一、房室不节对雄性小鼠生殖机能影响的初步研究（论文文献综述）
张继伟[1]（2021）在《金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究》文中指出背景:全球约有7240万人受生育问题的困扰,特发性弱精子症占24%～30%。目前现代医学治疗特发性弱精子症存在一定局限性,缺乏针对病因的治疗,而中医药在治疗特发性弱精子症方面有一定优势。金龟毓麟方为中国中医科学院西苑医院男科经验方,具补肾填精,疏肝通络功效,对特发性弱精子症（肾虚肝郁型）具有一定疗效,但未对其有效性与安全性进行系统评价,其作用机制亦尚未明确。故设计本课题以验证其有效性与安全性及可能作用机制。本研究分为以下3个部分:研究1金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的有效性与安全性临床研究目的:评价中药复方金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的有效性与安全性。方法:本研究为随机、对照试验,共纳入患者124例,均于2019年12月-2020男12月就诊于中国中医科学院西苑医院男科门诊,均符合特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的纳排标准。采用SAS软件产生随机编码,按1:1随机分为试验组（62例）和对照组（62例）。试验组给予金龟毓麟方（制龟甲15g、郁金12g、柴胡12g,熟地黄15g、鹿角胶6g、菟丝子10g、覆盆子10g、生麦芽12g、鸡血藤10g、炙甘草6g）。服用方法:每日2次,一次1袋。对照组给予左卡尼汀口服液（国药准字:H19990372）,服用方法:每次10ml,每日3次。两组用药12周,随访4周。主要疗效指标包括前向运动精子（PR）、精子总活力（PR+NP）;次要疗效指标包括中医证候评分、精子浓度、精液量、受孕率。安全性指标包括血常规、尿常规、肝肾功能（ALT、AST、BUN、CREA）、心电图,入组前和观察完成后各检查一次。结果:本研究共入组患者124例,共脱落11例,其中试验组脱落4例,对照组脱落7例,总脱落率为8.87%。本研究有效性分析只针对符合方案集（PPS）数据进行统计分析。1.主要疗效指标:（1）PR级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后PR级精子活力改变无统计学差异（P>0.05）:治疗8周、12周后可提高PR级精子活力（P<0.05）。与治疗前比较,试验组在治疗4周、8周、12周后均可显着提高PR级精子活力（P<0.05）。②同时期组间比较:与对照组比较,试验组治疗4周后在提高PR级精子活力方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后,在提高PR级精子活力方面优于对照组（P<0.05）。（2）PR+NP级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后在提高PR+NP级精子方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后可提高PR+NP级精子活力（P<0.05）。与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后均可提高PR+NP级精子活力（P<0.05）。②同时期组间比较:与对照组比较,治疗4周后试验组在提高PR+NP级精子方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后试验组在提高PR+NP级精子方面均优于对照组（P<0.05）。2.次要疗效指标:（1）中医证候评分:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周、8周、12周后,在降低中医证候评分方面均无统计学差异（P>0.05）;与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后可显着降低中医证候评分（P<0.05）。②同时期组间比较:试验组治疗4周、8周、12周后在降低中医证候评分方面均优于对照组（P<0.05）。（2）精液量:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精液量方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精液量方面无统计学差异（P>0.05）。（3）精子浓度:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精子浓度方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精子浓度方面无统计学差异（P>0.05）。（4）受孕率:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在受孕率方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在受孕率方面无统计学差异（P>0.05）。3.安全性评价:本研究共发生7例轻度不良事件,其中试验组发生4例,对照组3例,以上不良事件均为轻度,不适症状在给予指导服用方法后自行缓解,未见不良反应。两组血常规、尿常规、肝肾功能（ALT、AST、BUN、CREA）、心电图均未见明显异常。结论:金龟毓麟方在提高特发性弱精子症PR级和PR+NP级精子活力及降低中医证候评分方面均优于左卡尼汀口服液,且未见明显不良反应,表明金龟毓麟方在治疗肾虚肝郁型特发性弱精子症方面安全有效。研究2金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型大鼠的药效学研究目的:观察金龟毓麟方对奥硝唑（Omidazole,ORN）诱导的弱精子症模型大鼠精液质量、睾丸和附睾重量及病理形态、性激素、肝肾功能的影响。方法:将60只雄性SPF级SD大鼠进行编号,采用随机数字表法将其随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）、左卡尼汀组每组各10只。空白组给予1mL/100g 0.5%的CMC-Na溶液;模型组;400mg/（kg·d）ORN;金龟毓麟方低剂量组:4.9g 生药/kg·d+400 mg/（kg.d）ORN;金龟毓麟方中剂量组:9.7g生药/kg·d+400mg/（kg·d）ORN;金龟毓麟方高剂量组:19.4g 生药/kg.d+400mg/（kg.d）ORN;左卡尼汀组 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN。灌胃时间:实验组上午给予400mg/（kg.d）ORN,下午给予金龟毓麟方浓缩液,灌胃28天。末次给药断食24小时后,腹腔麻醉称体重,取睾丸及附睾称重,计算附睾、睾丸系数。左侧附睾尾部制备附睾匀浆,温浴评估精子活力。大鼠右侧附睾、睾丸固定染色。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法及生化分析仪分别测定性激素（FSH、LH、T）、肝肾功（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）。结果:1.大鼠一般情况:空白组大鼠饮食无明显改变,体毛浓密光泽,活动度良好,精神状态可,大小便无明显异常。模型组大鼠饮食减少、体毛疏松,光泽度下降,活动度方面部分可见少动、运动迟缓,精神倦怠、萎靡或见易怒,大便稀溏,小便色黄。左卡尼汀组大鼠饮食增加,精神状态较好,活动灵敏,小便颜色正常,大便偶有偏稀。金龟毓麟方组各大鼠饮食较模型组食量增加,体毛疏松但有光泽、活动度较模型组运动量增加,精神状态较模型组灵敏、部分可见易怒现象,大便质地好转,小便颜色恢复正常。中、高剂量组精神状态和饮食量较低剂量组改善明显。2.金龟毓麟方对大鼠精子质量的影响:（1）大鼠精子活力:与模型组比较,中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组在提高PR级精子、PR+NP级精子活力方面均有统计学差异（P<0.05）。高剂量组在提高PR+NP级精子方面优于左卡尼汀组（P<0.05）。（2）大鼠精子浓度:各组与模型组比较大鼠精子浓度改变均无统计学差异（P>0.05）。3.大鼠睾丸、附睾重量及脏器指数变化:（1）大鼠睾丸变化情况:各组与模型组比较大鼠睾丸重量、睾丸系数改变均无统计学差异（P>0.05）。（2）大鼠附睾变化情况:与空白组比较,模型组附睾重量、附睾脏器系数下降（P<0.05）。与模型组比较,金龟毓麟方高剂量组可增加附睾重量与附睾系数（P<0.05）。4.金龟毓麟方对大鼠肝肾功的影响:各组与模型组比较大鼠肝肾功能（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）改变均无统计学差异（P>0.05）。结论:1.400 mg/（kg·d）ORN灌胃28天,对大鼠体重、睾丸重量及脏器指数、精子浓度无明显影响,但可引起附睾损伤,造成大鼠精子活力下降。2.金龟毓麟方可改善ORN诱导的弱精子症大鼠附睾损伤,提高大鼠精子活力,对大鼠肝肾功能（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）及性激素（FSH、LH、T）无明显影响,初步验证了金龟毓麟方治疗弱精子症的有效性与安全性。研究3 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制目的:从Pink1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬角度探讨金龟毓麟方治疗弱精子症的机制,进一步揭示ORN所致弱精子症大鼠的机制以及金龟毓麟方的保护作用。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组（低剂量组、高剂量组）,灌胃取材等同研究2。精子氧化应激检测采用SOD、MDA及GSH-Px活性检测试剂盒检测;精子线粒体功能检测采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测;采用ATP含量检测试剂盒检测精子线粒体ATP含量。精子线粒体自噬相关指标检测:采用Real-time PCR和Western Blot检测精子Pink1、Parkin、p62 和 LC3 Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1 mRNA 及蛋白表达水平。结果:1.精子氧化应激指标变化:与空白组比较,模型组大鼠附睾精子中MDA含量升高（P<0.01）,SOD与GSH-Px含量降低（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组大鼠附睾精子中MDA含量均降低（P<0.05）,SOD与 GSH-Px 含量均升高（P<0.05,P<0.01）。2.大鼠精子线粒体功能指标变化:（1）线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）:与空白组比较,模型组精子线粒体MMP下降明显,精子早期凋亡率增加（P<0.01,P<0.001）;与模型组比较,金龟毓麟方各组可升高MMP,降低精子早期凋亡率（P<0.05,P<0.01）。（2）线粒体ATP:与空白组比较,模型组精子线粒体ATP含量显着降低（P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组提高精子线粒体ATP方面无统计学差异（P>0.05）;高剂量组可提高精子线粒体ATP含量（P<0.01）。3.线粒体自噬相关指标变化:（1）与空白组比较,模型组大鼠Pink1 mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组可降低Pink1mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（2）与空白组比较,模型组大鼠Parkin mRNA及蛋白表达均增加（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低、高剂量组可降低Parkin mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（3）与空白组比较,模型组大鼠p62 mRNA及蛋白表达降低（P<0.01,P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组可增加p62 mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（4）与空白组比较,模型组大鼠LC3 mRNA及LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加（P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组LC3 mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）。（5）与空白组比较,模型组大鼠TOM20 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组TOM20 mRNA表达增加（P<0.05,P<0.01）;低剂量组TOM20蛋白表达增高（P<0.05）。（6）与空白组比较,模型组大鼠Beclin 1mRNA及蛋白表达增加（P<0.05,P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组BeclinlmRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN诱导的弱精子症大鼠可能通过氧化应激损伤,引起线粒体 MMP 与 ATP 下降,导致 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、BeclinlmRNA 及蛋白表达上调,p62、TOM20mRNA及蛋白表达下调,提示ORN通过氧化应激损伤引起线粒体功能障碍,导致精子线粒体自噬激活。2.金龟毓麟方可减轻弱精子症大鼠精子氧化应激损伤,提高精子线粒体MMP 与 ATP 水平,下调 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1mRNA 及蛋白表达,上调p62、TOM20mRNA及蛋白表达,提示金龟毓麟方通过抑制Pink1/Parkin线粒体自噬通路改善精子活力。
