一、再生障碍性贫血患者细胞免疫功能及其对骨髓造血功能影响的探讨（论文文献综述）
吕建芳[1]（2021）在《肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究》文中进行了进一步梳理目的建立SD雄性大鼠肾精亏虚模型,以骨髓造血干细胞为切入点,观察其凋亡情况,研究肾精亏虚对骨髓造血功能的影响,探讨其作用机制。观察龟鹿二仙胶对肾精亏虚骨髓抑制性贫血大鼠的治疗效果,通过其对大鼠的血象、骨髓象以及骨髓造血干细胞凋亡的影响,分析其“从肾论治”治疗肾精亏虚引起的骨髓抑制性贫血的作用机制。方法1、理论研究:系统回顾古今文献,阐述肾精、髓、血的中医理论研究及现代医学研究,立足肾精、髓以及血之间的关系,为肾精亏虚导致贫血提供中医理论依据。剖析龟鹿二仙胶的组方以及总结补肾填精法的现代医学临床应用。2、动物实验:SD雄性大鼠30只,SPF级,8周龄,体重270±20g,随机分为空白组、模型组、补肾组,每组10只。采用模拟地震振动、光电刺激复合应激恐吓以及长期小剂量苯皮下注射和短期大剂量环磷酰胺腹腔注射,建立肾精亏虚大鼠模型。整个造模过程用时49天。前4周模型组和补肾组大鼠按体质量皮下隔天注射苯（lm L/kg）,第25d开始用环磷酰胺（25mg/kg）腹腔注射,连续注射3d,同时每天用仿地震平台模拟地震振动（2次/日,共15-20分钟）以及光电刺激箱足底电击刺激（每日不定时1-3次）。空白组正常喂养。在第4周最后一天随机抽取模型组和补肾组各1只大鼠查外周血象及血清睾酮,检测模型是否成功。第29天开始,补肾组用龟鹿二仙胶灌胃,根据大鼠与人体表面积折算剂量比值,灌胃剂量为11g/Kg,分两次灌胃。给药期间每隔一天称重,根据体重调整给药剂量,连续21天。模型组和空白组大鼠给予等量去离子水灌胃,连续21天。造模过程中,每天观察各组大鼠的皮毛、进食量、活动状态等一般情况。造模结束后,每组大鼠通过眼内眦静脉取血法测外周静脉血红细胞（RBC）和血红蛋白（HGB）,观察其贫血程度;采用ELISA检测血清睾酮T以及用精子分析仪检测附睾精子质量,评价其生殖功能;取睾丸组织包埋切片,HE染色,观察其形态学的改变;分离胫骨,取新鲜骨髓,用PBS制备单细胞悬液,采用血红细胞计数板计数单核细胞数;取新鲜骨髓,制成骨髓涂片,瑞氏-吉姆萨染色,观察骨髓细胞的形态学改变;股骨包埋、切片,HE染色,观察骨髓增生情况;取新鲜骨髓包埋超薄切片,观察其超微病理改变。采用ELISA法检测各组EPO的含量;用流式细胞仪以及TUNEL法检测各组大鼠骨髓组织CD34+细胞凋亡情况;采用WB法检测各组大鼠骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白含量;采用RT-PCR法检测各组大鼠骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Faslm RNA的表达水平。3、统计学处理:各组组间进行比较,所得数据均以均数±标准差（sx?）表示,采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析,单因素方差分析组间比较,采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。结果（1）与正常组相比,模型组大鼠出现毛发干枯、耸立不齐、进食量下降,活动度减少等现象。补肾组大鼠毛发恢复光泽、进食量增加、活动度增加,肾虚症状得到改善。（2）与空白组比较,模型组血红细胞（RBC）数量、血红蛋白（HGB）含量从14d开始下降,有显着性差异（p<0.01）;与模型组比较,补肾组血红细胞（RBC）数量、血红蛋白（HGB）含量从42d开始升高,有显着性差异（p<0.05）。（3）与空白组比较,模型组血清EPO含量下降,有显着性差异（P<0.01）;与模型组比较,补肾组血清EPO含量升高,有显着性差异（P<0.01）。（4）睾丸病理切片显示,空白组睾丸曲细精管被膜完整,支持细胞形态正常,曲细精管管腔内可见大量精子;模型组曲细精管生精上皮明显变薄,细胞层次杂乱,支持细胞形态断裂,曲细精管管腔内精子细胞、精子数量明显减少;补肾组曲细精管被膜完整,细胞排布紧密,生精细胞数略有减少,部分区域可见脱落的少量生精细胞,但结构清楚,层次较分明,管腔内有较多精子。（5）与空白组比较,模型组附睾精子浓度及精子活力均下降（P<0.05）;模型组血清T含量明显下降（P<0.01）;与模型组比较,补肾组附睾精子浓度及精子活力均明显升高（P<0.01）,补肾组血清T含量升高,有显着性差异（P<0.01）。（6）骨髓象显示,与空白组比较,模型组骨髓有核细胞数量减少（P<0.05）;与模型组比较补肾组骨髓有核细胞数量增加,有显着性差异（P<0.05）。骨髓涂片可见空白组骨髓造血结构完整,组织丰富;模型组骨髓增生降低,巨核细胞减少;补肾组造血网织红细胞虽增加,但仍没有恢复正常水平。骨髓病理切片显示:空白组造血细胞多且分布均匀,骨髓造血组织支架结构紧密,脂肪细胞数量少;模型组造血组织面积减少,巨核细胞少见,造血细胞数目减少,内皮细胞、脂肪细胞等非造血细胞数目增多;补肾组造血结构组织基本修复,巨核细胞增多,造血细胞增加,仍可见脂肪细胞等非造血细胞。（7）骨髓超微病理形态学检测示:空白组大鼠可见造血干细胞为圆形,单核,核大,细胞质少,可见线粒体,线粒体内膜折叠成较深的嵴。模型组大鼠造血干细胞可见线粒体数量减少,嵴变浅或消失,线粒体肿胀,可见凋亡小体。补肾组大鼠造血干细胞有核细胞增多,凋亡小体少见,线粒体的数量增多,线粒体嵴有所恢复。（8）与空白组比较,骨髓石蜡包埋切片TUNEL法检测发现模型组可见较多凋亡CD34+细胞的绿色荧光点,流式细胞仪检测骨髓CD34+细胞凋亡的数量明显增加（P<0.05）;与模型组比较,补肾组石蜡包埋切片TUNE L法检测骨髓组织绿色荧光点数量减少,流式细胞仪检测CD34+细胞凋亡的数量降低（P<0.05）。（9）WB检测大鼠胫骨骨髓新鲜组织中Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白表达结果与空白组比较,模型组Bcl-2蛋白含量表达降低（P<0.05）,Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白含量表达均升高（P<0.05）。与模型组比较,补肾组Bcl-2蛋白含量表达升高（P<0.05）,Bax、caspase-3、Fa s和Fasl蛋白含量表达均减少（P<0.05）。（10）RT-PCR检测大鼠胫骨骨髓新鲜组织Bcl-2、Bax、caspase-3、Fa s和Faslm RNA含量与空白组比较,模型组Bcl-2m RNA含量降低（P<0.05）,Baxm RNA、caspase-3m RNA、Fasm RNA和Faslm RNA含量均升高（P<0.05）。与模型组比较,补肾组Bcl-2m RNA蛋白含量升高（P<0.05）,Baxm RNA、caspa se-3m RNA、Fasm RNA和Faslm RNA含量均减少（P<0.05）。结论“肾藏精,生髓,化血”,肾藏先天之精,肾气促脾胃化生水谷精微而藏之,而“精血同源”,肾精是化生血液的重要物质基础。肾精亏虚则血液化生无源而导致血虚。肾主人体发育,也主骨髓生长发育,肾精充足,则骨髓充盈,反之肾精不足,骨髓空虚。骨髓具有化生血液的作用,髓化生血液主要取决于肾的功能,肾精亏虚则会导致骨髓功能低下,化生血液出现障碍而致血虚。本课题基于中医“肾藏精、精生髓,髓生血,精化血”理论,以肾精亏虚则会导致血虚为实验的病理依据,以造血干细胞作为切入点。研究肾精亏虚对造血功能的影响及其作用机制。以“恐伤肾”传统病因造模结合药物干预病理造模,采用模拟地震平台复合光电刺激法结合长期小剂量的苯和短期大剂量的环磷酰胺药物干预,建立肾精亏虚大鼠模型。大鼠出现肾虚症状,血液检查可以看到血红细胞数量和血红蛋白含量降低,血清EPO含量下降,血清睾酮含量降低。骨髓象可以见到骨髓有核细胞数量减少,骨髓造血组织结构疏松、造血面积减少、造血细胞减少。超微病理形态学可以观察到骨髓造血干细胞线粒体肿胀,线粒体嵴变浅,出现凋亡小体的超微病理改变。龟鹿二仙胶灌胃治疗后,能够改善肾精亏虚的症状,促进血红细胞数量和血红蛋白含量增高,血清EPO含量升高,血清睾酮含量增加,骨髓有核细胞数量增加,骨髓造血组织得到修复。骨髓造血干细胞线粒体数量增加,凋亡小体减少,减少骨髓CD34+细胞的凋亡。本实验结论归纳如下:（1）利用“仿地震平台及光电刺激+苯+环磷酰胺”成功建立肾精亏虚雄性大鼠模型。（2）肾精亏虚大鼠血清EPO含量下降,骨髓组织抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白、Bcl-2m RNA含量下降,促凋亡蛋白Bax蛋白及Baxm RNA表达增加,激活了线粒体/细胞色素c通路,发生级联效应,激活Caspase-3蛋白,诱导骨髓CD34+细胞的凋亡。骨髓Fas和Fasl蛋白及Fas和Faslm RNA含量升高,激活了死亡受体途径,激活Caspase-3蛋白,诱导CD34+细胞细胞的凋亡。CD34+细胞过度凋亡,骨髓造血干细胞活性降低,可能是肾精亏虚导致骨髓抑制影响骨髓造血功能的机制之一。（3）首次采用龟鹿二仙胶治疗肾精亏虚,改善骨髓造血功能。龟鹿二仙胶能有效缓解肾精亏虚大鼠的症状,治疗骨髓抑制性贫血有效。提高血清EPO含量,促进抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达,抑制促凋亡蛋白Bax蛋白、Fas和Fasl蛋白的表达,减少Caspase-3蛋白的表达,抑制CD34+细胞的凋亡,从而保护造血干细胞。刺激骨髓造血干细胞的增殖,避免其发生过度凋亡,可能是龟鹿二仙胶发挥其疗效机制之一。（4）从生成来源和生物学功能来看,EPO可能是肾精的物质基础之一。（5）造血干细胞是肾精在细胞层次的表现形式,是“肾精化血”功能的执行者。
