与肿瘤侵袭转移生物学行为的相似性 |
| 文献综述二 原癌基因、癌基因和抑癌基因与胚胎植入 |
| 文献综述三 抗组织侵袭模型-胚胎植入与抗肿瘤侵袭转移靶点 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
四、人早孕绒毛膜匀浆和脐静脉内皮细胞对早期鼠胚体外发育的影响（论文参考文献）
- [1]资冲颗粒对反复超促排卵小鼠卵母细胞质量影响的分子机制研究[D]. 王晶. 成都中医药大学, 2018(01)
- [2]中药对动物噪音应激诱导流产的安胎作用及机理[D]. 郝苏平. 河北农业大学, 2012(08)
- [3]胰岛素样生长因子-II及基质金属蛋白酶-9与早期自然流产的相关性研究[D]. 张旭东. 泰山医学院, 2012(03)
- [4]LPS致流产作用及保胎中药的调控效应研究[D]. 赵延涛. 河北农业大学, 2011(05)
- [5]槲皮素抗LPS致小鼠胚泡着床障碍作用的研究[D]. 杨倩. 河北农业大学, 2011(07)
- [6]血管内皮生长因子对牛早期胚胎发育的影响[J]. 李海军,仓明,王立民,刘东军,旭日干. 内蒙古大学学报(自然科学版), 2006(06)
- [7]先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常及其机制研究[D]. 周玉峰. 华中科技大学, 2006(03)
- [8]小鼠早期胚胎滋养层细胞与恶性肿瘤细胞侵袭性比较研究[D]. 王焕英. 重庆医科大学, 2004(03)
- [9]人早孕绒毛膜匀浆和脐静脉内皮细胞对早期鼠胚体外发育的影响[J]. 王伟,李继俊,陈子江,李明江,曲春晓. 山东大学学报(医学版), 2003(06)
- [10]恶性肿瘤细胞与囊胚滋养层细胞侵袭性生物学行为的比较性研究[D]. 李大强. 重庆医科大学, 2003(01)