惠华英[2]（2020）在《葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠疗效的微生态学机理研究》文中研究表明目的:建立肠道湿热证泄泻小鼠模型并运用葛根芩连汤进行治疗,研究肠道湿热证泄泻造模及葛根芩连汤干预对模型小鼠肠道微生态的影响,以期从微生态角度揭示肠道湿热证泄泻的发生机理,探明葛根芩连汤疗效与肠道微生态的相关性,为中医泄泻证型的诊治研究及方剂疗效机理的探析提供参考。方法:采用“高糖高脂+高温高湿+白酒+冰水”法模拟肠道湿热证泄泻病因,建立肠道湿热证泄泻小鼠模型,并运用葛根芩连汤治疗。分别在造模及治疗成功后,采集眼球血进行血常规、血生化及P物质含量测定,摘取动物内脏称重;采用平板计数法测定小鼠肠道内容物中细菌、大肠杆菌、乳酸菌和双歧杆菌数;采集小鼠小肠内容物和黏膜,运用荧光素二乙酸法测定肠道内容物和黏膜中微生物活度,运用酶活分析技术测定肠道中所含乳糖酶、蔗糖酶、淀粉酶和蛋白酶活性;无菌提取实验动物肠道内容物中细菌总DNA,进行16S r RNA基因序列扩增,基于Pac Bio平台进行高通量测序,分析小鼠肠道细菌特征。结果:（Ⅰ）模型小鼠表现为懒动、体重增长缓慢、黄褐色稀便、肛门污秽、肛温升高等,血清中所含P物质浓度显着高于正常组（P=0.001）;血生化检测结果显示,模型组血清中甘油三脂（TG）含量显着降低（P=0.038）,总胆固醇含量（TC）和血糖水平（GLU）增加,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量下降,但与正常组相比无显着性差异;采用葛根芩连汤治疗后,模型小鼠一般状态恢复,血清P物质浓度回归接近于正常组,TG和GLU含量明显回归。（Ⅱ）血常规测定结果显示,肠道湿热证泄泻小鼠血中所含白细胞数（WBC）、中性粒细胞数（GRA）和嗜酸细胞数（EOS）增加,平均红细胞体积（MCV）降低。使用葛根芩连汤治疗后的小鼠血中WBC、EOS与自愈组相比降低,而GRA和MCV恢复至正常组水平（P>0.05）,且治疗组胸腺指数增加。（Ⅲ）肠道湿热证泄泻造模引起小鼠肠道细菌和双歧杆菌数显着减少（P=0.000或P=0.049）,微生物活度显着升高（P=0.000）。模型小鼠肠道内容物中乳糖酶、蔗糖酶和淀粉酶活性升高而蛋白酶活性降低,肠黏膜中乳糖酶、蔗糖酶和淀粉酶活性显着降低（P<0.01或P<0.05）而蛋白酶活性升高。葛根芩连汤治疗后的小鼠肠道乳酸菌数持续升高（P<0.01）,微生物活度与自愈组相比显着降低（P=0.000）。治疗组肠道内容物中所含乳糖酶、蔗糖酶、淀粉酶和蛋白酶活性高于正常组而低于自愈组,肠黏膜中所含乳糖酶、蔗糖酶和淀粉酶活性高于正常组和自愈组。（Ⅳ）对细菌16S r RNA测序分析结果表明,造模引起小鼠肠道细菌Alpha多样性升高,但与正常组比较无统计学差异;样本层次聚类树和主坐标分析（PCo A）显示,模型组和正常组样本间有一定的距离,组间基本可以分开,说明组间存在微生物菌群结构上的差异性。在门水平上,模型组肠道拟杆菌门、变形菌门和放线菌门的相对丰度增加,而蓝藻菌门和厚壁菌门相对丰度减少,且放线菌门含量与正常组相比差异显着（P=0.0325）。在属水平上,模型组肠道所含梭菌属和乳杆菌属丰度降低,Muribaculum、链球菌属、Parasutterella、普雷沃氏菌属和Enterorhabdus含量明显升高。在种水平上,模型组格氏乳杆菌、肠乳杆菌、罗氏乳杆菌、阴道乳杆菌及Curvibacter lanceolatus丰度减少,而Muribaculum intestinale、卷曲乳杆菌、胃瘤乳杆菌、Staphylococcus epeidermidis、牙龈卟啉单胞菌、Parasutterella excrementihominis、Enterorhabdus muris、少酸链球菌和Enterorhabdus mucosicola的含量升高。Lefse分析结果表明,格氏乳杆菌是正常组与模型组间具有显着性差异的关键物种。（Ⅴ）采用葛根芩连汤干预后,治疗组Alpha多样性指数回归（P>0.05）;PCo A显示正常组和治疗组样本间存在一定距离;在细菌门水平上,与正常组相比,治疗组小鼠肠道内容物所含拟杆菌门丰度升高,厚壁菌门丰度恢复,变形菌门和蓝藻菌门丰度下降;在属水平上,治疗组肠道乳杆菌属含量恢复至正常组水平而Muribaculum和梭菌属含量高于正常组,且链球菌属和奈瑟菌属含量接近自愈组水平;在细菌种水平上,治疗组肠道卷曲乳杆菌丰度恢复,罗氏杆菌丰度低于而Muribaculum intestinale高于正常组,但两组间比较无统计学差异。结论:（1）采用“高糖高脂+高温高湿+白酒+冰水”法成功建立了肠道湿热证泄泻小鼠模型,葛根芩连汤对模型小鼠疗效显着。（2）肠道湿热证泄泻造模引起小鼠血常规指标异常,葛根芩连汤可调节模型小鼠血液中WBC、GRA、EOS和MCV等指标回归,提高胸腺指数,调节机体免疫力。（3）肠道湿热证泄泻造模引起小鼠肠道内容物中微生物种类和数目发生异常变化,微生物活度增加,肠道消化酶活性改变,葛根芩连汤通过调节肠道微生物种数、降低肠道微生物活度、调控肠道消化酶活性发挥疗效。（4）肠道湿热证泄泻小鼠肠道内容物菌群结构发生变化,造成菌群失调,格氏乳杆菌是模型组与正常组间存在显着差异的物种,其含量的改变可能与泄泻相关。（5）葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌物种多样性具有恢复作用,调节了细菌物种相对含量,其疗效的发挥可能与该方调控肠道微生态平衡相关。
李卓恒[3]（2020）在《EPO与肾虚雄性生殖功能低下的相关性及右归饮的改善作用》文中研究指明背景中医理论认为,肾主生殖,与“肾精”密切相关。肾精不足,则生殖之精匮乏,导致不育不孕。“肾精”物质基础至今未明。课题组提出“促红细胞生成素（Erythropoietin,EPO）可能是肾精的重要生物物质基础”的假设,并初步验证了“肾精通于脑”、“肾精主骨”、“肾精化气强卫”等方面与EPO的相关性。本研究通过观察三种雄性动物模型（2种肾虚生殖功能低下,1种EPO基因敲除）体内的EPO变化,以及补充外源性EPO或给予补肾益精经典方药对三种雄性动物模型的改善作用及其机制,拟揭示EPO对肾虚雄性生殖功能的影响。从而从生殖的角度证明EPO可能是‘肾精’的重要物质基础,阐释“肾精藏生殖之精”的中医理论。本研究得到国家自然科学基金面上项目（81473549）,2018年中央高校基本科研业务费学生项目（XDJK2018D027）的支持。目的1.观察雄性EPO基因敲除小鼠、自然衰老小鼠、肾虚生殖低下大鼠体内EPO的变化,以及外源性rhEPO的逆转作用;2.观察“补肾益精”经典方右归饮对EPO基因敲除小鼠、雄性自然衰老小鼠、肾虚生殖低下大鼠的改善作用,并探讨其作用机制是否与HIF1α-STAT5通路相关;3.拟通过上述试验揭示EPO对肾虚雄性生殖功能的影响。从而从生殖的角度证明“EPO可能是‘肾精’的重要物质基础”,阐释“肾精藏生殖之精”的中医理论。方法与结果1.EPO与肾虚雄性动物生殖功能低下的相关性研究方法:（1）建立EPO基因全身条件性敲除小鼠:本研究设计并委托基因公司定制获得“目标基因锚定鼠EPO（flox/flox）小鼠”和“敲除工具鼠UBC-CreERT2小鼠”,将两种小鼠进行交配,取子鼠进行鉴定,筛选得到“EPO（flox/flox）-CreERT2小鼠”。再选取其中8周龄雄性EPO（flox/flox）-CreERT2子鼠（待EPO基因敲除小鼠）和雄性EPO（flox/flox）小鼠（野生型,WT）,均腹腔注射100 mg·kg-1他莫昔芬（执行EPO基因敲除的药物）连续5天,从第6天开始小鼠正常饲养28天,每7天测定小鼠体温、体重,至第34天处死小鼠,取材检测各项指标。其中EPO（flox/flox）-CreERT2小鼠注射他莫昔芬后即成为“EPO基因条件性全身敲除（EPO-KO）小鼠”,检测该小鼠肾脏、睾丸中EPO蛋白表达,计算EPO基因在以上组织的敲除率,判断敲除成功后,用于后续各项试验。（2）复制自然衰老致肾虚雄性生殖功能低下小鼠模型,小鼠正常饲养12个月造模,模型成功判断标准:（1）与青年小鼠相比,每只衰老模型小鼠自主活动、新物体识别、转棒时间显着降低,血清中SOD、T-AOC降低,MDA升高即为衰老模型成功;（2）与青年小鼠均值相比,造模后每只小鼠血清中UREA、CREA升高,ACTH、T、T3或T4降低,即为肾虚模型成功。（3）与青年对照组小鼠均值相比,造模后每只小鼠血清中T、E2、LDH、DHT降低,精子数量减少、精子畸形率升高,即为生殖功能损害模型成功。（4）同时满足上述（1）（2）（3）三个判断标准即为自然衰老小鼠肾虚雄性生殖功能低下模型成功。取自然衰老肾虚雄性生殖功能损害模型成功的小鼠用于后续试验。（3）复制腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠模型。雄性SD大鼠随机分为正常组与造模组,造模组用腺嘌呤150 mg·kg-1连续灌胃14天。模型成功判断标准:（1）与正常组大鼠均值相比,造模后每只大鼠血清中UREA、CREA含量升高,ACTH、T、T3或T4含量降低,即为肾虚模型成功。（2）与正常组大鼠均值相比,造模后每只大鼠血清中T、E2、LDH、DHT、FSH降低,精子畸形率升高、数量降低;性行为:骑跨次数、插入次数、射精次数降低,即为生殖功能损害模型成功。（3）同时满足上述（1）（2）两个判断标准即为肾虚雄性生殖功能损害模型成功。取肾虚雄性生殖功能损害模型成功的大鼠用于后续试验。对比检查以上3个动物模型的外观形态,血常规,血清生化指标,脏器病理学,精子数量、畸形率,肾脏、睾丸HIF1α-STAT5通路关键蛋白含量。结果:（1）EPO基因条件性全身敲除小鼠成功建立,具有肾精亏虚证及雄性生殖功能低下的临床表现。EPO基因在EPO基因敲除小鼠肾脏和睾丸中的敲除率分别为77.53%、76.86%。与野生型小鼠相比,EPO基因敲除小鼠毛色变差,出现腹水,体重、体温、摄食量显着减少;肝、脾、肺、肾、脑垂体、睾丸、附睾、前列腺、精囊、脊柱组织形态显着改变;精子数量显着下降、畸形率显着上升,精子外观、内部形态显着病变;血清EPO显着降低,SEPOR显着升高,EPO/SEPOR的比值显着降低;血常规指标Gran%、Gran、MID、MID%、RBC、HCT、PCT显着降低、HGB、LY、LY%、MCH、WBC显着升高;肾功能指标UREA、CREA显着升高;甲状腺指标ACTH、CORT、T3、T4的显着降低;氧化应激指标MDA显着升高,SOD、GSH-Px、T-AOC、LPO显着降低;免疫指标C3、C4、IL-2、IL-6、IGA、IGG、IGM显着降低;生殖指标T、E2、LH、DHT、FSH显着降低;肾脏、睾丸中HIF1α-STAT5通路蛋白显着下降（均p<0.05）。（2）自然衰老致肾虚雄性生殖功能低下小鼠EPO及其信号通路蛋白显着降低。与青年小鼠相比,衰老模型小鼠,外观形态、毛色较差,体重和体温降低;肾小球空泡、炎性因子较多;睾丸小体形态不完整,曲精管萎缩、充血;精子数量显着下降、畸形率显着上升;血常规RBC、HCT、HGB、MID、MID%、MCH、PCT显着降低;血清UREA、CREA显着升高;ACTH、CORT、T3、T4显着降低;MDA、LPO显着升高,SOD、GSH-PX、T-AOC显着降低;T、E2、LH、DHT、FSH显着降低;自主活动次数、转棒时间显着降低、新物体识别指数显着升高;血清EPO显着降低,SEPOR显着升高,EPO/SEPOR比值显着降低;肾脏与睾丸HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量显着降低（均p<0.05）。（3）腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠EPO显着下降,HIF1α-STAT5通路蛋白显着异常。