杨雪莹[2]（2021）在《脐带间充质干细胞联合常规疗法治疗再生障碍性贫血的病例回顾性研究》文中研究指明目的:回顾应用常规治疗和常规治疗联合脐带间充质干细胞治疗再生障碍性贫血的两组病例,观察患者血常规指标统计两组疗效差异、起效时间（脱离输血血红蛋白较治疗前上升15g/L或输血后血红蛋白较前提升15g/L随访一个月仍无下降）、到最高疗效的时间并分析其差异,并随访其远期疗效;明确脐带间充质干细治疗再生障碍性贫血的疗效,为临床治疗再生障碍性贫血提供新的选择。方法:收集从2015年8月至2019年12月于河北医科大学第一医院住院接受常规治疗（环孢素+雄激素）联合脐带间充质干细胞输注治疗的11例再生障碍性贫血患者作为治疗组;同时收集接受常规治疗的11例再生障碍性贫血患者作为对照组。观察患者血常规变化及脐血间充质干细胞输注的不良反应作用。以脱离输血血红蛋白较治疗前上升15g/L或输血后血红蛋白较前提升15g/L且随访一个月仍无下降为起效;统计两组患者起效时间、达最高疗效的时间,并统计其差异;达最高疗效后继续随访至2021年2月观察其远期疗效。结果:1.脐带间充质干细胞治疗组患者起效时间较对照组短（6.28vs11.36）,且差异具有统计学意义（P=0.034）。2.脐带间充质干细胞治疗组达最高疗效时间较对照组短（17vs22.75）,无统计学差异（P=0.345）。3.脐带血间充质干细胞治疗组治愈3例、明显进步4例,无效4例（有效率64%）,对照组治愈1人、明显进步3人,无效7人（有效率36%）,脐带间充质干细胞组有效率明显高于对照组,但无统计学差异（P=0.371）。4.脐带间充质干细胞治疗组11人中,1例因疾病进展并发严重感染早期死亡。其余10例患者中1例应用脐间充质干细胞输注过程中出现发热、无寒颤,给予对症退热处理后体温降至正常。10例患者生命体征均平稳,未见皮疹、发热、寒颤等皮肤过敏反应,未见肝肾功能及心功能损伤等毒副作用。对照组11例患者,1例因疾病进展早期死亡,其余10例患者生命体征均平稳,2例患者出现肝酶、肌酐升高,未见心脏毒性。5.随访结果:治疗组中位随访时间为39个月。治疗组患者达明显进步的3例患者中有1例出现疾病进展,另2名患者维持明显进步疗效,其中1例疾病稳定后行造血干细胞移植后达治愈;无效中4例患者中1例死亡,其余3例疾病未进展;基本治愈4例患者均维持该疗效,其中1例患者达基本治愈后停止药物治疗半年后仍维持基本治愈疗效。对照组中位随访时间为19个月。对照组患者达明显进步3例、缓解1例患者均维持原有治疗疗效;无效7例患者中1例患者出现死亡,3例出现疾病进展,其余3例疾病未进展。结论:脐带间充质干细胞在一定程度上可促进再生障碍性贫血患者造血恢复,临床输注安全。有希望成为除免疫抑制治疗、造血干细胞移植等常规外的有效治疗选择。
熊家青,徐基平,李逵,吴泳蓉,黄晓蒂,田莎,吴若霞,田雪飞[3]（2020）在《中医药辨证调控骨髓造血微环境的机制研究》文中研究表明由于多种原因所导致的骨髓造血功能低下是临床上常见的问题,目前西医尚缺乏有效的治疗方法,而中医药在提升骨髓造血功能方面展现出了独特优势。本文通过检索本领域相关文献,并进行总结归纳,发现中医药多从肾、脾、气、血、毒等方面来辨证论治骨髓造血功能低下,具体作用机制可能与其调控骨髓造血微环境中的细胞因子或细胞结构有关。
孙悦[4]（2020）在《补肾益髓方联合ATG/ALG治疗重型再障疗效分析及从T淋巴细胞阴性选择研究再障发病机制》文中研究说明目的:回顾性分析补肾益髓方联合ATG/ALG治疗重型再生障碍性贫血的疗效,发现并探讨临床相关实际问题,总结经验。另试从T淋巴细胞阴性选择来探究再生障碍性贫血的发病机制。方法:收集18例在山东中医药大学附属医院血液科使用补肾益髓方联合ATG/ALG的重型再障患者的临床资料,回顾性分析疗效、疗效相关因素、不良反应、生活质量与生存情况。另收集12例初治再障患者以及12例正常人外周血标本,通过RT-PCR方法检测外周血单个核细胞Nur77 m RNA表达。结果:1.总体疗效:所有18例患者均能评价疗效,总有效率为66.6%（12/18）,其中基本治愈2例（11.1%）,缓解1例（5.5%）,明显进步9例（50%）,无效6例（33.3%）,2.疗效相关因素:年龄20-35岁、治疗前中性粒细胞≥0.2xl O9/L、使用兔源ATG、对G-CSF治疗反应好、骨髓造血成分≥15%、重再Ⅰ型、中医辨证为肾阳虚的患者有效率更高,但由于样本量少,只有G-CSF治疗反应相关数据有统计学意义。3.T细胞亚群:CD4+、CD4/CD8+与治疗前中性粒细胞数呈正相关,表明T细胞亚群与疾病严重程度有关,但未发现其与疗效的确切关系。4.不良反应:血清病发生率为22.2%（4/18）,感染发生率为38.8%（8/18）,血糖升高发生率为5.6%（1/18）,转氨酶升高发生率为16.7%（3/18）。5.生存转归:所有患者均未出现随访时间内死亡,12例有效患者多于治疗后6-12个月脱离输血。4.实验研究:12例初治再障患者Nur77 m RNA表达略高于正常对照组,但差异无统计学意义,推测Nur77或许与再障的发病无关。结论:临床研究方面,补肾益髓方能联合ATG/ALG的中西医结合治疗,能改善整体疗效,提高患者生存质量及生存率,并一定程度减轻不良反应。实验研究方面,与T淋巴细胞阴性选择相关的基因Nur77初治再障患者外周血单个核细胞中的表达略高于正常对照组,但无统计学差异,推测Nur77可能未参与再障患者疾病的发生
陈成顺[5]（2020）在《慢性再生障碍性贫血中医证候分型与T细胞免疫应答失调的相关性》文中进行了进一步梳理目的T细胞免疫应答失调是再生障碍性贫血的关键病理机制,抑制T细胞异常激活是重要治疗措施。有研究显示中医脏腑病变会影响机体的免疫调节,脾虚与肾虚是再生障碍性贫血常见证候要素,两者对于免疫功能的影响是否有异目前尚无相关研究。通过中医药健脾补肾治疗再障常有一定疗效,提示健脾补肾法可能有助于调控免疫功能。本课题以脾虚血亏和肾虚血亏证的慢性再生障碍性贫血患者为研究对象,探讨中医证候分型与T细胞免疫应答失调的相关性,明确脾虚及肾虚对T细胞亚群失调程度的不同影响,以健脾补肾中药为干预措施,初步探索依据脾虚血亏及肾虚血亏为主要分型应用中医药调控T细胞免疫应答治疗再生障碍性贫血的作用机制。方法1.回顾性研究慢性再生障碍性贫血脾虚血亏证与肾虚血亏证患者T细胞免疫应答的差异,明确T细胞免疫应答失调与中医证型分布的相关性。收集经临床表现、实验室检查诊断为慢性再生障碍性贫血（Chronic aplastic anemia,CAA,简称慢性再障）的住院患者,纳入标准:①确诊为慢性再障;②2011年1月至2018年5月在北京中医药大学东直门医院血液肿瘤科住院治疗;③中医证候分型为脾虚血亏证或肾虚血亏证;④应用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群;⑤住院期间合并发热、感染性疾病、肿瘤性疾病者除外。参照《中医虚证诊断标准》与《中药新药临床研究指导原则》结合行业专家组意见拟定脾虚血亏证及肾虚血亏证诊断标准,在住院病历中提取中医四诊信息进行证候再分型。与健康成年人对照,明确再障患者T淋巴亚群（CD4+、CD8+、Treg及CD4+/CD8+比值）失调情况;分析脾虚血亏证与肾虚血亏证患者细胞毒性T细胞异常激活程度的差异,通过单因素相关分析,探讨年龄、性别、病程、全血细胞分析、T淋巴细胞亚群与中医证候分型的相关性,进一步采用二元Logistic回归法分析独立影响因素。收集可评价临床疗效的病例,分析证候分型与T细胞免疫应答、临床疗效的相关性。2.进一步探索不同证型应用中医药调控T细胞免疫应答治疗再障的作用机制。拟于2018年8月至2019年11月纳入肾虚血亏证或脾虚血亏证的慢性再障20例,以健脾补肾中药为干预措施,酌情联合西医基础治疗,1疗程为3个月,连续应用2个疗程,共6个月。入组时、治疗3个月、治疗6个月时进行中医证候评分。入组时及治疗后每月检测1次全血细胞分析;入组时及治疗6个月流式细胞仪检测外周血T细胞CD4+、CD8+、CD4+/CD8+,T 淋巴细胞激活状态:HLA-DR+T、CD4+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+、CD4+HLA-DR+/CD4+、CD8+HLA-DR+/CD8+、活化 T 细胞,ELISA 法检测血浆 TNF-α、TGF-β 及 IL-10细胞因子在治疗前后的表达。监测安全性指标。主要疗效指标为再障临床疗效;次要疗效指标包括中医证候总积分改善率、单项中医症状改善率、全血细胞分析。与历史文献进行对照,分析应用健脾补肾法为主与单用西医免疫抑制治疗的疗效差异;通过疗效分层,探究中医证候分型与调控T细胞免疫应答、临床疗效的相关性。根据安全性指标进行安全性评价。研究方案通过北京中医药大学东直门医院伦理委员会批准（DZMEC-KY-2019-133）。初步探索依据脾虚血亏证及肾虚血亏证主要分型应用健脾补肾中药调控T细胞免疫应答治疗慢性再生障碍性贫血的作用机制。结果1.慢性再障中医证候分型与T细胞亚群变化相关,脾虚血亏组免疫应答失调更为突出,CD8+T细胞及Treg细胞比例均高于肾虚血亏组,CD4+/CD8+比值较肾虚血亏组进一步减低。①共纳入慢性再障患者57例,其中脾虚血亏证31例、肾虚血亏证26例。男性患者29例,女性患者28例,平均年龄（54.38±17.58）岁。②与健康对照组比较,慢性再障组CD8+细胞比例显着升高（P<0.05）,CD3+、CD4+、Treg细胞比例及CD4+/CD8+比值无明显差异（P>0.05）。③中医证候分型因素相关性分析显示:CD8+、Treg细胞及CD4+/CD8+比值与中医证型相关（P=0.010,P=0.046,P=0.025）,脾虚血亏组CD8+、Treg细胞明显高于肾虚血亏组,CD4+/CD8+比值明显低于肾虚血亏组。二元Logistic回归法分析显示,CD8+细胞比例（OR=0.920,95%CI:0.860～0.985,P=0.017）与中医证候分型相关,脾虚血亏组CD8+淋巴细胞较肾虚血亏组升高。