与正常组相比,模型组大鼠外观形态、毛色较差,体重、体温降低;肾外观变白,肾小球囊腔较大,肾小管内腺嘌呤结晶、坏死、炎性细胞浸润较多;睾丸小体管腔内蓝染的钙盐沉积,曲精管萎缩、管腔疏松,充血;精子外观、内部病变;精子数量显着降低,精子畸形率显着上升;血常规Gran%、Gran、MID、MID%、RBC、HCT、PCT、MCH显着下降,LY、LY%、WBC显着上升;血清UREA、CREA显着上升;ACTH、CORT、T3、T4的含量显着降低;T、E2、LH、DHT、FSH均显着降低;骑跨次数、插入次数、射精次数均显着降低;血清EPO显着降低,SEPOR显着升高,EPO/SEPOR比值显着降低;肾脏和睾丸HIF-1α、EPO蛋白表达含量显着降低,p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量显着升高（均p<0.05）。2.外源性rhEPO对肾虚雄性生殖功能低下动物体质及EPO信号通路逆转作用观察方法:（1）外源性rhEPO对EPO基因敲除雄性小鼠的逆转试验:取8周龄雄性EPO基因敲除小鼠及其野生型小鼠,分为4组:EPO-KO组、WT组、EPO-KO+rhEPO 500 IU·kg-1、WT+rhEPO 500 IU·kg-1,每组5只。rhEPO组每三日皮下注射rhEPO,EPO-KO组、WT组给予等体积生理盐水,连续28天。检测动物外观、体重、体温,测定行为学、血常规、血清生化指标,脏器病理学,精子形态、数量、畸形率,肾脏、睾丸HIF1α-STAT5通路关键蛋白含量。（2）外源性rhEPO对自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠的逆转试验:自然衰老模型小鼠分为4组:衰老模型组、rhEPO 250 IU·kg-1、500 IU·kg-1、1000 IU·kg-1、每组15只,2月龄雄性小鼠15只为青年对照组。rhEPO组每三日皮下注射相应剂量rhEPO,衰老模型组给予等体积生理盐水,持续28天。检测动物外观、体重、体温,测定行为学、血常规、血清生化指标,肾脏、睾丸病理学,精子数量、畸形率,肾脏、睾丸HIF1α-STAT5通路关键蛋白含量。（3）外源性rhEPO对腺嘌呤致肾虚雄性生殖功低下大鼠的逆转试验:将造模成功大鼠随机分为4组:模型组、rhEPO 500 IU·kg-1、1000IU·kg-1、1500 IU·kg-1每组15只,正常组15只大鼠。第15天开始,除正常组外,隔日150 mg·kg-1腺嘌呤灌胃维持模型,rhEPO每三天皮下注射一次,模型组给予等体积生理盐水,持续30天。检测大鼠外观、体重、体温,测定性行为学、血常规、血清生化指标,肾脏、睾丸病理学,精子形态、数量、畸形率,肾脏、睾丸HIF1α-STAT5通路关键蛋白含量。（4）外源性rhEPO对3种TM4细胞损伤模型的保护作用及其机制研究:TM4细胞为模型,分别进行三种干预:采用Crispr Cas9技术敲除EPO基因;JAK2及STAT5蛋白抑制剂分别处理细胞,缺氧缺糖损伤。细胞干预后观察给予外源性rhEPO 12.5 U·mL-1后细胞增殖情况、LDH泄漏率、线粒体膜电位及对HIF1α-STAT5通路的影响。结果:（1）外源性rhEPO显着改善肾虚雄性生殖功能低下动物的体质及生殖功能。（1）外源性rhEPO显着改善EPO基因敲除雄性小鼠体质及生殖功能。与EPO基因敲除组相比,外源性rhEPO 500 IU·kg-1组外观形态、毛色较好,体重、体温升高;肾小球饱满,空泡较少,炎性因子较少;睾丸小体形态较完整,曲精管萎缩、充血较轻;精子数量显着上升、畸形率显着下降;血常规Gran%、Gran、MID、MID%、RBC、HCT显着升高、HGB、LY、MCH、WBC显着降低;血清UREA、CREA显着降低;ACTH、CORT、T3、T4显着升高;MDA显着降低,SOD、GSH-PX、T-AOC、LPO显着升高;T、E2、LH、DHT、FSH均显着升高;自主活动次数、转棒时间显着上升、新物体识别指数显着降低（均p<0.05）。（2）外源性rhEPO显着改善自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠体质及生殖功能。与衰老模型组相比,rhEPO 250、500、1000 IU·kg-1组小鼠,外观形态、毛色较好,体重、体温升高;肾小球饱满,空泡较少,炎性因子较少;睾丸小体形态较完整,曲精管萎缩、充血较轻;精子数量显着上升、畸形率显着下降;血常规RBC、HCT、HGB、MID、MID%、MCH、PCT显着升高;血清UREA、CREA显着降低;ACTH、CORT、T3、T4显着升高;MDA、LPO显着降低,SOD、GSH-PX、T-AOC显着升高;T、E2、LH、DHT、FSH显着升高;小鼠自主活动次数、转棒时间显着上升、新物体识别指数显着降低（均p<0.05）。（3）外源性rhEPO显着改善腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠体质及生殖功能。与模型组相比,rhEPO 500、1000、1500 IU·kg-1组大鼠,外观形态、毛色较好,体重、体温升高;肾外观形态显着改善,肾小球囊腔变小,肾小管内腺嘌呤结晶变少,凝固性坏死减少,炎性细胞浸润减少;睾丸小体形态趋于正常,管腔内钙盐沉积减少,曲精管缩、管腔疏松,血管壁增厚,充血的情况减轻;精子形态及组织结构病变显着缓解;精子数量显着上升、畸形率显着下降;血常规Gran%、Gran、MID、MID%、RBC、HCT、PCT、MCH显着上升,LY、LY%、WBC显着降低;血清UREA、CREA显着降低;ACTH、CORT、T3、T4的含量显着升高;T、E2、LH、DHT、FSH均显着升高;骑跨次数、插入次数、射精次数均显着升高（均p<0.05）;（2）外源性rhEPO显着调节肾虚雄性生殖低下动物EPO信号通路。（1）外源性rhEPO显着升高EPO基因敲除雄性小鼠EPO含量及其信号通路蛋白的表达。与EPO基因敲除小鼠相比,rhEPO 500 IU·kg-1组小鼠EPO显着上升,SEPOR显着下降,EPO/SEPOR的比值显着上升,肾脏与睾丸中EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量增加（均P<0.01）。（2）外源性rhEPO显着升高自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠EPO含量及其信号通路蛋白的表达。与自然衰老组小鼠相比,rhEPO 250、500、1000 IU·kg-1组小鼠,血清EPO显着上升,SEPOR显着下降,EPO/SEPOR的比值显着上升;肾脏与睾丸中HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量增加（均P<0.01）。（3）外源性rhEPO显着调节腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠EPO及其信号通路蛋白的表达。与模型组相比,rhEPO 250 IU·kg-1、500 IU·kg-1组血清EPO显着上升,rhEPO1500 IU·kg-1组EPO显着下降,rhEPO各组SEPOR显着下降、EPO/SEPOR的比值显着上升;肾脏与睾丸HIF-1α、EPO蛋白表达量增加,p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量下降（均p<0.05）。（3）外源性rhEPO对EPO基因敲除或缺氧缺糖损伤的TM4细胞具有显着的保护作用,对EPO下游通路抑制的TM4细胞无改善作用。（1）外源性rhEPO对EPO基因敲除损伤的TM4细胞有显着保护作用。与模型组相比,rhEPO 12.5 IU·mL-1显着促进TM4细胞增殖;显着抑制LDH泄漏率和线粒体膜电位的改变;使EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量增加（均p<0.05）。（2）外源性rhEPO对JAK2、STAT5蛋白抑制的TM4细胞无显着保护作用。与模型组相比,rhEPO 12.5 IU·mL-1对TM4细胞增殖、LDH泄漏率、线粒体膜电位及HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量均无显着改变。（3）外源性rhEPO对缺氧缺糖损伤的TM4细胞有显着保护作用。与模型组相比,rhEPO 12.5 IU·mL-1显着促进TM4细胞增殖;显着抑制LDH泄漏率和线粒体膜电位的改变;使HIF1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量增加（均p<0.05）。提示EPO及其信号通路对雄性生殖功能细胞具有重要调节作用。3.右归饮对肾虚雄性生殖低下动物的改善及对EPO信号通路的调节作用观察方法:（1）右归饮对EPO基因敲除雄性小鼠的试验:取8周龄雄性EPO基因敲除小鼠及其野生型小鼠,分为4组:EPO-KO组、WT组、EPO-KO+右归饮20 g·kg-1、WT+右归饮20 g·kg-1每组5只。右归饮组每日灌胃相应剂量右归饮,EPO-KO组、WT组每日给予等体积生理盐水,持续28天。检测方法和指标同“方法2（1）”。（2）右归饮对自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠的试验:造模成功的自然衰老雄性生殖功能低下模型小鼠分为4组:模型组、右归饮10 g·kg-1、20 g·kg-1、40 g·kg-1组,每组15只,以2月龄雄性C57BL/6J小鼠15只为青年对照组。检测方法及指标同“方法2（2）”。（3）右归饮对腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠的试验:腺嘌呤造模成功的肾虚雄性生殖功能低下大鼠随机分为5组:模型组、右归饮10 g·kg-1、20 g·kg-1、40 g·kg-1组、阳性药对照组(龟鹿二仙膏10 g·kg-1组),以正常大鼠15只为正常组。第15天开始,除正常组外,各组隔日给予150 mg·kg-1腺嘌呤灌胃维持模型,右归饮与龟鹿二仙膏组灌胃给药每日1次至第46天。检测方法及指标同“方法2（3）”。（4）右归饮对3种TM4细胞模型的保护作用及其机制研究:干预方式同“方法2（4）”。细胞干预后,考察给予右归饮100 ug·mL-1后细胞增殖情况、LDH泄漏率、线粒体膜电位及HIF1α-STAT5通路的影响。结果:（1）右归饮显着改善肾虚雄性生殖低下动物的体质及生殖能力。（1）右归饮对EPO基因敲除雄性小鼠体质及生殖能力无显着改善作用。与EPO基因敲除组相比,右归饮20 g·kg-1组小鼠外观形态、毛色、体温无改善;肾脏、睾丸病理形态无改善;精子数量、精子畸形率无改善;血常规MCH、LY、RBC、HCT、PCT、Gran、Gran%、Mid、Mid%无显着改变,WBC、HGB、LY%显着降低（均p<0.05）,血清UREA、CREA、ACTH、CORT、T3、T4、MDA、LPO、SOD、GSH-PX、T-AOC、T、E2、DHT、FSH均无显着改变,LH显着升高（p<0.05）;自主活动次数、转棒时间无显着改变,新物体识别指数显着下降（p<0.05）。（2）右归饮显着改善自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠体质及生殖能力。与衰老模型组相比,右归饮10、20、40 g·kg-1组小鼠,外观形态、毛色较好,体重、体温升高;肾小球饱满,空泡较少,炎性因子较少;睾丸小体形态较完整,曲精管萎缩、充血较轻;精子数量显着上升,精子畸形率显着下降;血常规RBC、HCT、HGB、MID、MID%、MCH、PCT显着降低;血清UREA、CREA显着降低;ACTH、CORT、T3、T4显着升高;MDA、LPO显着降低,SOD、GSH-PX、T-AOC显着升高;T、E2、LH、DHT、FSH均显着升高;小鼠自主活动次数、转棒时间显着上升、新物体识别指数显着降低（均p<0.05）。（3）右归饮显着改善腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠体质及生殖能力。与模型组相比,右归饮10、20、40 g·kg-1组大鼠外观形态、毛色较好,体重、体温升高;肾外观形态显着改善,肾小球囊腔变小,肾小管内腺嘌呤结晶变少,坏死减少,炎性细胞浸润减少;睾丸小体形态趋于正常,管腔内蓝染的钙盐沉积减少,曲精管萎缩减轻、管腔疏松,血管壁增厚,充血的情况减轻;精子形态及组织结构病变显着缓解;精子数量显着上升,精子畸形率显着下降;血常规Gran%、Gran、MID、MID%、RBC、HCT、PCT、MCH显着上升,LY、WBC显着降低;血清UREA、CREA显着降低;ACTH、CORT、T3、T4的含量显着升高;T、E2、LH、DHT、FSH均显着升高;骑跨次数、插入次数、射精次数均显着升高（均p<0.05）。（2）右归饮显着调节肾虚雄性生殖低下动物EPO及其信号通路。（1）右归饮对EPO基因敲除雄性小鼠EPO含量及其信号通路蛋白表达无显着调节作用。与EPO基因敲除小鼠相比,右归饮20 g·kg-1组小鼠血清EPO、SEPOR无显着改变;肾脏与睾丸中HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量无显着改变;（2）右归饮显着升高自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠EPO及其信号通路蛋白的表达。与自然衰老组小鼠相比,右归饮10、20、40 g·kg-1组小鼠血清EPO显着上升,SEPOR显着下降,EPO/SEPOR的比值显着上升,肾脏与睾丸HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量增加（均p<0.01）;（3）右归饮显着升高腺嘌呤致肾虚生殖雄性功能低下大鼠EPO及其信号通路蛋白的表达。与模型组相比,右归饮10、20、40 g·kg-1组小鼠血清EPO显着上升、SEPOR显着下降,EPO/SEPOR的比值显着上升;肾脏与睾丸HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量下降（均P<0.05）。（3）右归饮对缺氧缺糖损伤的TM4细胞有显着保护作用,对EPO基因敲除或EPO下游信号通路阻断的TM4细胞无改善的作用。（1）右归饮对EPO基因敲除的TM4细胞无显着改善。与模型组相比,右归饮100 ug·mL-1对TM4细胞的增殖、LDH泄漏率、线粒体膜电位及HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量无显着改变。（2）右归饮对JAK2、STAT5蛋白抑制的TM4无显着改善作用。与模型组相比,右归饮100 ug·mL-1对TM4细胞的增殖、线粒体膜电位及HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量均无显着改变。（3）右归饮对缺氧缺糖的TM4细胞有显着保护作用。与模型组相比,右归饮100 ug·mL-1显着促进TM4细胞增殖;显着抑制模型细胞损伤导致的LDH泄漏率和线粒体膜电位的改变;使HIF-1α、EPO、p-EPOR（Tyr368）、p-JAK2（Tyr570）、p-STAT5（Ser725）蛋白表达量增加（均p<0.05）。提示右归饮对雄性生殖细胞的保护作用依赖于EPO及其信号通路。结论1.体内EPO的丢失或降低,与EPO基因敲除模型、自然衰老模型、腺嘌呤模型3种试验动物的肾虚体质及其雄性生殖功能低下密切相关;2.补充外源性rhEPO对EPO基因敲除模型、自然衰老模型、腺嘌呤模型3种试验动物的肾虚体质及其雄性生殖功能低下具有显着的逆转作用;3.补肾益精经典方右归饮对自然衰老模型、腺嘌呤模型2种肾虚雄性生殖功能低下动物的体质及其生殖功能具有显着的改善作用,其作用与升高EPO及其下游信号通路HIF-1α-STAT5的蛋白表达密切相关,对EPO基因敲除雄性小鼠模型无显着改善作用;4.外源性rhEPO和右归饮对EPO基因敲除、JAK2及STAT5蛋白抑制、缺氧缺糖损伤3种TM4细胞模型的干预试验结果显示,EPO及其下游信号通路是保护细胞损伤的关键环节,也是右归饮发挥作用的关键环节。5.本文建立了EPO基因条件性全身敲除小鼠模型,证明了EPO基因缺失雄性动物表型与“肾精亏虚证”患者临床表现的相似性,支持“EPO可能是肾精的重要生物物质基础”的假设。6.本文报道了EPO对肾虚动物雄性生殖功能的影响,从生殖的角度验证了“EPO可能是‘肾精’的重要物质基础”的假设,阐释了“肾精藏生殖之精”的中医理论。
乔丽君[4]（2019）在《肾阳虚体质动物模型的构建及其线粒体能量代谢研究》文中指出目的:通过先后天病因病机复合造模法,构建肾阳虚体质动物模型。宏观行为学表征和微观分子生物学指标初步论证肾阳虚体质动物模型构建成功,并通过线粒体相关酶学指标与线粒体重测序法,研究肾阳虚体质与线粒体能量代谢低下的关联。方法:1.亲本筛选:SD大鼠雌性130只,雄性90只,通过寒热板示差法筛选亲代阳虚怕冷大鼠,寒热板得分大于300s,纳入亲代组,交配选育。2.造模方法:阳虚孕鼠低温环境、恐伤肾、盐黄柏灌胃复合造模,正常组孕鼠生理盐水灌胃。造模时间:捡到阴栓后,孕鼠开始造模、正常组正常喂养,直到仔鼠出生为止。3.造模后评价:观察子代鼠初生体重、数量。随机选取雌鼠8只、雄鼠8只、正常组8只,观察一般情况、体重、肛温等,进行旷场实验,观察大鼠扎堆时间、粪便粒数等;ELISA方法检测cAMP、cGMP含量。4.线粒体酶学检测:成模后随机从模型组和正常组选取雄鼠8只,采用ELISA方法检测,线粒体ATP酶、Complex I、ComplexⅢ、ComplexⅤ、Na+K+-ATPase含量。5.线粒体重测序检测:随机选取母鼠、模型组、正常组雌鼠各3只,运用DNA重测序技术进行线粒体全基因组测序。结果:1.亲本筛选结果:雌鼠85只,雄鼠41只。2.初生子鼠体重、数量模型组初生幼鼠体重明显低于正常组（P=0.000<0.01）,正常组23只,模型组65只（死亡1只）。3.模型评价（1）宏观行为学结果1一般情况:正常组大鼠精神状态良好、活动正常、反应敏捷、目光有神、毛色光亮。模型组大鼠精神状态尚可、反应较迟钝、喜静、舌色偏暗,毛色晦暗、凌乱。2体重和肛温:模型组大鼠体重明显高于正常组（P=0.000<0.01）,模型组大鼠的肛温低于正常组（P=0.002<0.05）;3模型组较正常组大鼠饮水量降低（P=0.000<0.01）;4模型组大鼠大便粒数较正常组大鼠大便粒数少（P=0.02<0.05）;5扎堆时间:模型组与正常组雌性大鼠扎堆时间相比,模型组扎堆时间较长（P=0.01<0.05）;模型组雄性大鼠的小便量较正常组雄性大鼠的小便量明显增多（P=0.000<0.01）。（2）微观生物学指标与正常组比较:模型组大鼠血清cAMP水平有升高趋势（P=0.177>0.05）;血清cGMP水平显着升高（P=0.00<0.01）;cAMP/cGMP比值显着性降低（P=0.032<0.01）。4.线粒体能量代谢相关酶学检测结果:模型组ComplexⅠ、Na+K+-ATPase明显低于正常组;正常组ComplexⅢ低于模型组。5.线粒体DNA重测序结果SNV结果显示:与参考碱基相比存在99个突变位点,其中错义突变21个,沉默突变72个,其余6个软件未给出突变类型。分别与基因:mt-Rnr1、Trnw、mt-Co1、mt-Co2、mt-Atp6、mt-Nd4相关。结论:1.基于先（恐伤孕鼠）后（寒冷环境）天复合造模法可成功构建肾阳虚体质大鼠模型。2.肾阳虚体质大鼠模型存在线粒体相关酶水平的改变,这与肾阳虚体质人群临床表现畏寒怕冷相一致,初步论证肾阳虚体质存在线粒体能量代谢功能的改变。3.肾阳虚体质动物模型线粒体突变位点的筛查,在一定程度上论证了肾阳虚体质与线粒体位点突变有关,提示肾阳虚体质可能存在与线粒体遗传相关的改变。
邓楚欣[5]（2016）在《阴痫大鼠模型的建立与证候评价》文中认为目的：建立阴痫证大鼠模型,并建立模型的评价方法；制订《阴痫证大鼠模型辨证表》。方法：Wistar雄性大鼠40只,分为正常饮食组20只,高脂寒药饮食组20只（以高脂饲料及生地+大黄煎液饲养）,饲养21天。然后,正常饮食组分为正常对照组、癫痫对照组各10只；高脂寒药饮食组分为阴痫对照组、阴痫中药组各10只；后3组以氯化锂-匹罗卡品（LiCl-PILO）腹腔注射法致痫。致痫当天开始,阴痫中药组接受五生丸合二陈汤煎液灌胃治疗qd×5天。每日观察痫性发作,共31天后实验结束。于实验前、高脂寒药饲养后,及致痫后第1、7、31天共进行5次中医辨证,及症状、行为学观察及测试。实验前、高脂寒药饲养后及致痫后7天尿检17-羟皮质类固醇（17-OH-CS）和皮质醇（CORT）。实验结束（致痫后32天）取血检测环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）及总胆固醇（CHOL）,并取脑组织进行病理检查。根据参考文献和预实验,自订《阴痫证大鼠模型辨证表》,该表由阳虚证、痰证、痫证3个维度组成,共19个辨证项目,包括体表色泽、肛温、蜷缩／扎堆、懒动、肌力、旷场活动、食量、饮水量、体重、大便性状、抽搐与痉挛等。于实验前、高脂寒药饲养后,及致痫后第1、7、31天共进行5次中医辨证。实验结束后,对各项目效能进行评价,筛选出贡献度高或具备辨证分层效果的项目,得出最终实验表格。成果：高脂寒药饲养后,大鼠日常活动减少、多睡懒动、毛色脏乱发黄、耳廓颜色变淡；摄食量减少（P<0.01）；辨证“阳虚证”和“痰证”评分升高（P<0.01）；正常饮食组在饲养21天后,尿17-OH-CS水平较饲养前上升（P<0.01）,而高脂寒药饮食组无此现象。LiCl-PILO注射后,30只大鼠在（8.27±3.403）min潜伏期内首发痫性发作,其后29只大鼠进入癫痫持续状态（SE, Status Epilepticus）,至第31天存活率43.3%（13/30）,存活大鼠全部出现自发痫性发作（SRS, Spontaneous Recurrent Seizures）。首次SE后,3个致痫组大鼠蜷缩嗜睡、拱背竖毛、毛发爪甲淡白;肛温下降（P<0.01）；初期进食量极少（无法测量）；饮水量减少（P<0.01）;抓力时间缩短（P<0.01）；旷场活动量下降,站立数（P<0.01）、跨格数（P<0.05）及排便粒数（P<0.01）；辨证“阳虚证”、“痰证”、“痫证”及“总分”（阴痫证）评分升高（P<0.01）。实验结束时,与阴痫对照组相比,阴痫中药组的饮水量较多（P<0.05）；与自身致痫前比较,阴痫对照组的“痰证”得分无差别,而阴痫中药组得分降低（P<0.01）；阴痫中药组的SRS频率最低,生存时间估值最长（P>0.05）。筛选后所得的最终《阴痫证大鼠模型辨证表》内的重要项目构成了一个拟合度高且稳定的logistic回归模型。结论：高脂寒药饲养可以赋予大鼠“阳虚痰湿”的体质；腹腔注射LiCl-PILO使大鼠具备痫病特点,且赋予了大鼠“阴痫”及“阳虚痰湿”的证候特点；经“以方测证”反证,通过高脂寒药饲养及腹腔注射LiCl-PILO所建立的阴痫大鼠模型,具备“阳虚痰湿”的证候特点;成功建立了包括症状、行为学及中医证候评分的综合方法,适合对阴痫大鼠进行证候评价；所建立的《阴痫证大鼠模型辨证表》实用且可靠。
吉云鹏,徐志伟,敖海清,陈攀,胡海燕,吴皓萌,张晨[6]（2015）在《补肾法对肾虚大鼠空间学习记忆能力的影响》文中进行了进一步梳理【目的】探讨补肾法对房室不节肾虚大鼠空间学习记忆能力及海马DG区细胞超微结构的影响。【方法】将连续配种6个月经鉴定生殖功能下降的SD大鼠随机分为肾虚模型组,六味地黄丸低、高剂量组（剂量分别为4.8、9.6 g·kg-1·d-1）和金匮肾气丸低、高剂量组（剂量分别为5.2、10.4 g·kg-1·d-1）,并以2月龄大鼠作为正常对照组。连续给药30 d后,进行Morris水迷宫实验,采用透射电镜观察海马DG区细胞超微结构。【结果】Morris水迷宫定位航行实验结果显示:与正常对照组比较,肾虚模型组逃避潜伏期显着延长（P<0.01）;与肾虚模型组比较,各给药组潜伏期显着缩短（P<0.05或P<0.01）。空间探索实验结果显示:与正常对照组比较,肾虚模型组原平台所在象限停留时间和平台周边区域一停留时间均显着减少（P<0.01）;与肾虚模型比较,金匮肾气丸高剂量组2项停留时间均显着增加（P<0.05或P<0.01）,六味地黄丸低剂量组平台周边区域一停留时间显着增加（P<0.05）。电镜观察结果显示:与肾虚模型组比较,六味地黄丸高剂量组和金匮肾气丸高剂量组可减轻大鼠海马DG区细胞超微结构病变。【结论】（1）长期房室不节可引起海马DG区细胞超微结构病变,导致空间学习记忆障碍。（2）补肾法可减轻房室不节对大鼠空间学习记忆能力的损伤及海马DG区细胞超微结构病变。（3）补肾方药在改善肾虚大鼠空间学习能力及细胞超微结构病变方面无显着性差异,金匮肾气丸改善房室不节肾虚大鼠的空间记忆能力的作用优于六味地黄丸。
吉云鹏[7]（2015）在《补肾治法对肾虚大鼠海马神经干细胞增殖机制的研究》文中提出目的：本研究从在体实验方面展开,通过建立肾虚大鼠模型并用补肾治法进行干预,从动物行为学、组织形态学和分子生物学等多角度多层面,观察肾虚大鼠海马神经干细胞的增殖变化情况和补肾治法的干预作用,探讨肾主藏精的功能与海马神经干细胞增殖的内在关系,以及补肾治法对神经干细胞增殖分化作用机制,并为中医药结合现代干细胞技术在治疗临床重大疑难疾病提供理论与实验依据。方法：一、理论研究通过对相关文献的梳理,讨论中医肾主藏精与干细胞的增殖分化的关系及影响神经干细胞增殖分化的因素。二、实验研究采用单纯房室不节（雌雄比例5：1合笼30天）、长期房室不节（雌雄比例2：1合笼6个月）、“房室不节,劳倦过度”（雌雄比例5：1合笼,并结合1小时强迫游泳,30天）及灌胃腺嘌呤不同造模方法制备肾虚大鼠模型。通过观察Morris水迷宫实验及组织形态学等指标变化,评价不同造模方法制备的肾虚大鼠模型质量,为进一步研究提供理想的肾虚动物模型。观察补肾治法对肾虚模型大鼠的空间学习记忆能力及海马组织形态学的影响；补肾治法对肾虚模型大鼠海马DG区细胞超微结构及增殖凋亡相关蛋白表达的影响；补肾治法对肾虚模型大鼠海马DG区细胞β-catenin、Wntl、CyclinDl和c-Myc表达的影响。结果：一、理论研究中医肾主藏精与干细胞的增殖分化存在相关性,补肾方药对干细胞的增殖和分化均有一定的干预效应。二、实验研究（一）补肾治法对单纯房室不节肾虚大鼠的空间学习记忆能力的影响Morris水迷宫定位航行实验中,组间两两比较,与正常对照组比较,肾虚模型组潜伏期明显延长（P<0.01,P<0.05）；与肾虚模型组比较,艾灸肾俞穴组潜伏期明显缩短（P<0.05）；与艾灸肾俞穴组比较,六味地黄丸低剂量组和六味地黄丸高剂量组大鼠逃避潜伏期明显延长（P<0.01,P<0.05）。空间探索实验中,大鼠入水后前20s,与正常对照组相比,肾虚模型组穿越原平台区域次数和平台周围区域一时间均有所减少,但无统计学意义；与肾虚模型组比较,六味地黄丸高剂量组大鼠穿越原平台区域次数明显提高（P<0.05）,艾灸肾俞穴组虽有所增长,但差异无统计学意义,六味地黄丸高剂量组和艾灸肾俞穴组大鼠平台周围区域一时间均明显提高（P<0.05）；与六味地黄丸低剂量组比较,六味地黄丸高剂量组和艾灸肾俞穴组穿越原平台区域次数和平台周围区域一时间明显延长（P<0.01,P<0.05）。