④对治疗6月后检测T细胞亚群的32例患者,进行疗效评价,其中缓解6例、明显进步7例,无效19例。与治疗前相比,缓解组CD8+细胞比例显着降低（P<0.05）,无效组显着增高（P<0.05）,明显进步组无明显变化（P>0.05）;治疗后CD4+/CD8+比值无效组进一步降低（P<0.01）。2.以脾虚血亏及肾虚血亏为主要分型,应用健脾补肾中药有助于调控T细胞免疫应答治疗慢性再障,治疗有效患者中,脾虚血亏者治疗后活化T细胞、CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+、CD4+HLA-DR+细胞比例、CD8+HLA-DR+/CD8+、CD4+HLA-DR+/CD4+比值较治疗前降低,肾虚血亏者各项T淋巴亚群及激活状态无明显变化。①共纳入慢性再障患者18例,全数据集（FAS）16例,符合方案集（PPS）14例。脾虚血亏组7例,肾虚血亏组9例,两组基线一致。②按照临床疗效判定标准,FAS、PPS总有效率分别为62.5%、71.4%,与国外文献报道有效率（35%-64%）基本一致。脾虚血亏组、肾虚血亏组总有效率分别为71.4%、55.6%,两组间比较无统计学意义（P>0.05）。③按照中医证候疗效评价标准,FAS、PPS证候改善率分别为87.5%、92.9%。脾虚血亏组、肾虚血亏组证候改善率分别为85.7%、88.9%,两组比较无明显差异（P>0.05）。④全血细胞分析:FAS治疗后白细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白浓度治疗后明显提升（P<0.05,P<0.01）;脾虚血亏组和肾虚血亏组治疗前及治疗后各访视点,白细胞计数、中性粒细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数比较均无明显差异（P>0.05）。组内比较,脾虚血亏组在治疗后中性粒细胞明显提升（P<0.05）,肾虚血亏组治疗后血红蛋白明显提升（P<0.05）。⑤中医证候总积分:与治疗前相比,FAS治疗3月时、6月时中医证候总积分明显降低（P<0.01）。脾虚血亏组和肾虚血亏组治疗前、治疗3月时、治疗6月时比较无显着差异（P>0.05）。脾虚血亏组与肾虚血亏组治疗3月时、6月时中医证候总积分均较治疗前明显降低（P<0.01）。⑥单项中医症状改善率:治疗6月后单项症状均较治疗前改善,各症状改善率为食欲不振（86.7%）、失眠（83.3%）、大便干结（80.0%）、腰膝酸软（78.6%）、形寒肢冷（77.8%）、盗汗（77.8%）、神疲乏力（73.3%）、头晕（69.2%）、心悸（66.7%）、手足心热（62.5%）、大便稀溏（50.0%）、出血（50.0%）、面色萎黄（46.7%）。⑦T淋巴细胞亚群及激活状态:与治疗前相比,FAS治疗后T淋巴细胞亚群比例及激活状态无明显差异,脾虚血亏组、肾虚血亏组治疗后无明显差异（P>0.05）。按照再障疗效分层统计,有效患者10例,包括脾虚血亏者5例,肾虚血亏者5例。与治疗前比较,有效患者治疗后 CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+比例及 CD8+HLA-DR+/CD8+比值明显降低（P<0.05）,脾虚血亏者治疗后活化T细胞、CD3+HLA-DR+、CD4+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+比例及CD8+HLA-DR+/CD8+、CD4+HLA-DR+/CD4+比值显着降低（P<0.05）,肾虚血亏者治疗后T淋巴细胞亚群及激活状态无明显变化（P>0.05）。⑧细胞因子TNF-α、TGF-β、IL-10:FAS、脾虚血亏组与肾虚血亏组治疗后较治疗前均无明显差异,组间比较亦无明显差异（P>0.05）。⑨所有病例未发生严重不良反应。结论慢性再生障碍性贫血中医证候分型与部分T细胞免疫应答具有一定相关性,脾虚与肾虚免疫应答失调的程度不同,健脾补肾法可能通过调控T细胞免疫反应治疗慢性再生障碍性贫血。
刘运华[6]（2020）在《滋肾益髓生血方对AA小鼠骨髓保护作用及T-bet/GATA-3影响的实验研究》文中研究说明再生障碍性贫血（AplasticAnemia,AA）是由遗传、物理、化学、生物以及各种不明原因引起的骨髓衰竭性疾病,AA患者红细胞、白细胞与血小板减少,可出现严重的贫血、出血和感染。AA的发生与免疫功能异常有密切关系,T淋巴细胞依据膜表面分子抗原的不同,分为主要介导细胞毒性免疫的CD8+T和调节免疫的CD4+T细胞两个亚群,CD4/CD8比例失衡与AA骨髓造血组织的免疫破坏密切相关。原始的CD4+T细胞又称为Th0细胞,Th1与Th2分别是由Th0通过STAT1和STAT6途径分化而来的,树突状细胞细胞分泌的IL-12等可以促进Th1细胞活化,并分泌介导第Ⅳ型免疫反应的Ⅰ型细胞因子,主要包括IFN-γ、IL-2、TNF-α等;激活的Th2细胞主要分泌Ⅱ型细胞因子,主要包括IL-10、IL-5、IL-4、和IL-13等,获得性AA的免疫发病机制与Th1细胞的极化和Th1/Th2失衡有关。GATA-3是可调控CD4+T细胞向Th2细胞分化的转录因子,它能特异性启动Th2细胞因子的表达;特异转录因子T-bet能够启动Th0细胞向Th1细胞极化过程,还能通过IFN-γ等诱导T细胞以及NK细胞启动T-bet转录因子的表达,阻断Th2细胞的极化。目前,临床主要采用免疫抑制剂环磷酰胺等来治疗,但存在副作用大等不利影响,而临床运用中医药往往能取得很好的疗效。滋肾益髓生血方是依据中医“肾藏精,精充髓,髓生血”理论组方的中药复方,我们前期动物实验发现滋肾益髓生血法对苯与环磷酰胺诱导的AA大鼠的骨髓衰竭的改善情况较温肾益髓法和补肾益髓生血法更好。因此,本研究采用60Co-γ辐射联合免疫细胞注射构建AA小鼠模型,通过瑞士-吉姆萨染色、流式细胞术检测、HE染色、酶联免疫检测、免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR方法,研究滋肾益髓生血方对AA小鼠转录因子T-bet与GATA-3的影响,为中医“肾藏精,精生髓”的理论提供实验依据。目的:采用60Co-γ辐射联合免疫细胞注射构建AA小鼠模型,以康力龙作为对照药物,探讨滋肾益髓生血方对AA小鼠的药效学作用,流式细胞术检测AA小鼠T淋巴细胞CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8的变化,瑞士-吉姆萨染色观察AA小鼠骨髓细胞形态变化,酶联免疫法研究AA小鼠血清中IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-5、IL-13、IL-4、IL-10等7种细胞因子的变化;免疫组织化学研究AA小鼠脾脏组织T-bet和GATA-3蛋白表达情况;Western Blot和RT-PCR检测AA小鼠骨髓T-bet与GATA-3蛋白及mRNA的表达。方法:1.药效学实验:55只清洁级雄性近交系BALB/c小鼠,随机分成正常组10只,剩余45只用60Co-γ照射5.5 Gy造模,辐射结束后,迅速经尾静脉完成DBA/2小鼠的活体免疫细胞混悬液注射,注射量为每只1×106个免疫细胞,诱导小鼠AA模型;存活的小鼠分为模型组、康力龙组与滋肾益髓生血组,每天给药并观察各组小鼠一般状态,每周称量记录体质量变化;在灌胃给药4周结束时,摘眼球取抗凝血,检测各组小鼠外周血中HGB、RBC、WBC、PLT变化,取小鼠股骨制备骨髓悬液,用血球计数板在倒置显微镜下观察计数小鼠骨髓有核细胞数;制备血涂片,用瑞士-吉姆萨染色法观察AA小鼠血细胞变化;制作骨髓涂片,用瑞士-吉姆萨染色观察AA小鼠骨髓细胞形态变化;制作AA小鼠脾脏组织切片,采用HE染色法观察其病理形态变化。2.流式细胞术:检测AA小鼠外周免疫细胞CD3、CD4、CD8以及CD4/CD8的变化。3.酶联免疫:检测 AA 小鼠血清中 IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-5、IL-13、IL-4、IL-10 细胞因子的变化。4.免疫组织化学:检测AA小鼠脾脏组织中T-bet、GATA-3蛋白的表达量变化。5.Western Blot:检测AA小鼠骨髓组织中T-bet、GATA-3蛋白的表达量变化。6.RT-PCR:检测AA小鼠骨髓组织中T-betmRNA、GATA-3mRNA的表达量变化。结果:1.滋肾益髓生血方对60Co-γ联合免疫诱导AA小鼠药效学影响1.1 一般状态:滋肾益髓生血方等治疗组均能明显改善AA小鼠的一般状态,提高活动度和饮食量,维持AA小鼠的体质量。1.2体质量:与正常组小鼠相比,模型组AA小鼠体质量较低（P<0.01）;而滋肾益髓生血方组小鼠体质量数值均明显高于模型组（P<0.01）。1.3外周血:与正常组小鼠相比,模型组AA小鼠WBC、HGB的数值显着降低（P<0.01）;RBC数量呈降低（P<0.05）,PLT变化无统计学意义（P>0.05）;与模型组比较,滋肾益髓生血方组的HGB数值均显着升高（P<0.01）,康力龙组的WBC和RBC均显着增加（P<0.01,P<0.05）。1.4血涂片:与正常组小鼠相比,模型组AA小鼠血细胞数量偏少,异常形态的红细胞较多,滋肾益髓生血方组有一定的改善。1.5骨髓涂片:模型组AA小鼠骨髄出现较多大脂肪滴与纤维等非造血组织,骨髓各系幼稚细胞数量降低;滋肾益髓生血方组的AA小鼠骨髓中的非造血细胞明显减少,骨髓衰退情况明显好转。1.6 骨髓有核细胞数:与正常组相比,模型组AA小鼠骨髓有核细胞数明显降低,康力龙与滋肾益髓生血方组的小鼠骨髓有核细胞数有升高（P<0.01,P<0.05）。1.7 脾脏HE染色:模型组AA小鼠脾组织淋巴小结形态不规则,红髓和白髓边界分辨不清,白髓边界呈现不规则形,脾血窦和脾索较难辨别清楚;各治疗组小鼠脾脏淋巴结趋于正常形态,红髓白髓边界趋于清晰,血窦和脾索较明显,红白髓明显比模型组更加规则。2.滋肾益髓生血方对60Co-γ联合免疫诱导AA小鼠免疫功能的影响2.1 血清因子:模型组AA小鼠IFN-γ,TNF-α、IL-2、IL-5、IL-13水平均显着升高,IL-4、IL-10均显着降低（P<0.01）。与模型组相比,除康力龙组的IL-5外,康力龙组、滋肾益髓生血组的IFN-y、TNF-α、IL-2、IL-5、IL-13水平均降低（P<0.01,P<0.05）;而IL-4、IL-10水平均有所升高（P<0.01,P<0.05）。2.2 流式细胞术:模型组AA小鼠CD8、CD3、CD4三种免疫细胞的数量均处于低水平（P<0.01）,CD4/CD8比值降低（P<0.01）;与模型组AA小鼠比较,各治疗组的CD4、CD8均有所升高（P<0.01,P<0.05）,滋肾益髓生血组CD3明显升高（P<0.05）。3.滋肾益髓生血方对60Co-γ联合免疫诱导AA小鼠脾脏组织中T-bet、GATA-3蛋白的影响免疫组化结果显示:与正常组小鼠GATA-3蛋白表达量比较,模型组AA小鼠脾组织中GATA-3蛋白表达降低（P<0.01）,与模型组比较,各治疗组小鼠脾组织的GATA-3蛋白表达增多（P<0.01）;康力龙组与滋肾益髓生血组GATA-3蛋白表达无差异（P>0.05）。与正常组小鼠相比,模型组AA小鼠脾组织细胞胞浆中T-bet蛋白表达呈强阳性（P<0.01）,与模型组比较,各治疗组的T-bet蛋白表达明显减少（P<0.01）;康力龙组与滋肾益髓生血组T-bet蛋白表达无差异（P>0.05）。4.滋肾益髓生血方对60Co-γ联合免疫诱导AA小鼠骨髓T-bet、GATA-3蛋白与mRNA的影响4.1 Western Blot检测结果示:模型组AA小鼠骨髓组织中的GATA-3蛋白表达量低于正常组（P<0.01）,滋肾益髓生血组与康力龙组小鼠骨髓GATA-3表达量变化无统计学意义（P>0.05）。模型组AA小鼠骨髓的T-bet表达量高于正常组（P<0.05）,康力龙组和滋肾益髓生血组AA小鼠骨髓中的T-bet表达量低于模型组（P<0.01,P<0.05）。4.2 RT-PCR检测结果示:模型组与各治疗组AA小鼠骨髓的T-bet mRNA表达量高于正常组（P<0.01）,各治疗组AA小鼠骨髓中的T-betmRNA表达量均低于模型组（P<0.01）,与康力龙组相比,滋肾益髓生血组AA小鼠骨髓T-betmRNA表达量均下降（P<0.01）;模型组AA小鼠骨髓的GATA-3 mRNA表达量明显低于正常组（P<0.01）,与模型组相比,康力龙组与滋肾益髓生血组GATA-3 mRNA表达量上升（P<0.01）。结论:1.滋肾益髓生血方能够缓解AA小鼠的一般状态,提高小鼠的体质量,能够升高AA小鼠外周血中RBC、WBC、HGB的数量,增加骨髓有核细胞数,可以减轻AA小鼠脾脏病理损害,降低免疫损伤,保护骨髓造血功能。2.滋肾益髓生血方可以升高AA小鼠外周血中CD3、CD4细胞数量,升高CD4/CD8比例,降低AA小鼠外周血清中IFN-y、IL-2、TNF-α、IL-5、IL-13等细胞因子,升高IL-4、IL-10等细胞因子,从而降低免疫异常活化造成的免疫损伤,维持AA小鼠免疫平衡稳态。3.滋肾益髓生血方可以有效的抑制AA小鼠脾脏和骨髓组织中的T-bet蛋白与mRNA的表达,增加GATA-3蛋白与mRNA的表达;滋肾益髓生血方可能通过调节T-bet/GATA-3相关信号通路,调节机体免疫平衡,延缓AA小鼠骨髓衰竭的进程。
华罗刚[7]（2020）在《重型再生障碍性贫血中TRAIL对CD8+细胞功能的影响及相关机制研究》文中提出目的通过重组可溶性小鼠肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）干预治疗免疫介导的SAA模型小鼠,观察其对SAA小鼠模型疗效;探索并建立CD8+T细胞体外刺激培养体系,分析探讨重型再生障碍性贫血（Severe aplastic anemia,SAA）中TRAIL对CD8+T细胞功能的影响及相关机制,为SAA免疫发病机理的进一步完善及开辟新的靶点治疗SAA提供基础理论。方法第一部分:建立免疫介导的SAA小鼠模型,用重组可溶性小鼠TRAIL腹腔注射干预治疗,分正常小鼠组,SAA模型组,TRAIL治疗SAA模型组,于造模第17天收获小鼠,比较观察各组小鼠右侧股骨骨髓增生程度、外周血象及骨髓细胞计数;并采用ELISA法检测各组小鼠血浆IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ的表达水平。第二部分:建立免疫介导的SAA小鼠模型,取SAA小鼠的骨髓细胞,免疫磁珠分选出纯化小鼠骨髓CD8+细胞,应用抗小鼠CD3/抗小鼠CD28单抗及重组小鼠IL-2因子联合刺激体外培养CD8+细胞。分medium组,CD3/CD28刺激组,CD3/CD28+重组小鼠TRAIL干预组。采用流式细胞术（FCM）法检测SAA模型小鼠骨髓中CD8+T细胞表面功能分子CD25表达水平及CD8+T细胞的凋亡情况。第三部分:取SAA患者的骨髓细胞,免疫磁珠分选出纯化SAA患者骨髓CD8+T细胞,应用抗人CD3/抗人CD28单抗及重组人IL-2联合刺激体外培养CD8+T细胞。分medium组,CD3/CD28刺激组,CD3/CD28+重组人TRAIL干预组体外培养,FCM法检测各组培养CD8+T细胞的CD69,HLA-DR,CD25等功能活化分子表达水平,穿孔素、颗粒酶表达水平,磷酸化ZAP70分子表达水平,凋亡水平。ELISA法测定各组培养上清中IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ浓度。结果第一部分:1,正常对照小鼠骨髓有核细胞增生程度90%,SAA模型小鼠骨髓有核细胞增生程度20%,TRAIL治疗组小鼠骨髓有核细胞增生程度（40%）。2,正常对照小鼠组外周血WBC,PLT,RBC分别为（4.49±0.60）×109/L、（585.4±23.8）×109/L、（9.76±0.21）×1012/L。SAA模型小鼠组分别为（0.24±0.06）×109/L、（49.4±14.34）×109/L、（4.74±0.67）×1012/L。TRAIL治疗小鼠组分别为（0.6±0.05）×109/L、（163.1±43.9）×109/L、（6.07±0.53）×1012/L。TRAIL治疗组外周血WBC,PLT,RBC数明显高于SAA模型小鼠组（P值均<0.001）。3,正常对照小鼠组、SAA模型小鼠组、TRAIL治疗组骨髓细胞计数分别为（6.185±0.3188）×107/L、（2.03±0.1317）×107/L、（2.994±0.1151）×107/L。TRAIL治疗组骨髓细胞计数明显高于SAA模型小鼠组（P<0.0001）。4,SAA模型小鼠组外周血浆IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-12浓度分别为（41.79±0.7982）pg/ml、（141.8±7.429）pg/ml,（25.5±0.5597）pg/ml,（90.04±2.452）pg/ml。TRAIL治疗组浓度分别为（29.52±0.7205）pg/ml、（85.93±2.781）pg/ml,（18.52±0.807）pg/ml,（77.92±1.89）pg/ml,TRAIL治疗组IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-12浓度明显低于SAA模型组（P均<0.01）。第二部分:1,SAA模型鼠骨髓CD8+细胞培养中CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的CD25分子表达率为（18.43±1.892）%,CD3/CD28+TRAIL干预组为（6.94±0.31）%,medium组为（0.52±0.11）%。CD3/CD28刺激培养组明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（P<0.001）。2,CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的凋亡率为（16.80±1.10）%,CD3/CD28+TRAIL干预组为（16.78±1.35）%,medium组为（0.21±0.006）%。CD3/CD28刺激培养组与CD3/CD28+TRAIL干预组比较无差异统计学意义（P=0.9817）。第三部分:1,SAA患者骨髓CD8+细胞培养中anti-CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的CD69,HLA-DR,CD25分子表达率分别为（40.8±1.68）%、（71.55±1.99）%、（50.9±3.06）%。CD3/CD28+TRAIL干预组分别为（30.2±1.78）%、（59.33±2.27）%、（39.05±3.18）%。CD3/CD28刺激培养组明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（P均<0.01）。2,CD3/CD28刺激培养组CD8+细胞的凋亡率为（30.78±1.33）%,CD3/CD28+TRAIL干预组为（30.18±1.51）%,比较无差异统计学意义（P=0.4827）。3,CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的穿孔素表达率（28.42±1.71）%,明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（15.53±2.29）%,（P<0.0001）。4,CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的颗粒酶平均荧光强度（8465±211.6）%明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（7722±74.99）%,（P<0.0001）。