（二）补肾治法对长期房室不节肾虚大鼠海马DG区细胞生长变化的影响1. Morris水迷宫实验结果定位航行实验中与正常对照组比较,肾虚模型组潜伏期明显延长（P<0.01）；与肾虚模型组比较,其余各干预组潜伏期明显缩短（P<0.01,P<0.05）；各干预组间无显着性差异。空间探索实验中,入水后20s和60s内,与正常对照组相比,肾虚模型组原平台所在象限停留时间和平台周边区域一停留时间明显减少（P<0.01,P<0.05）；与肾虚模型组相比,金匮肾气丸高剂量组平台所在象限停留时间和平台周边区域一停留时间明显增加（P<0.05）。入水后60s内,六味地黄丸低剂量组平台周边区域一停留时间明显增加（P<0.05）；与金匮肾气丸高剂量组相比,金匮肾气丸低剂量组和艾灸肾俞穴组平台周边区域一停留时间明显减少（P<0.01,P<0.05）。2.各组大鼠海马DG区细胞超微结构变化电镜检测结果肾虚模型组大鼠海马DG区发生细胞超微结构损伤,主要表现为神经微丝和微管结构有明显的溶解,线粒体发生明显的空泡变性。各干预组海马DG区发生细胞超微结构损伤不同程度的减轻。其中,以金匮肾气丸高剂量组情况最佳。3.各组大鼠海马DG区免疫组织化学检测结果与正常对照组比较,肾虚模型组大鼠海马DG区细胞β-catenin、NeuN、PCNA表达均明显减少（P<0.01,P<0.05）,TUNEL表达均明显增加,与肾虚模型组比较,艾灸肾俞穴组大鼠海马DG区细胞NeuN、PCNA表达均明显增加（P<0.05）,其余各用药组大鼠海马DG区细胞β-catenin、NeuN、PCNA表达均明显增加（P<0.01,P<0.05）,TUNEL表达均明显减少（P<0.01,P<0.05）；高剂量组疗效优于低剂量组,药物组疗效优于艾灸组。（三）补肾治法对“房室不节,劳倦过度”肾虚大鼠海马DG区细胞生长变化的影响1. Morris水迷宫实验结果定位航行实验中,与正常对照组比较,腺嘌呤组和肾虚模型组潜伏期明显延长（P<0.01）；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组和金匮肾气丸组潜伏期明显缩短（P<0.01,P<0.05）；与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组潜伏期明显缩短（P<0.05）；与六味地黄丸组比较,金匮肾气丸组潜伏期差异,无统计学意义。空间探索实验中,与正常对照组相比,腺嘌呤组和肾虚模型组大鼠站台穿越次数、平台周边区域一停留时间和路程明显减少（P<0.01）；与肾虚模型组相比,金匮肾气丸组大鼠站台穿越次数、平台周边区域一停留时间和路程明显增加（P<0.01,P<0.05）,六味地黄丸组大鼠站台穿越次数和路程明显增加（P<0.05）：与腺嘌呤组相比,腺嘌呤加药组站台穿越次数、平台周边区域一停留时间和路程明显增加（P<0.05）。2.各组大鼠肾、睾丸组织形态学改变肾虚模型组和腺嘌呤组大鼠肾脏和睾丸存在明显的组织形态学损伤。肾虚模型组可见肾皮质中肾小管中可见明显红染的透明管型,间质血管充血明显,局部有明显的炎性病变,周围有炎性细胞浸润。腺嘌呤组大鼠肾脏存在更严重的组织形态学损伤,主要表现为肾单位明显减少,肾小管扩张呈网状,肾小管上皮细胞变成扁平状,有些肾小管中可见脓液,里面含有炎性细胞和坏死的细胞碎片,间质中可见明显的炎性细胞浸润。各干预组肾脏的组织形态学损伤均有不同程度的减轻。肾虚模型组和腺嘌呤组大鼠睾丸曲精细管明显的萎缩,腔内生精细胞明显减少,甚至坏死。各干预组睾丸的组织形态学损伤均有不同程度的减轻。3.各组大鼠肾、睾丸免疫组织化学检测结果各组大鼠睾丸免疫组织化学检测结果可见,与正常对照组比较,肾虚模型组和腺嘌呤组大鼠睾丸细胞β-catenin表达明显减少（P<0.01）, PCNA表达虽有减少,但差异无统计学意义,TUNEL表达均明显增加（P<0.01）；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组和金匮肾气丸组大鼠睾丸细胞β-catenin口PCNA表达均明显增加（P<0.01）,TUNEL表达均明显减少（P<0.01）；与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组大鼠睾丸细胞β-catenin表达明显增加（P<0.01）, PCNA表达虽有增加,但差异无统计学意义,TUNEL表达均明显减少（P<0.01）；与六味地黄丸组比较,金匮肾气丸组各项表达差异无统计学意义（P<0.05）。各组大鼠肾脏免疫组织化学检测结果可见,与正常对照组比较,腺嘌呤组大鼠肾脏PCNA表达明显减少（P< 0.01）, β-catenin表达虽有减少,但差异无统计学意义,肾虚模型组和腺嘌呤组TUNEL表达均明显增加（P<0.01）；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组β-catenin表达均明显增加（P<0.01）,金匮肾气丸组虽有增加,但差异无统计学意义,六味地黄丸组和金匮肾气丸组TUNEL表达均明显减少（P<0.01）；与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组大鼠肾脏β-catenin和表达明显增加（P<0.01）,TUNEL表达均明显减少（P<0.01）。（四）补肾法对肾虚大鼠海马DG区细胞Wnt信号通路相关蛋白的影响1.各组海马DG区组织Western-blotting结果与正常对照组比较,肾虚模型组和腺嘌呤组Wnt1、β-catenin、c-Myc及CyclinD1蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组和金匮肾气丸组Wnt1、β-catenin、c-Myc及CyclinD1蛋白相对表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组Wnt1、β-catenin、c-Myc及CyclinDl蛋白相对表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。2.各组海马DG区Real-time PCR检测结果与正常对照组比较,肾虚模型组和腺嘌呤组β-catenin mRNA、CyclinD1 mRNA和c-Myc mRNA相对表达量明显降低（P<0.05, P<0.01）, Wnt1 mRNA相对表达量虽有降低,但无统计学差异；与肾虚模型组比较,六味地黄丸组和金匮肾气丸组Wnt1mRNA、β-catenin mRNA、c-Myc mRNA及CyclinD1 mRNA相对表达明显升高（P<0.05,P<0.01）；与腺嘌呤组比较,腺嘌呤加药组β-catenin mRNA、c-Myc mRNA及CyclinD1 mRNA相对表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论：（一）长期房室不节、房室不节结合劳倦过度及灌胃腺嘌呤均可制作理想的肾虚大鼠模型,今后可以根据实验操作需要和研究重心的不同,进行选择。（二）补肾治法可改善肾虚大鼠空间学习记忆障碍、海马DG区细胞超微结构及组织形态学病变。（三）补肾方药促进肾虚大鼠海马DG区神经干细胞增殖,其作用机制可能是上调肾虚大鼠海马DG区细胞Wntl表达,激活经典Wnt信号通路,导致胞内β-catenin大量聚集,上调下游靶基因c-Myc和Cyclin D1表达,启动靶基因转录,促进海马神经干细胞增殖。（四）中医肾精与海马神经干细胞可能存在某种程度上的联系,肾主藏精的功能体现在促进干细胞的增殖,补肾治法可能通过激活经典Wnt信号转导通路调控干细胞的增殖。创新点：（一）提出新的假说：肾主藏精的功能主要表现在干细胞的保有与增殖,补肾治法主要通过激活经典Wnt信号转导通路调控干细胞的增殖。（二）通过在体实验,从干细胞的增殖调控角度来探讨肾主藏精的内涵,为中医肾藏象理论的研究与发展提供新的思路与实验依据,为补肾治法结合干细胞技术治疗神经系统疾病提供理论和实验依据。
颜亭祥[8]（2010）在《“劳倦过度、房事不节”肾阳虚模型下丘脑—垂体—肾上腺皮质—胸腺轴的改变及分子免疫机制的研究》文中研究说明目的：探讨“劳倦过度、房事不节”诱发的肾阳虚模型小鼠细胞和分子免疫调节作用机制,同时,进一步研究该模型对下丘脑-垂体-肾上腺皮质-胸腺轴的影响作用机理。方法：以已经建立的“劳倦过度、房事不节”肾阳虚小鼠为实验动物,将小鼠随机分为三组：正常对照组、劳倦过度、房事不节组（模型组）和金匮肾气丸治疗组。对各组小鼠胸腺组织的形态学进行光学显微镜和电子显微镜观察,并测定小鼠淋巴细胞转化率以及γ-干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-4（IL-4）等Th1/Th2类细胞因子含量；采用原位逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）,对IFN-γ和IL-4的mRNA转录水平进行检测分析；利用流式细胞术（FACS）对小鼠淋巴细胞的细胞周期和凋亡进行分析。同时用放射免疫方法测定肾上腺轴激素含量；利用基因芯片技术筛选出脑基因表达谱中与免疫相关的上、下调基因。结果：“劳倦过度、房事不节”诱发的肾阳虚模型导致小鼠胸腺组织形态和超微结构发生改变,脾细胞淋巴细胞转化率下降,Th1类细胞因子IL-2和IFN-γ,水平也显着下降,而Th2类细胞因子IL-4活性明显上升,细胞凋亡率升高,下丘脑-垂体-肾上腺轴激素水平降低。同时,从485个脑基因中筛选到36个具有显着性的与免疫相关脑差异表达上、下调基因,并作了进一步分析。而金匮肾气丸对上述这些异常可发挥免疫调节作用。结论：“劳倦过度、房事不节”肾阳虚模型小鼠胸腺组织形态和超微结构被破坏,并通过免疫相关基因的改变而引起Th1类和Th2类细胞因子失衡和细胞周期通路阻滞,导致机体免疫功能发生紊乱。金匮肾气丸可以通过调整细胞因子水平,提高肾上腺轴激素含量,降低淋巴细胞凋亡从而改善胸腺功能,调节免疫功能失调。同时,从器官到细胞直至基因水平上进一步证实中医的肾阳虚证与下丘脑-垂体-肾上腺皮质-胸腺轴功能低下有关。
宋洁[9]（2010）在《“劳倦过度、房室不节”致肾阳虚及补肾阳对小鼠甲状腺轴及睾丸基因表达谱的影响》文中研究表明目的：探讨“劳倦过度、房室不节”致肾阳虚小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的神经内分泌、病理形态学、凋亡相关基因表达的变化,以及下丘脑-垂体-性腺轴的睾丸基因表达谱的改变,同时,研究金匮肾气丸对肾阳虚小鼠甲状腺轴及性腺轴影响的部分作用机理。方法：建立“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠模型。采用光镜、电镜、放射免疫分析、免疫组织化学分析、基因芯片技术等方法,对正常、肾阳虚、补肾阳三种小鼠进行甲状腺的组织形态学及超微结构观察、血清甲状腺轴激素TSH、T3、T4含量测定、甲状腺组织凋亡相关基因Fas、FasL、Bcl-2、Bax和Caspase-3表达检测,并绘制睾丸组织基因表达谱比较的散点图,对睾丸组织基因芯片差异表达基因进行筛选和分析。结果：1.通过对小鼠体温、体重及一般状况的观察,表明“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠模型复制成功；2.肾阳虚小鼠存在甲状腺病理形态学的损伤,金匮肾气丸可以改善肾阳虚小鼠甲状腺组织形态及超微结构发生的损伤；3.肾阳虚小鼠存在甲状腺轴激素水平下降,金匮肾气丸治疗后可上调肾阳虚小鼠血清甲状腺轴激素水平；4.肾阳虚小鼠可能存在甲状腺组织促凋亡基因Bax表达增加,金匮肾气丸可使肾阳虚小鼠甲状腺组织FasL、Bax蛋白表达明显下降；5.绘制了模型组/对照组、治疗组/模型组基因表达谱比较的散点图,筛选出差异表达基因,模型组/对照组上调2425个,下调3080个,治疗组/模型组上调99个,下调96个。模型组/对照组上调而治疗组/模型组下调的基因10个,模型组/对照组下调而治疗组/模型组上调的基因15个,均主要与细胞结构/功能、物质/能量代谢、信号转导/传递、转录/翻译、增殖/分化、细胞周期、细胞凋亡等有关。并探讨了金匮肾气丸使模型组小鼠下调的睾丸基因Usp39、Jam2、Cdc20上调、上调的睾丸基因Argl、Akap10下调的作用机制。结论：“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠甲状腺轴激素含量下降,甲状腺组织形态及超微结构损伤,甲状腺促凋亡基因Bax表达增加,睾丸组织中与细胞周期、能量代谢及精子发生相关的基因表达谱改变,导致小鼠甲状腺轴及性腺轴功能低下。金匮肾气丸可以提高肾阳虚小鼠甲状腺轴激素含量,改善甲状腺的组织形态及超微结构,并可通过降低FasL、Bax的表达水平,抑制甲状腺细胞凋亡,促进甲状腺轴功能恢复,还可以调节与细胞周期及精子发生等相关睾丸基因的表达,促进性腺轴功能恢复。