5,CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的p-ZAP70分子表达平均荧光强度（418800±16140）明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（302200±9796）,（P<0.0001）。6,CD3/CD28刺激组骨髓CD8+T细胞培养上清IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-12浓度分别为（447.7±26.61）pg/ml、（1126±40.4）pg/ml、（2434±259.5）pg/ml、（1020±54.32）pg/ml。anti-CD3/CD28+TRAIL干预组浓度分别为（281.4±21.82）pg/ml、（641.7±26.1）pg/ml、（1499±130.8）pg/ml、（768.7±28.46）pg/ml。CD3/CD28+TRAIL干预组明显低于anti-CD3/CD28刺激组（P均<0.01）。结论1,建立免疫介导SAA小鼠模型成功。与SAA模型组相比,TRAIL治疗SAA小鼠组外周血细胞及骨髓细胞数均有明显升高,TRAIL治疗SAA小鼠组血浆中IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ水平较SAA模型组减低,提示重组小鼠TRAIL因子可以减轻SAA小鼠的炎症反应程度,且对再障小鼠的血象和骨髓象恢复有一定的治疗作用。2,体外扩增培养小鼠骨髓CD8+T细胞需加入anti-CD3/CD28单抗刺激。TRAIL因子可在体外下调重型再生障碍性贫血小鼠骨髓中CD8+T细胞表面CD25的表达,从而可能对CD8+T细胞功能亢进具有抑制作用,而TRAIL对于重型再生障碍性贫血小鼠骨髓中CD8+T细胞的凋亡水平并无明显影响。3,细胞体外培养实验中,重组人TRAIL因子在体外对SAA患者CD8+T细胞表面穿孔素和颗粒酶的表达水平有一定的下调作用。能一定程度上抑制CD8+细胞IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ等细胞因子的分泌。对CD8+细胞的磷酸化ZAP70分子的表达水平有抑制作用,但对CD8+细胞的凋亡水平并无明显影响。4,TRAIL在SAA中可下调CD8+T淋巴细胞的ZAP-70分子磷酸化水平,抑制CD8+T淋巴细胞活化,减低其功能活化分子CD69,HLA-DR,CD25的表达水平,从而减少其分泌穿孔素,颗粒酶,IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-12水平。本研究揭示了重组TRAIL很可能是治疗SAA的一种富有前景的新药物,并为此新疗法提供了一定的理论基础。
孙莹莹[8]（2020）在《髓样树突状细胞中cofilin 1在重型再生障碍性贫血发病机制中作用的研究》文中提出目的通过研究SAA患者mDC内cofilin 1表达水平,及其对mDC和下游效应T淋巴细胞的影响,探索cofilin 1在SAA免疫发病中的作用,为完善SAA免疫发病机制,寻求新的治疗靶点提供理论依据。方法一,通过流式细胞术、WB方法检测30例SAA患者（初治15例、完全缓解15例）和15名健康对照者mDC内cofilin 1蛋白表达水平,并将SAA患者cofilin 1水平与其血常规、免疫指标作相关性分析。通过q RT-PCR方法检测三组患者mDC内cofilin 1的m RNA相对表达水平。二,应用RNAi技术敲低SAA患者mDC内cofilin 1表达水平,对敲低前后的mDC进行如下检测:CCK-8检测细胞增殖、流式细胞术检测凋亡、流式细胞术和免疫荧光方法检测吞噬能力、Transwell实验检测细胞迁移能力、流式细胞术检测共刺激分子CD80和CD86表达水平,免疫荧光检测F-actin。三,将cofilin 1敲低前后的SAA患者mDC与CD4+T淋巴细胞共培养,流式细胞术检测各组共培养上清Th1和Th2相关细胞因子的表达差异,流式细胞术检测Treg细胞foxp3的表达水平。四,将cofilin 1敲低前后的SAA患者mDC与CD8+T淋巴细胞共培养,CFSE检测各组CD8+T淋巴细胞的增殖状况差异,流式细胞术检测其分泌穿孔素、颗粒酶B水平变化。结果一,流式检测初治SAA患者mDC内cofilin 1水平[（70.37±22.70）%]明显高于健康对照者[（39.65±23.43）%,P=0.006]及SAA完全缓解者[（43.97±21.23）%,P=0.002],完全缓解组及健康对照组之间无统计学差异。SAA患者mDC内cofilin1水平,与患者的白细胞计数显着负相关（r=-0.57,P=0.0026）,与中性粒细胞绝对值显着负相关（r=-0.49,P=0.0134）,与血小板计数显着负相关（r=-0.57,P=0.0028）,与血红蛋白水平显着负相关（r=-0.47,P=0.0192）,与网织红细胞绝对值显着负相关（r=-0.4089,P=0.0424）;与CD4+/CD8+比值显着负相关（r=-0.62,P=0.0010）,与IL-2浓度显着正相关（r=0.56,P=0.0037）,与IFN-γ浓度显着正相关（r=0.56,P=0.0037）。WB检测显示SAA初治患者mDC内cofilin 1表达水平高于SAA完全缓解者及健康对照者。q RT-PCR检测提示SAA初治组患者骨髓培养mDC内cofilin 1的m RNA相对表达量（9.13±10.32）显着高于完全缓解组（2.91±3.08,P=0.049）和健康对照组（1.74±1.70,P=0.020）。二,经q RT-PCR和WB验证成功敲低mDC中cofilin 1水平,蛋白敲低水平为31.6%。应用流式细胞术检测mDC吞噬功能显示敲低组显着低于阴性转染组[（22.64±12.53）%vs（40.07±11.90）%,P=0.000],免疫荧光实验支持上述结果。Transwell检测mDC迁移功能结果示cofilin 1敲低组显着低于阴性转染组（45.08±31.98 vs 67.75±38.07,P=0.044）。流式细胞术检测mDC表面CD86表达水平示敲低组显着低于阴性转染组[（73.80±17.18）%vs（77.26±14.39）%,P=0.034]。Cofilin 1敲低组与阴性转染组之间mDC增殖、凋亡、CD80表达水平无统计学差异。免疫荧光检测结果显示cofilin 1敲低组F-actin含量增高,细胞突起密度增加,发生明显的重构。三,流式细胞术检测mDC与CD4+T淋巴细胞共培养体系中CD4+T淋巴细胞分泌Th1相关细胞因子水平:与阴性转染组相比,cofilin 1敲低组IL-2浓度降低[（179.48±180.52）pg/ml vs（216.32±203.24）pg/ml,P=0.024],TNF-α浓度降低[（178.08±146.00）pg/ml vs（232.48±157.75）pg/ml,P=0.017],IFN-γ浓度降低[（2499.71±2051.73）pg/ml vs（3020.96±2340.99）pg/ml,P=0.023];Th2相关细胞因子仅IL-6浓度降低（357.19±237.02）pg/ml vs（435.74±325.01）pg/ml,P=0.047],IL-4和IL-10浓度无差异。Cofilin 1敲低前后共培养体系Treg表达foxp3水平无差异。四,CFSE检测mDC与CD8+T淋巴细胞共培养体系中CD8+T淋巴细胞增殖,结果显示cofilin 1敲低组CD8+T淋巴细胞CFSE平均荧光强度为显着高于阴性转染组（1610313.97±1182187.85 vs 1107368.41±901731.27,P=0.028）。流式细胞术检测cofilin 1敲低组CD8+T淋巴细胞分泌穿孔素显着低于阴性转染组[（29.39±15.51）%vs（31.71±14.99）%,P=0.023],cofilin 1敲低组CD8+T淋巴细胞分泌颗粒酶B显着低于阴性转染组[（15.49±10.89）%vs（23.35±10.56）%,P=0.019]。结论一,初治SAA患者mDC内cofilin 1蛋白水平高于完全缓解者和健康对照者。SAA患者mDC内cofilin 1水平和患者的免疫状态、疾病严重程度密切相关,cofilin 1水平越高,免疫紊乱越严重,病情越重。q RT-PCR检测发现cofilin 1m RNA升高,提示cofilin 1在转录水平即升高。二,经RNAi技术敲低SAA患者mDC内cofilin 1,可通过F-actin重构,降低mDC吞噬、迁移功能以及表面共刺激分子CD86的表达水平。对mDC增殖、凋亡、CD80表达无影响。三,Cofilin 1能够增加SAA患者mDC刺激CD4+T淋巴细胞分泌Th1相关细胞因子（IL-2、TNF-α、IFN-γ）和Th2相关细胞因子（IL-6）的能力,以Th1为着。对Treg表达Foxp3能力无影响。四,Cofilin 1能够增加SAA患者mDC刺激CD8+T淋巴细胞增殖和分泌穿孔素、颗粒酶B的能力。五,SAA患者中cofilin 1表达水平或许可以作为SAA诊断和评价的新指标,有望成为SAA治疗的新靶点。
莫文苑[9]（2020）在《Shh蛋白在再生障碍性贫血骨髓中表达及相关性研究》文中提出背景与目的再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）是一种由不同病因和机制引起的骨髓造血功能衰竭症,中国的年发病率为0.74/10万人,青年人和老年人发病率较高。AA按照病因可分为遗传性及获得性,目前认为原发性获得性AA的发生发展与造血干祖细胞缺陷、造血微环境异常、免疫异常等因素相关。音猬因子信号通路（Sonic Hedgehog,SHH）参与人体的胚胎发育,具有调控造血干细胞增殖分化作用,并通过调节血管新生因子、细胞周期、促进成骨细胞分化并抑制脂肪细胞分化等机制参与机体造血过程。Shh信号通路是否参与再生障碍性贫血患者的发病过程?目前相关研究较少。本研究通过检测再生障碍性贫血患者骨髓组织中Shh蛋白表达情况,并分析其与AA患者骨髓增生程度、外周血细胞计数、淋巴细胞亚群、生存期等的相关性,旨在探究Shh在再生障碍性贫血发病过程中的作用。方法1.回顾性分析自2010年1月至2019年12月在广东药科大学附属第一医院血液内科住院并确诊的33例获得性AA患者的临床资料,采用电子病历收集患者的基本信息、临床资料、辅助检查和实验室检查结果,随访患者生存情况。2.于病理科调取33例AA患者住院时的骨髓活检组织,应用免疫组化方法检测骨髓组织中Shh蛋白表达情况,同时选取20例缺铁性贫血患者骨髓活检组织作为正常对照,应用ImagePro Plus 6软件进行测量、取值,分析Shh蛋白表达在AA组与正常对照组的差异,Shh蛋白在不同AA分型、性别、年龄、不同骨髓增生程度中的表达差异,AA患者Shh蛋白表达水平与外周血细胞计数、淋巴细胞亚群的相关性,分析Shh表达水平对AA患者生存期的影响。3.采用SPSS Stastistics-24软件统计分析,应用t检验或非参数检验分析不同组别Shh蛋白表达水平的差异性;应用线性相关及线性回归分析Shh蛋白与外周血细胞计数相关性;Kaplan-Meier法进行生存分析。结果1.AA患者骨髓中Shh蛋白表达水平明显低于正常对照组（P=0.009）。2.Shh蛋白在AA患者不同分型（重型/非重型）、增生程度（活跃/低下）、性别（男/女）、年龄（>48岁/≤48岁）组中表达水平均无明显差异（P>0.05）。3.AA患者Shh蛋白表达水平与白细胞计数（P=0.022）、淋巴细胞计数（P=0.047）、CD4+/CD8+细胞比值（P=0.027）呈正相关;与血小板计数、红细胞计数、中性粒细胞计数、网织红细胞计数无明显相关性（P>0.05）。4.Shh蛋白高表达组与低表达组之间CD3-CD16+CD56+细胞百分比、CD3-CD19+细胞百分比、CD3+细胞百分比、CD4+/CD8+比值无明显差异（P>0.05）。5.非重型AA与重型患者之间生存曲线有差异,非重型AA生存率优于重型AA（P=0.007）;AA患者Shh高表达组与Shh低表达组、骨髓增生活跃组与骨髓增生低下组、CD4+/CD8+细胞比值正常组与异常组之间生存率均无明显差异（P>0.05）。结论1.AA患者骨髓Shh蛋白表达明显低于正常对照组,Shh蛋白表达低下可能是参与AA患者发病因素之一。2.AA患者骨髓Shh蛋白表达水平与白细胞计数、淋巴细胞计数、CD4+/CD8+比值正相关。3.不同分型是影响AA患者生存率的重要因素。
陈蕊[10]（2019）在《再生障碍性贫血用药特点及疗效与安全性分析》文中研究指明目的:基于真实医疗环境,挖掘临床治疗再生障碍性贫血中西药处方和《中国药典》收载相关中药制剂组方药味规律,探究中西医结合临床再生障碍性贫血的药物治疗的用药情况,为再生障碍性贫血临床合理用药、处方点评提供参考。同时从整体的循证医学评价中药在该病种治疗上的临床疗效和安全性。方法:采用中医传承辅助平台软件V2.5,对药味频次、药物关联规则及核心药物组合进行挖掘,分析我院再生障碍性贫血患者处方用药,整理2015版《中国药典》中补血、清热、止血作用中成药的用药规律。并对公开发表的中医药治疗再生障碍性贫血的临床随机对照试验,采用Rev Man5.3软件和Stata14.0软件进行疗效与安全性Meta分析。结果:本院临床中西药联用治疗再生障碍性贫血,西药主要为环孢素,利可君片、十一酸睾酮等。使用的中药种类较西药多且丰富,涉及320味,常用中药饮片有牡丹皮、白术、白芍、菟丝子等,核心药味配伍组合为牡丹皮-生地黄-白芍,中药类别主要为清热类、补虚类和止血类,重型再生障碍性贫血清热药使用较多,慢性再生障碍性贫血以补虚药为主。各证型进行药物关联规则挖掘,药味选择有一定差异,但药味组合均以补气药-补血药,清热凉血药-补气药-补血药为主。中药制剂主要包括茜蓟生血片、造血再生片、宁血络片等医院自制制剂和益血生胶囊等。63种药典收载的补血、清热、止血作用的中成药主要为补虚药、清热药和活血化瘀药,与本院用药结果不同。截至2019年1月的文献Meta分析显示:中西药联用能提高治疗有效率（RR=1.31,95%CI[1.28,1.35],P<0.00001）,且能降低患者肝功能异常（RR=0.35,95%CI[0.27,0.46],P<0.00001）、痤疮（RR=0.36,95%CI[0.26,0.50],P<0.00001）、多毛（RR=0.22,95%CI[0.13,0.38],P<0.00001）、声音嘶哑（RR=0.33,95%CI[0.14,0.79],P=0.01）、牙龈增生（RR=0.29,95%CI[0.17,0.49],P<0.0001）、手颤（RR=0.24,95%CI[0.14,0.41],P<0.00001）等不良反应发生。结论:临床再生障碍性贫血的治疗是在西药常规治疗基础上,结合清热、补虚、止血作用的中药及制剂,“扶正袪邪”并施,体现“健脾补肾”、“清热凉血”的疗法。2015版《中国药典》收载的补血、清热、止血作用的中成药组方药味的功效类别与本院AA临床使用的中药功效类别不同。Meta分析显示,中药对AA的治疗能提高临床疗效,减少不良反应,对患者生活质量具有一定改善作用。
二、再生障碍性贫血患者细胞免疫功能及其对骨髓造血功能影响的探讨（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、再生障碍性贫血患者细胞免疫功能及其对骨髓造血功能影响的探讨（论文提纲范文）
（1）肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 肾藏精理论研究 |
| 1.1 肾精的生成来源 |
| 1.2 肾精的功能 |
| 1.3 肾精的现代医学研究 |
| 2 “髓”的理论研究 |
| 2.1 “髓”的含义及生理功能 |
| 2.2 “髓”的生成与肾精 |
| 2.3 “骨髓”的现代医学研究 |
| 3 “血”的研究理论 |
| 3.1 血的涵义及生理功能 |
| 3.2 血的生成与肾精 |
| 3.3 贫血的现代医学研究 |
| 4 补肾方龟鹿二仙胶 |
| 5 结语 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验1 肾精亏虚对SD雄性大鼠造血功能影响的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要仪器及耗材 |
| 1.5 造模方法及分组、给药 |
| 1.6 检测指标及方法 |
| 1.7 统计方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 红细胞数量(RBC)、血红蛋白(HGB)含量比较 |
| 2.3 血清促红细胞生成素(EPO)、睾酮(T)含量比较 |
| 2.4 附睾精子质量比较 |
| 2.5 睾丸组织病理学比较 |
| 2.6 骨髓象比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 肾精亏虚大鼠模型的建立 |
| 3.2 肾精亏虚大鼠造血组织形态学的改变 |
| 3.3 肾精亏虚对血清EPO含量的影响 |
| 实验2 肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血细胞及CD34+细胞凋亡的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物及分组 |
| 1.2 造模方法 |
| 1.3 药物及灌胃 |
| 1.4 仪器设备及试剂 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠骨髓造血干细胞的超微病理形态学观察 |
| 2.2 流式细胞仪检测骨髓CD34+细胞凋亡的结果 |
| 2.3 骨髓石蜡包埋切片TUNEL法检测CD34+细胞凋亡结果 |
| 3 讨论 |
| 实验3 肾精亏虚对SD雄性大鼠导致骨髓造血细胞凋亡的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物及分组 |
| 1.2 造模方法 |
| 1.3 药物及灌胃 |
| 1.4 仪器、试剂及耗材 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和 Fasl蛋白表达结果 |
| 2.2 骨髓 Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas 和 FaslmRNA RT-PCR 结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 肾精亏虚对大鼠骨髓Fas/Fasl蛋白表达的影响 |
| 3.2 肾精亏虚对大鼠骨髓Bcl-2、Bax蛋白及Bcl-2m RNA、Baxm RNA表达的影响 |
| 3.3 肾精亏虚对大鼠骨髓Caspase-3 表达的影响 |
| 讨论 |
| 1.肾精亏虚与贫血的关系 |
| 2.肾精亏虚大鼠模型建立评估 |
| 3.肾精亏虚对骨髓造血功能影响的可能机制 |
| 4.龟鹿二仙胶改善骨髓造血功能的作用机制 |
| 结论 |
| 展望与不足 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1 综述 肾虚与贫血关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 2 发表论文 |
| 致谢 |
（2）脐带间充质干细胞联合常规疗法治疗再生障碍性贫血的病例回顾性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 骨髓间充质干细胞在再生障碍性贫血的相关进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）中医药辨证调控骨髓造血微环境的机制研究（论文提纲范文）