张诏[10]（2010）在《肾气丸与右归丸对肾阳虚大鼠生精功能及RAAS影响的比较研究》文中研究表明本论文首先对“肾主生殖”与“肾主水”这两大生理功能等内容从文献角度进行系统阐释和论述；对一直存在较多争议的关于“肾精”、“肾气”、“肾阴”、“肾阳”等基本概念,从其产生历史渊源角度进行探讨；又着重对补肾名方肾气丸、右归丸的功用及配伍规律做出了辨析,对两方功用、主治证候、古今临床应用等进行比较,从而提出“肾气丸补肾气为主,主要侧重于恢复肾主水之功能；右归丸温补肾阳为主,主要侧重于恢复肾主藏精、主生殖功能”的假说。对此进行了动物实验研究,以期对中医理论中“肾主生殖”、“肾主水”有更为深入的认识,并对补肾治法的机理进行初步比较。目的：在充分参考现有“肾阳虚”模型优劣基础上,采用“劳倦过度、房室不节”传统病因造模,与“庆大霉素”病理造模相结合的造模方法,建立“劳倦过度、房室不节加庆大霉素”的肾阳虚大鼠模型,利用该模型,主要从生殖机能及肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system, RAAS）入手,观察肾气丸、右归丸对肾阳虚大鼠的生殖机能及RAAS激素的影响,从而揭示两方在补肾机理方面的差异。方法：通过强迫大鼠游泳造成劳倦过度,并以College效应诱导房室不节,同时加用加注射庆大霉素造成肾阳虚模型；应用肾气丸、右归丸混悬液灌胃以分别进行药物干预；主要采用酶联免疫分析、细胞组织化学等技术,对各实验组大鼠精子质量,血清性激素睾酮（testosterone, T）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone, FSH）、黄体生成素（lymphatic system, LH）及肾素、血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, AngⅡ）、醛固酮（aldosterone, ALD）等进行测定。结果：1.通过对大鼠一般情况的观察,表明本实验采取造模方法可以成功复制出肾阳虚大鼠模型。肾阳虚大鼠睾丸重量下降、精子数量减少、存活率、精子活动率低,畸形率高；而肾气丸、右归丸可提高大鼠睾丸重量、增加精子数量、提高存活率、增强精子活动率,降低畸形率。2.造模过程对肾素无明显影响,但可致AngⅡ、ALD水平升高,肾气丸、右归丸干预对升高的AngⅡ无明显影响,肾气丸对ALD有降低作用,右归丸可使高ALD水平有降低趋势,但无统计学意义。3.造模过程可使T、FSH、LH水平下降,肾气丸、右归丸对T、FSH、LH水平均有不同程度恢复作用,但右归丸效果略优于肾气丸。结论：“劳倦过度、房室不节加庆大霉素”造模方法可成功复制出大鼠肾阳虚模型。肾阳虚大鼠出现了生精功能低下及部分RAAS激素的紊乱,肾气丸、右归丸可改善肾阳虚模型大鼠生精功能,且右归丸略优于肾气丸。提示右归丸对“肾主生殖”的生理功能恢复略优于肾气丸。肾气丸对RAAS中的ALD水平有明显影响,提示肾气丸对“肾主水”的生理功能恢复略优于右归丸。
二、房室不节对雄性小鼠生殖机能影响的初步研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、房室不节对雄性小鼠生殖机能影响的初步研究（论文提纲范文）
（1）金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 男性不育症中医药诊疗研究进展 |
| 1. 男性不育症中医病名认识 |
| 2. 男性不育症病因病机 |
| 3. 补肾法为主的男性不育症中医药治疗 |
| 4. 补肾法为主治疗男性不育症的相关机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 特发性弱精子症现代医学诊治研究进展 |
| 1. 特发性弱精子症流行病学 |
| 2. 特发性弱精子症诊断 |
| 3. 特发性弱精子症可能病因及机制 |
| 3.1 氧化应激损伤 |
| 3.2 线粒体功能障碍 |
| 3.3 表观遗传学作用 |
| 3.4 基因异常 |
| 3.5 精子蛋白组差异 |
| 3.6 翻译后修饰 |
| 3.7 环境因素 |
| 3.8 不良生活方式 |
| 3.9 精神心理因素 |
| 4. 特发性弱精子症的治疗 |
| 4.1 一般治疗 |
| 4.2 药物治疗 |
| 4.3 辅助生殖技术 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性及安全性临床研究 |
| 前言 |
| 1. 研究伦理 |
| 2. 研究对象 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 2.5 中止/退出标准 |
| 2.6 中止/退出病例的处理 |
| 3. 研究方法 |
| 3.1 分组及样本量计算 |
| 3.2 研究用药及疗程 |
| 3.3 观察指标及观察时点 |
| 3.4 精液采集及精液分析 |
| 4. 统计学分析 |
| 5. 研究结果 |
| 5.1 试验入组及完成情况 |
| 5.2 一般资料分析 |
| 5.3 有效性分析 |
| 5.4 安全性分析 |
| 6. 讨论 |
| 7. 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型的药效学研究 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 动物伦理 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂与药品 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 实验检测指标 |
| 1.7 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠一般情况变化 |
| 2.2 大鼠体重、睾丸、附睾重量变化 |
| 2.3 大鼠睾丸、附睾脏器指数变化 |
| 2.4 大鼠精子浓度变化 |
| 2.5 大鼠精子活力变化 |
| 2.6 大鼠性激素水平变化 |
| 2.7 大鼠睾丸、附睾HE染色变化 |
| 2.8 大鼠肝肾功指标变化 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 ORN诱导的弱精子症大鼠模型的构建 |
| 3.2 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的有效性分析 |
| 3.3 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的安全性分析 |
| 4. 小结 |
| 实验二 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 实验检测指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠精子GSH-Px、SOD及MDA及变化 |
| 2.2 大鼠精子MMP及早期凋亡率变化 |
| 2.3 大鼠精子线粒体ATP变化 |
| 2.4 大鼠Pink1、Parkin、p62和LC3Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1mRNA及蛋白表达变化 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
| 附件1 |
| 附件2 |
| 中医药科技查新报告书 |
（2）葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠疗效的微生态学机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词(Abbreviations) |
| 细菌名词英--中对照 |
| 前言 |
| 第一章 肠道湿热证泄泻小鼠模型的建立及葛根芩连汤疗效 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 肠道湿热证泄泻模型的建立 |
| 2.2 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠的疗效 |
| 3.讨论 |
| 第二章 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠血常规和脏器指数的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 肠道湿热证泄泻造模对小鼠血常规的影响 |
| 2.2 肠道湿热证泄泻造模对小鼠脏器指数的影响 |
| 2.3 葛根芩连汤治疗对肠道湿热证泄泻小鼠血常规的影响 |
| 2.4 葛根芩连汤治疗对肠道湿热证泄泻模型小鼠脏器指数的影响 |
| 3.讨论 |
| 第三章 葛根莲芩汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道可培养微生物、微生物活度和酶活性的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道可培养微生物的影响 |
| 2.2 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道微生物活度的影响 |
| 2.3 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道内容物酶活性的影响 |
| 2.4 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道黏膜酶活性的影响 |
| 2.5 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠可培养微生物的影响 |
| 2.6 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道微生物活度的影响 |
| 2.7 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道内容物酶活性影响 |
| 2.8 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道黏膜酶活性的影响 |
| 3.讨论 |
| 第四章 肠道湿热证泄泻小鼠肠道微生物特征 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 有效序列的分析评估 |
| 2.2 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道OTU 数目的影响 |
| 2.3 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道微生物多样性的影响 |
| 2.4 肠道湿热证泄泻造模对模型小鼠肠道内容物细菌在门水平上的影响 |
| 2.5 肠道湿热证泄泻造模对模型小鼠肠道内容物细菌在属水平上的影响 |
| 2.6 肠道湿热证泄泻造模对模型小鼠肠道内容物细菌种水平上影响 |
| 2.7 物种Lefse 差异分析 |
| 3.讨论 |
| 第五章 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌特征的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 有效序列分析评估 |
| 2.2 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道 OTU 数目的影响 |
| 2.3 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌多样性的影响 |
| 2.4 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌门水平上的影响 |
| 2.5 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌属水平上的影响 |
| 2.6 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌种水平上的影响 |
| 2.7 物种显着性差异分析-Lefse分析 |
| 3.讨论 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A 作者简介 |
| 综述 泄泻中医证型研究进展 |
| 参考文献 |
（3）EPO与肾虚雄性生殖功能低下的相关性及右归饮的改善作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 EPO与肾虚雄性生殖功能低下的相关性研究 |
| 第一节 EPO基因敲除雄性小鼠表型与“肾精亏虚证”的相似性观察 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 EPO基因敲除小鼠的鉴定 |
| 2.2 EPO基因敲除雄性小鼠外观形态、体重、饮食量显着差于野生型小鼠 |
| 2.3 EPO基因敲除雄性小鼠主要脏器组织形态显着差于野生型小鼠 |
| 2.4 EPO基因敲除雄性小鼠精子数量、畸形率、形态显着差于野生型小鼠 |
| 2.5 EPO基因敲除雄性小鼠血液指标显着差于野生型小鼠 |
| 2.6 EPO基因敲除雄性小鼠HIF1α-STAT5 通路蛋白显着低于野生型小鼠 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 第二节 自然衰老致肾虚雄性生殖功能低下小鼠体质及体内EPO的变化 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠建立成功 |