| 1 从肾论治为主 |
| 2 从脾论治为主 |
| 3 从脾肾论治为主 |
| 4 从气论治为主 |
| 5 从血论治为主 |
| 6 从气血论治为主 |
| 7 从毒论治为主 |
| 8 小结 |
（4）补肾益髓方联合ATG/ALG治疗重型再障疗效分析及从T淋巴细胞阴性选择研究再障发病机制（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 一.资料与方法 |
| (一)诊断标准 |
| (二)一般资料 |
| (三)治疗方法 |
| (四)观察指标 |
| (五)疗效评价标准 |
| (六)统计方法 |
| 二.临床观察结果 |
| (一)总体疗效 |
| (二)治疗后血象变化 |
| (三)T细胞亚群 |
| (四)其他疗效相关因素分析 |
| (六)生活质量及生存转归 |
| 实验研究 |
| 一.研究对象 |
| 二.诊断标准 |
| 三.纳入标准和排除标准 |
| (一)纳入标准 |
| (二)排除标准 |
| 四.实验材料 |
| (一)主要仪器 |
| (二)主要试剂及材料 |
| 五.实验步骤 |
| (一)外周血单个核细胞的提取 |
| (二)RNA的提取 |
| (三)总RNA的测定 |
| (四)逆转录:cDNA合成第一链 |
| (五)荧光定量RT-PCR反应 |
| 六.统计学分析 |
| 七.实验结果 |
| 讨论 |
| 一.中医对再生障碍性贫血的认识 |
| (一)病名由来 |
| (二)病因病机 |
| (三)治则治法 |
| 二.补肾益髓方治疗重型再障的依据 |
| (一)补肾益髓方组成 |
| (二)组方分析 |
| (三)补肾中药治疗再障的现代研究 |
| 三.重型再障的免疫抑制治疗 |
| (一)以ATG/ALG为主的重型再障IST治疗进展 |
| (二)IST相对于allo-HSCT的优势 |
| 四.基于T淋巴细胞阴性选择异常研究再生障碍性贫血发病机制 |
| (一)T淋巴细胞免疫异常与再生障碍性贫血 |
| (二)T淋巴细胞早期发育与阴性选择 |
| (三)Nur77 与T淋巴细胞阴性选择 |
| 五.结果分析 |
| (一)总体疗效 |
| (二)与疗效相关的因素分析 |
| (三)不良反应 |
| (四)生存转归 |
| (五)Nur77 mRNA 表达 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 T淋巴细胞异常与再生障碍性贫血 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 发表论文 |
（5）慢性再生障碍性贫血中医证候分型与T细胞免疫应答失调的相关性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 获得性再生障碍性贫血发病机制研究进展 |
| 1 免疫功能失调 |
| 2 骨髓微环境异常 |
| 3 端粒酶功能缺陷 |
| 4 克隆性造血与体细胞突变 |
| 5 总结 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药辨治慢性再生障碍性贫血 |
| 1 中医病因病机分析 |
| 2 中医治则治法 |
| 3 中医药治疗慢性再生障碍性贫血基础研究进展 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 试验研究 |
| 试验一 慢性再障中医证候分型与T细胞免疫应答失调的相关性 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 研究结论 |
| 5 讨论 |
| 试验二 健脾补肾中药干预慢性再障T细胞免疫应答 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究结果 |
| 4 研究结论 |
| 5 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）滋肾益髓生血方对AA小鼠骨髓保护作用及T-bet/GATA-3影响的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分: 文献综述 |
| 综述一 再生障碍性贫血免疫机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 再生障碍性贫血Th1/Th2细胞亚群失衡与转录因子T-bet和GATA-3的调控作用 |
| 参考文献 |
| 第二部分: 实验研究 |
| 实验一 滋肾益髓生血方对~(60)Co-γ联合免疫诱导AA小鼠的药效学研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 实验二 滋肾益髓生血方对~(60)Co-γ联合免疫诱导AA小鼠免疫功能的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 实验三 滋肾益髓生血方对~(60)Co-γ联合免疫诱导AA小鼠脾组织T-bet、GATA-3蛋白表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 实验四 滋肾益髓生血方对~(60)Co-γ联合免疫诱导AA小鼠骨髓组织T-bet、GATA-3蛋白及mRNA的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
（7）重型再生障碍性贫血中TRAIL对CD8+细胞功能的影响及相关机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、TRAIL治疗重型再生障碍性贫血小鼠模型效果观察 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.1.3 研究方法 |
| 1.1.4 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 SAA模型各组小鼠血象、骨髓细胞计数、骨髓病理 |
| 1.2.2 SAA模型小鼠外周血浆炎性细胞因子水平 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、TRAIL对重型再生障碍性贫血模型小鼠CD8~+T细胞功能的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 |
| 2.1.3 研究方法 |
| 2.1.4 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 免疫磁珠分选SAA模型小鼠骨髓CD8~+T细胞并检测其纯度 |
| 2.2.2 各组小鼠骨髓CD8~+T培养细胞表面功能分子CD25表达水平比较 |
| 2.2.3 各组小鼠骨髓CD8~+T培养细胞凋亡率水平 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、TRAIL对重型再生障碍性贫血患者CD8~+T细胞功能的影响及相关机制 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 |
| 3.1.3 研究方法 |
| 3.1.4 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 免疫磁珠分选SAA患者骨髓CD8~+T细胞并检测其纯度 |
| 3.2.2 SAA患者骨髓CD8~+T细胞活化功能分子CD25、CD69、HLA-DR表达水平比较 |
| 3.2.3 各组SAA患者骨髓CD8~+T培养细胞凋亡水平比较 |
| 3.2.4 SAA患者CD8~+T培养细胞穿孔素、颗粒酶表达水平比较 |
| 3.2.5 SAA患者CD8~+T细胞磷酸化ZAP70 分子表达水平比较 |
| 3.2.6 SAA患者CD8~+T细胞培养上清炎性细胞因子水平比较 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 泛素系统调控适应性免疫应答研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）髓样树突状细胞中cofilin 1在重型再生障碍性贫血发病机制中作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、重型再生障碍性贫血患者髓样树突状细胞中cofilin1表达水平研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 试剂与仪器 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.1.4 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 FACS检测SAA患者及健康对照者外周血mDC内cofilin1水平 |
| 1.2.2 SAA患者外周血mDC内cofilin1水平与疾病严重程度及患者免疫状态相关 |
| 1.2.3 mDC体外诱导分化过程的显微镜形态观察 |
| 1.2.4 mDC体外诱导分化效率及分选效率 |
| 1.2.5 WB检测SAA患者及健康对照者mDC内cofilin1水平 |
| 1.2.6 qRT-PCR方法检测SAA患者及健康对照者mDC内cofilin1 mRNA水平 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、重型再生障碍性贫血患者cofilin1对mDC增殖凋亡及功能的影响及机制 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 试剂与仪器 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.1.4 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 mDC体外诱导分化、磁珠分选及纯度检测 |
| 2.2.2 流式细胞术转染效率验证,筛选最适细胞及转染试剂比例 |
| 2.2.3 qRT-PCR检测mRNA水平转染效率 |
| 2.2.4 Western Blot验证转染效果 |
| 2.2.5 CCK-8方法检测cofilin1-siRNA转染前后mDC增殖情况变化 |
| 2.2.6 FACS检测cofilin1-si RNA转染前后mDC凋亡情况变化 |
| 2.2.7 FACS及免疫荧光检测cofilin1-siRNA转染前后mDC吞噬功能变化 |
| 2.2.8 Transwell实验检测cofilin1-siRNA转染前后mDC迁移能力的变化 |
| 2.2.9 FACS检测cofilin1-siRNA转染前后mDC共刺激分子CD80/CD86表达水平变化 |
| 2.2.10 免疫荧光检测cofilin1-siRNA转染前后mDC内F-actin的变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、重型再生障碍性贫血患者cofilin1对mDC刺激CD4~+T淋巴细胞功能的影响 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 试剂与仪器 |
| 3.1.3 实验方法 |
| 3.1.4 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 mDC体外诱导分化、分选、纯度检测 |
| 3.2.2 mDC质粒转染及效果验证 |
| 3.2.3 CD4~+T淋巴细胞分选纯度检测 |
| 3.2.4 mDC与CD4~+T淋巴细胞共培养形态观察 |
| 3.2.5 转染前后mDC刺激CD4~+T淋巴细胞产生细胞因子能力变化 |
| 3.2.6 转染前后mDC刺激Treg细胞Foxp3表达水平变化 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 树突状细胞对CD4~+T淋巴细胞的的影响 |
| 3.3.2 树突状细胞与CD4~+T淋巴细胞之间的相互作用与细胞骨架密切相关 |
| 3.3.3 Cofilin1影响mDC对CD4~+T淋巴细胞的作用 |
| 3.4 小结 |
| 四、重型再生障碍性贫血患者cofilin1对mDC刺激CD8~+T淋巴细胞功能的影响 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 研究对象 |
| 4.1.2 试剂与仪器 |
| 4.1.3 实验方法 |
| 4.1.4 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 mDC体外诱导分化、分选、纯度检测 |
| 4.2.2 mDC质粒转染及效果验证 |
| 4.2.3 CD8~+T淋巴细胞分选纯度检测 |
| 4.2.4 mDC与CD8~+T淋巴细胞共培养形态观察 |
| 4.2.5 CFSE检测转染前后mDC刺激CD8~+T淋巴细胞增殖能力变化 |
| 4.2.6 FACS检测转染前后mDC刺激CD8~+T淋巴细胞杀伤功能变化 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 获得性再生障碍性贫血发病机制及遗传学异常研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）Shh蛋白在再生障碍性贫血骨髓中表达及相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 1.研究对象 |
| 1.1 病例选择 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2.实验材料与方法 |
| 2.1 主要试剂 |
| 2.2 免疫组化主要使用仪器 |
| 2.3 免疫组化检测Shh蛋白表达 |
| 2.3.1 骨髓活检组织收集 |
| 2.3.2 苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE) |
| 2.3.3 免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测Shh表达 |
| 2.3.4 Shh表达水平评分标准 |
| 2.4 随访及观察指标 |
| 2.5 统计学分析 |
| 第三章 研究结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 1.总结 |
| 2.展望 |
| 参考文献 |
| 附录 主要中英文词汇缩略表 |
| 致谢 |
| 在读期间发表和待发表的文章 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（10）再生障碍性贫血用药特点及疗效与安全性分析（论文提纲范文）
| 英文缩略词索引 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 再生障碍性贫血用药特点分析 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 处方来源 |
| 1.2 中药名称规范及功效分类 |
| 1.3 处方录入与核对 |
| 1.4 分析方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 疾病分类结果 |
| 2.2 总体用药结果 |
| 2.3 中医疾病统计结果 |
| 2.4 中医疾病各证型用药频次及功效分类结果 |
| 2.5 中医证候统计结果 |
| 2.6 虚劳病各证型用药频次及组方规律结果 |
| 2.7 髓劳病各证型用药频次及组方规律结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 常用药味分析 |
| 3.2 总体用药讨论 |
| 第二章 2015年版《中国药典》补血、清热、止血作用中成药组方用药分析 |
| 1 资料和方法 |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 药味名称处理 |
| 1.3 分析方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 补血、清热、止血作用中成药的统计与类别 |
| 2.2 补血、清热、止血作用中成药药味频次 |
| 2.3 补血、清热、止血作用中成药关联规则 |
| 3 讨论 |
| 第三章 中医药治疗再生障碍性贫血疗效与安全性Meta分析 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献资料 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 1.3 文献检索策略 |
| 1.4 资料提取 |
| 1.5 文献质量评价 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献检索、筛选结果 |
| 2.2 纳入研究的基本特征 |
| 2.3 文献质量评价结果 |
| 2.4 中医药治疗AA总有效率Meta分析结果 |
| 2.5 中医药改善AA患者不良反应Meta分析结果 |
| 3 讨论 |
| 总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录一 文献综述 再生障碍性贫血中西医研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 论文发表情况 |
四、再生障碍性贫血患者细胞免疫功能及其对骨髓造血功能影响的探讨（论文参考文献）
- [1]肾精亏虚对SD雄性大鼠骨髓造血功能的影响及其机制研究[D]. 吕建芳. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [2]脐带间充质干细胞联合常规疗法治疗再生障碍性贫血的病例回顾性研究[D]. 杨雪莹. 河北医科大学, 2021(02)
- [3]中医药辨证调控骨髓造血微环境的机制研究[J]. 熊家青,徐基平,李逵,吴泳蓉,黄晓蒂,田莎,吴若霞,田雪飞. 湖南中医药大学学报, 2020(11)
- [4]补肾益髓方联合ATG/ALG治疗重型再障疗效分析及从T淋巴细胞阴性选择研究再障发病机制[D]. 孙悦. 山东中医药大学, 2020(01)
- [5]慢性再生障碍性贫血中医证候分型与T细胞免疫应答失调的相关性[D]. 陈成顺. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]滋肾益髓生血方对AA小鼠骨髓保护作用及T-bet/GATA-3影响的实验研究[D]. 刘运华. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]重型再生障碍性贫血中TRAIL对CD8+细胞功能的影响及相关机制研究[D]. 华罗刚. 天津医科大学, 2020(06)
- [8]髓样树突状细胞中cofilin 1在重型再生障碍性贫血发病机制中作用的研究[D]. 孙莹莹. 天津医科大学, 2020(06)
- [9]Shh蛋白在再生障碍性贫血骨髓中表达及相关性研究[D]. 莫文苑. 广东药科大学, 2020(01)
- [10]再生障碍性贫血用药特点及疗效与安全性分析[D]. 陈蕊. 上海中医药大学, 2019(03)