| 2.2 自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠EPO及其信号通路显着变化 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 第三节 腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠体质及体内EPO的变化 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠模型建立成功 |
| 2.2 腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠EPO及其信号通路显着变化 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 第二章 外源性rhEPO对肾虚雄性生殖功能低下动物体质改善及EPO的调节作用观察 |
| 第一节 外源性rhEPO对肾虚雄性生殖功能低下模型动物体质改善作用 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 外源性rhEPO能显着改善EPO基因敲除雄性小鼠体质 |
| 2.2 外源性rhEPO能显着改善自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠体质 |
| 2.3 外源性rhEPO能显着改善腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠体质 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 第二节 外源性rhEPO对肾虚雄性生殖功能低下动物EPO及其信号通路的调节作用 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 外源性rhEPO显着升高EPO基因敲除雄性小鼠EPO及信号通路 |
| 2.2 外源性rhEPO显着升高自然衰老肾虚雄性生殖低下小鼠EPO及其信号通路 |
| 2.3 外源性rhEPO显着调节腺嘌呤致肾虚雄性生殖低下大鼠EPO及信号通路 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 第三节 外源性rhEPO对 TM4 细胞缺氧缺糖损伤的保护作用及机制研究 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 TM4细胞模型条件及给药剂量选择 |
| 2.2 外源性rhEPO能显着保护EPO基因敲除损伤的TM4 细胞 |
| 2.3 外源性rhEPO不能显着保护JAK2、STAT5 蛋白抑制的TM4 细胞 |
| 2.4 外源性rhEPO能显着保护缺氧缺糖损伤的TM4 细胞 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 第三章 右归饮对肾虚雄性生殖功能低下动物体质改善及EPO的调节作用观察 |
| 第一节 右归饮对肾虚雄性生殖功能低下动物体质改善作用 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 右归饮不能显着改善EPO基因敲除雄性小鼠体质 |
| 2.2 右归饮能显着改善自然衰老肾虚雄性生殖功能低下小鼠体质 |
| 2.3 右归饮能显着改善腺嘌呤致肾虚雄性生殖功能低下大鼠体质 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 第二节 右归饮对肾虚雄性生殖功能低下动物体内EPO及其信号通路的调节作用 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 右归饮不能显着影响EPO基因敲除雄性小鼠EPO及信号通路 |
| 2.2 右归饮能升高自然衰老肾虚雄性生殖低下小鼠EPO及信号通路 |
| 2.3 右归饮能升高腺嘌呤致肾虚雄性生殖低下大鼠体内EPO及调节信号通路 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 第三节 右归饮对TM4细胞缺氧缺糖损伤的保护作用及机制研究 |
| 1 试验材料和方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 TM4细胞模型条件及给药剂量选择 |
| 2.2 右归饮不能显着保护EPO基因敲除损伤的TM4细胞 |
| 2.3 右归饮不能显着保护JAK2或STAT5 蛋白抑制损伤的TM4 细胞 |
| 2.4 右归饮能显着保护缺氧缺糖损伤的TM4细胞 |
| 3 试验讨论 |
| 4 试验小结 |
| 全文总结 |
| 创新及意义 |
| 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间科研工作汇报 |
| 附录 :中英文缩略词对照表 |
（4）肾阳虚体质动物模型的构建及其线粒体能量代谢研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词对照表 |
| 引言 |
| 第一章 肾阳虚体质动物模型的构建 |
| 1.中医体质动物模型研究概况 |
| 1.1 中医证候动物模型研究现状 |
| 1.2 中医体质动物模型研究概况 |
| 1.3 肾阳虚证动物模型研究现状 |
| 1.4 肾阳虚体质动物模型构建思路 |
| 2.肾阳虚体质动物模型的构建 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3.肾阳虚体质动物模型的评价 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 数据处理与分析 |
| 3.5 肾阳虚动物模型结果评价 |
| 4.讨论 |
| 4.1 宏观行为学评价 |
| 4.2 生物学指标评价 |
| 第二章 肾阳虚与线粒体能量代谢异常性疾病的酶学研究 |
| 1.线粒体能量代谢相关酶异常与肾阳虚证关联 |
| 1.1 线粒体与机体产能的关联机制 |
| 1.2 肾阳虚与线粒体酶能量代谢异常性疾病的相关研究进展 |
| 2.肾阳虚体质动物模型线粒体相关酶检测 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 方法 |
| 2.4 结果 |
| 3.讨论 |
| 第三章 线粒体DNA与肾阳虚体质能量代谢低下的关联研究 |
| 1.肾阳虚与线粒体DNA突变相关研究进展 |
| 1.1 线粒体DNA(mtDNA)突变导致的能量代谢异常性疾病与肾阳虚相关 |
| 1.2 肾阳虚与相关线粒体DNA突变位点的研究 |
| 2.基因重测序技术筛选肾阳虚体质模型SNP位点 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 数据分析 |
| 2.3 结果分析 |
| 3.讨论 |
| 结论 |
| 问题及展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件一:文献综述 |
| 参考文献 |
| 附件二:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（5）阴痫大鼠模型的建立与证候评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 痫病的中医学研究现状及进展 |
| 1.1.1 痫病的定义 |
| 1.1.2 痫病的病因病机 |
| 1.1.3 痫病的分类 |
| 1.1.4 痫病的中医治疗 |
| 1.1.5 中医药相关癫痫动物实验研究 |
| 1.1.6 阴阳分治法的源流 |
| 1.1.7 五生丸的源流考究 |
| 1.2 癫痫的西医学研究现状及进展 |
| 1.2.1 癫痫的定义 |
| 1.2.2 癫痫的分类 |
| 1.2.3 癫痫的病理生理 |
| 1.2.4 癫痫的西药治疗进展 |
| 1.2.5 癫痫动物实验研究进展 |
| 1.3 动物模型的气虚证、阳虚证、寒证及痰证的造模及评价方法 |
| 1.3.1 气虚证动物模型的建立与评价 |
| 1.3.2 阳虚证动物模型的建立与评价 |
| 1.3.3 寒证动物模型的建立与评价 |
| 1.3.4 痰证动物模型的建立与评价 |
| 1.3.5 构建阴痫证大鼠模型及其评价方法 |
| 第二章 动物实验部分-阴痫大鼠模型的建立与证候评价 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验药物及试剂 |
| 2.1.3 实验器材 |
| 2.1.4 其它材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 阶段1 适应性饲养 |
| 2.2.2 阶段2 “阳虚痰湿内盛”体质赋予 |
| 2.2.3 阶段3 痫证建立 |
| 2.2.4 阶段4 治疗、观察及取材 |
| 2.3 实验指标 |
| 2.3.1 一般监测项目 |
| 2.3.2 行为学监测项目 |
| 2.3.3 症状学观察项目 |
| 2.3.4 填写《阴痫证大鼠模型辨证表》 |
| 2.3.5 检验及病理指标 |
| 2.4 统计学分析 |
| 2.4.1 一般计量资料 |
| 2.4.2 癫痫造模及致痫后自发痫性发作相关资料 |
| 2.4.3 《阴痫证大鼠模型辨证表》所得计量及计数资料分析 |
| 2.4.4 生存分析(Survival Analysis) |
| 2.4.5 二元Logistic回归 |
| 2.5 技术路线 |
| 2.6 实验结果及分析 |
| 2.6.1 一般情况观察 |
| 2.6.2 体重(g)及Lee’s Index |
| 2.6.3 肛温(℃) |
| 2.6.4 饲料减少量(g) |
| 2.6.5 供水减少量(ml) |
| 2.6.6 排便量(g) |
| 2.6.7 抓力时间(s)测定 |
| 2.6.8 旷场试验活动 |
| 2.6.9 行为、姿势、步态观察 |
| 2.6.10 癫痫发作观察 |
| 2.6.11 存活时间比较及生存分析 |
| 2.6.12 尿液CORT、17-OH-CS含量 |
| 2.6.13 血液cAMP、cGMP及CHOL含量 |
| 2.6.14 脑组织HE染色切片观察 |
| 2.6.15 《阴痫证大鼠模型辨证表》比较 |
| 2.6.16 辨证表格效能分析(二元Logistic回归) |
| 2.6.17 造模施加因素效能分析(二元Logistic回归) |
| 2.7 本研究的一般结论 |
| 2.7.1 一般情况及行为、姿势、步态观察 |
| 2.7.2 体重、肛温等一般观测指标 |
| 2.7.3 抓力及旷场活动 |
| 2.7.4 癫痫症状学指标 |
| 2.7.5 实验室检验指标 |
| 2.7.6 脑组织病理指标 |
| 2.7.7 生存分析 |
| 2.7.8 《阴痫证大鼠模型辨证表》得分比较 |
| 2.7.9 辨证表格效能分析 |
| 2.7.10 造模施加因素效能分析 |
| 结语 |
| 3.1 本研究的综合结论 |
| 3.1.1 高脂寒药饲养赋予了大鼠“阳虚痰湿内盛”体质 |
| 3.1.2 腹腔注射氯化锂-匹罗卡品成功制作大鼠痫病模型 |
| 3.1.3 通过前两项方法制成的阴痫证大鼠模型具有“阳虚痰湿内盛”的证候特点 |
| 3.1.4 通过“以方测证”的方法反证模型“阳虚痰湿内盛”的证候特点 |
| 3.1.5 成功建立阴痫证大鼠模型的观察方法 |
| 3.1.6 制订《阴痫证大鼠模型辨证表》 |
| 3.1.7 对于阴痫证大鼠模型中医证候特点的推测 |
| 3.2 本研究的创新之处 |
| 3.2.1 复合中、西医病理因素建立阴痫大鼠模型 |
| 3.2.2 建立针对阴痫证动物模型中医辨证的方案 |
| 3.3 进一步研究设想 |
| 3.3.1 对中西医复合因素建立“阴痫证”模型的想法 |
| 3.3.2 对提高LiC1-PILO法致痫大鼠存活率的想法 |
| 3.3.3 对中药干预本证模型的想法 |
| 3.3.4 进一步完善《阴痫证大鼠模型辨证表》的想法 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1：阴痫证大鼠模型辨证表-原始表格 |
| 附录2：阴痫证大鼠模型辨证表-正式实验表格 |
| 附录3：阴痫证大鼠模型辨证表-最终表格 |
| 附录4：各阶段辨证表格各组内得分组成列联表统计资料 |
| 附录5：实验图片 |
| 附录6：脑组织HE染色 |
| 附录7：二元Logistic回归统计过程 |
| 附录8：阴痫、阳痫不同的定义、症候及治用方 |
| 附录9：五生丸及其类方汇总 |
| 附录10：英文缩略语 |
| 附录11：统计学审核证明 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（6）补肾法对肾虚大鼠空间学习记忆能力的影响（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 1.1实验动物及分组 |
| 1.2主要仪器 |
| 1.3实验方药及给药 |
| 1.4Morris水迷宫实验[2-3] |
| 1.5电镜观察 |
| 1.6统计方法 |
| 2结果 |
| 2.1各组定位航行实验结果 |
| 2.2各组空间探索实验结果 |
| 2.3各组电镜观察结果 |
| 3讨论 |
（7）补肾治法对肾虚大鼠海马神经干细胞增殖机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 肾主藏精与干细胞的增殖分化的相关性 |
| 一、中医学对肾主藏精的认识 |
| 二、干细胞的研究进展 |
| 三、精与干细胞的关系 |
| 四、肾主藏精与干细胞的增殖分化的关系 |
| 第二节 中医药对神经干细胞增殖分化的研究进展 |
| 一、神经干细胞的研究进展 |
| 二、影响神经干细胞增殖分化的因素 |
| 三、中医药对神经干细胞增殖分化的影响 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 补肾法对肾虚大鼠动物行为学及组织形态学的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 补肾法对长期房室不节肾虚大鼠动物行为学及组织形态学的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 补肾法对“房室不节,劳倦过度”肾虚大鼠海马DG区细胞生长变化的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 第四节 补肾法对肾虚大鼠海马DG区细胞Wnt信号通路的影响 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 一、研究结论 |
| 二、创新点 |
| 三、存在主要问题 |
| 四、展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（8）“劳倦过度、房事不节”肾阳虚模型下丘脑—垂体—肾上腺皮质—胸腺轴的改变及分子免疫机制的研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 实验材料与方法 |
| 实验一"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠模型的建立 |
| 实验二"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠胸腺组织学的观察 |
| 实验三"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠脾淋巴细胞转化率的测定 |
| 实验四"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠血清IL-2的测定 |
| 实验五"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠脾淋巴细胞Th1/Th2类细胞因子的测定 |
| 实验六"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠脾淋巴细胞IFN-γ mRNA及IL-4 mRNA转录水平的(RT-PCR)检测 |
| 实验七"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠脾淋巴细胞周期及凋亡率的检测 |
| 实验八"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠肾上腺轴激素含量的测定 |
| 实验九"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠免疫相关脑差异表达基因的研究 |
| 讨论 |
| 一、祖国医学对肾与免疫关系的认识 |
| 二、肾阳虚证与免疫关系的现代研究 |
| 1. 中医"肾"与免疫调节的关系 |
| 2. 肾阳虚证与免疫的研究进展 |
| 3. "肾阳虚证"下丘脑-垂体-肾上腺皮质-胸腺(HPAT)轴的研究现状 |
| 三、常用肾阳虚动物模型复制方法 |
| 四、金匮肾气丸的作用功效及现代药理研究 |
| 五、肾阳虚证与Th1和Th2的研究进展 |
| 六、补肾中药对肾阳虚证细胞周期的影响的研究进展 |
| 七、下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(HPA)对免疫系统的影响 |
| 八、"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠模型免疫相关脑的差异基因表达 |
| 九、"劳倦过度、房事不节"所致肾阳虚小鼠模型分子免疫机制的探讨 |
| 十、本研究的创新点和下一步研究设想 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文着作 |
| 科研教学成果 |
| 详细摘要 |
（9）“劳倦过度、房室不节”致肾阳虚及补肾阳对小鼠甲状腺轴及睾丸基因表达谱的影响（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 实验研究 |
| 实验一 "劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型的复制 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 材料 |
| (二) 方法 |
| 二、结果 |
| (一) 小鼠一般状况 |
| (二) 小鼠体重的变化 |
| (三) 小鼠体温的变化 |
| 实验二 小鼠甲状腺组织学观察 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 材料 |
| (二) 方法 |
| 二、结果 |
| (一) 光镜下甲状腺组织的形态学观察 |
| (二) 电镜下甲状腺组织的超微结构观察 |
| 实验三 小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴激素含量的测定 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 材料 |
| (二) 方法 |
| 二、结果 |
| (一) TSH的变化 |
| (二) T_3的变化 |
| (三) T_4的变化 |
| 实验四 小鼠甲状腺组织Fas、FasL、Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 材料 |
| (二) 方法 |
| 二、结果 |
| (一) 甲状腺组织Fas、FasL蛋白的表达 |
| (二) 甲状腺组织Bcl-2、Bax蛋白的表达 |
| (三) 甲状腺组织Caspase-3蛋白的表达 |
| 实验五 小鼠睾丸组织基因表达谱的变化 |
| 一、材料与方法 |
| (一) 材料 |
| (二) 方法 |
| 二、结果 |
| (一) 小鼠睾丸组织的RNA提取分析 |
| (二) 基因芯片杂交图 |
| (三) 差异表达基因散点图 |
| (四) 差异表达基因分析 |
| 讨论 |
| 一、中医对"肾阳虚证"的认识 |
| (一) 中医对"肾"及"肾阳"的认识 |
| (二) 中医对肾阳虚证的认识 |
| 二、肾阳虚证下丘脑-垂体-甲状腺轴的现代研究 |
| (一) 肾阳虚证动物模型甲状腺轴实验研究现状 |
| (二) 临床肾阳虚证甲状腺轴的研究现状 |
| (三) 思考与质疑 |
| 三、肾阳虚证基因表达谱研究 |
| (一) 肾阳虚证动物模型的基因芯片研究 |
| (二) 临床肾阳虚证的基因芯片研究 |
| (三) 思考与质疑 |
| 四、"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型的选择 |
| (一) 甲状腺功能受抑制肾阳虚证动物模型 |
| (二) "劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型的选择 |
| 五、金匮肾气丸的组方及现代研究 |
| (一) 金匮肾气丸的功效及方义 |
| (二) 金匮肾气丸成方的现代研究 |
| 六、金匮肾气丸对肾阳虚小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴的神经内分泌影响 |
| 七、金匮肾气丸对肾阳虚小鼠甲状腺组织凋亡相关基因表达的影响 |
| 八、肾阳虚证下丘脑-垂体-性腺轴及"肾主生殖"的前期研究 |
| (一) "劳倦过度、房室不节"致肾阳虚及补肾治疗对小鼠生精功能的影响 |
| (二) "劳倦过度、房室不节"致肾阳虚及补肾治疗对小鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响 |
| (三) "劳倦过度、房室不节"致肾阳虚及补肾治疗对小鼠睾丸组织端粒酶活性的影响 |
| 九、金匮肾气丸对肾阳虚小鼠睾丸基因表达谱的影响 |
| (一) 模型组小鼠的基因改变 |
| (二) 治疗组小鼠的基因改变 |
| (三) 金匮肾气丸的治疗作用 |
| 十、本研究的创新点及下一步的设想 |
| (一) 本研究的创新点 |
| (二) 下一步的设想 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 科技查新报告 |
| 论文着作 |
| 详细摘要 |
（10）肾气丸与右归丸对肾阳虚大鼠生精功能及RAAS影响的比较研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 理论探讨 |
| 一、中医对肾的认识 |
| (一) 肾的解剖部位 |
| (二) 肾的生理功能 |
| (三) 与形体、官窍、脑等的关系 |
| 二、"肾精"、"肾气"、"肾阴"、"肾阳"辨析 |
| 三、肾阳虚中医病因学认识与肾阳虚模型建立 |
| (一) 肾阳虚证候 |
| (二) 房室不节、劳倦过度是导致肾阳虚的重要病因 |
| (三) 肾阳虚模型造模方法研究 |
| 四、补肾名方肾气丸与右归丸对比研究意义 |
| 五、肾气丸功效辨析及古代医家应用 |
| (一) 肾气丸功效辨析 |
| (二) 古代医家对肾气丸的应用 |
| 六、右归丸功效及配伍规律探讨 |
| (一) 景岳全书对右归丸相关记载 |
| (二) 右归丸方义及配伍规律的阐释 |
| 七、肾气丸与右归丸功效及主治比较 |
| 八、肾气丸与右归丸现代临床应用及实验研究 |
| (一) 肾气丸、右归丸临床应用进展 |
| (二) 肾气丸、右归丸实验研究进展 |
| (三) 比较 |
| 实验研究 |
| 一、"劳倦过度、房室不节加庆大霉素"肾阳虚大鼠模型的复制及精子质量检测 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 二、肾阳虚大鼠模型肾素-血管紧张素-醛固酮系统激素的测定 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 三、肾阳虚大鼠性腺轴激素含量测定 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 一、"劳倦过度、房室不节加庆大霉素"肾阳虚大鼠模型的复制 |
| 二、实验动物一般情况的观察 |
| 三、肾气丸、右归丸对精液质量、性腺轴激素的影响与"肾主生殖" |
| 四、肾气丸、右归丸对RAA轴激素的影响与"肾主水" |
| 五、结论 |
| 六、创新点 |
| 七、存在的不足与进一步研究设想 |
| (一) 存在的不足 |
| (二) 进一步研究的设想 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 发表论文 |
| 详细摘要 |
四、房室不节对雄性小鼠生殖机能影响的初步研究（论文参考文献）
- [1]金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究[D]. 张继伟. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠疗效的微生态学机理研究[D]. 惠华英. 湖南中医药大学, 2020
- [3]EPO与肾虚雄性生殖功能低下的相关性及右归饮的改善作用[D]. 李卓恒. 西南大学, 2020
- [4]肾阳虚体质动物模型的构建及其线粒体能量代谢研究[D]. 乔丽君. 成都中医药大学, 2019(04)
- [5]阴痫大鼠模型的建立与证候评价[D]. 邓楚欣. 广州中医药大学, 2016(02)
- [6]补肾法对肾虚大鼠空间学习记忆能力的影响[J]. 吉云鹏,徐志伟,敖海清,陈攀,胡海燕,吴皓萌,张晨. 广州中医药大学学报, 2015(03)
- [7]补肾治法对肾虚大鼠海马神经干细胞增殖机制的研究[D]. 吉云鹏. 广州中医药大学, 2015(10)
- [8]“劳倦过度、房事不节”肾阳虚模型下丘脑—垂体—肾上腺皮质—胸腺轴的改变及分子免疫机制的研究[D]. 颜亭祥. 山东中医药大学, 2010(12)
- [9]“劳倦过度、房室不节”致肾阳虚及补肾阳对小鼠甲状腺轴及睾丸基因表达谱的影响[D]. 宋洁. 山东中医药大学, 2010(12)
- [10]肾气丸与右归丸对肾阳虚大鼠生精功能及RAAS影响的比较研究[D]. 张诏. 山东中医药大学, 2010(07)