一、人体脐带血冷冻后仍新鲜（论文文献综述）
方昕鑫[1]（2021）在《济南市居民通过膳食摄入短、中链氯化石蜡的健康风险评估》文中提出氯化石蜡（chlorinated paraffins,CPs）是由多氯化正构烷烃合成的复杂混合物,含有数千种异构体,广泛用于塑料的增塑剂、各种消费产品的二次阻燃剂以及油漆、润滑剂、密封剂和金属加工流体的添加剂。CPs根据碳链长度可分为超短链氯化石蜡（C≤9,very short-chain chlorinated paraffins,vSCCPs）、短链氯化石蜡（C10-13,short-chain chlorinated paraffins,SCCPs）、中链氯化石蜡（C14-17,medium-chain chlorinated paraffins,MCCPs）、长链氯化石蜡（C18,long-chain chlorinated paraffins,LCCPs）CPs。由于SCCPs具有环境持久性、远距离迁移性、生物蓄积性、生物毒性等持久性有机污染物（persistent organic pollutants,POPs）性质,在2017年被列入斯德哥尔摩公约POPs清单的附件A中。CPs广泛分布于大气、生物体、水体、土壤以及沉积物等各种环境介质中,甚至极地地区也有检出。欧美加日等一些国家已经采取了一些措施来限制SCCPs的生产,但其具有悠久的生产和使用历史,我国作为世界上最大的CPs生产国与使用国,并没有采取相关措施,因此CPs在世界各地的各种环境中广泛存在。此外,由于SCCPs已被逐步淘汰,预计未来将转向增加MCCPs的产量作为首选的替代方案。因此,MCCPs与LCCPs在环境方面也应得到同样的关注。有研究发现,氯化度超过46%的MCCPs具有持久性和毒性,在环境样品中检出含量较高,因此MCCPs的生产应用可能给环境和生物圈带来新的负面影响与健康风险。人体的CPs暴露途径分为食品摄入、呼吸吸收、皮肤接触等,其中食品摄入是最大暴露源之一,在非职业人群中占90%,但目前的研究缺乏针对济南市居民具体饮食结构的相关分析,因此测定济南市膳食中CPs的分布、分析摄入风险,对评估我国的污染现状以及对人类的影响有重大意义。本研究采取加速溶剂萃取法（accelerated solvent extraction,ASE）与超声提取法进行前处理,并通过复合硅胶柱净化以及浓缩,辅以氯强化大气压化学电离源-四级杆飞行时间质谱（atmospheric pressure chemical ionization source-four-stage pole time-of-flight mass spectrometry,APCI-QTOF-MS）检测分析,旨在测定济南市不同食品中SCCPs、MCCPs的含量及其同族体的分布模式,估算济南市不同年龄/性别居民的暴露程度,统计不同食品的每日摄入量并评估其健康风险。SCCPs和MCCPs在所有食品样品中均有检出,表明济南市居民广泛暴露于CPs。所有样品中SCCPs的C同族体分布为以C13为主,Cl同族体以Cl7、Cl6、Cl8为主;MCCPs的C同族体C14占比最高,Cl同族体主要是Cl7、Cl8、Cl6。动物源食品样品中乳制品CPs含量最高,植物源性食品样品中食用油类食品CPs含量最高;食品样本中SCCPs浓度范围是5.3～2 483.2 ng/g,平均浓度为192.3 ng/g;MCCPs浓度范围是4.6～605.1 ng/g,平均浓度为112.3 ng/g;SCCPs、MCCPs湿重浓度均与含脂率正相关;所有样品中SCCPs与MCCPs含量比值为1.4,其中食用油最高,为3.6,蛋类最低,为0.7。本研究中SCCPs的每日摄入量（estimated daily intake,EDI）为 2 201.9～4 128.3 ng/（kg·d）;MCCPs 的 EDI 为 1 726.4～3 230.2 ng/（kg·d）;SCCPs 的危害熵（hazard quotients,HQ）为 0.022～0.067;MCCPs 的 HQ为0.017～0.047,均小于1。尽管根据现有数据,通过饮食摄入的SCCPs、MCCPs不会对人类健康造成不利影响,但由于CPs工业生产并未禁止,人类将继续生产并持续接触CPs产品。因此需要进一步加强和实施环境风险管理,以减少CPs对环境和人类健康的潜在不利影响。
李婧嫄[2]（2020）在《人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）对小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗作用及其机制研究》文中提出研究背景与研究目的:皮肤是由表皮、真皮及皮下组织构成的人体最大器官,具有调节人体温度、维持内环境稳定、阻止化学物质及微生物进入等作用。皮肤损伤包括烧烫伤、外伤、糖尿病足导致的损伤等,严重的皮肤损伤可以是致命的。皮肤烧烫伤是指因热力、热液、化学物质、放射线、光、以及电等作用于人体而引起的损伤,主要包括皮肤或粘膜损伤,严重者可能伤及皮下组织,是日常工作和生活中最常见且极其复杂的外伤疾病之一。目前,深度皮肤烫伤的治疗效率不高,伤口愈合缓慢,导致新生皮肤组织无泌汗功能、缺乏弹性,且常常伴随瘢痕形成。因此,寻找治疗皮肤烫伤、加快皮肤创面愈合的新方法迫在眉睫。间充质干细胞是一簇来源于组织中胚层间质的能够进行自我更新和多向分化的干细胞,它属于成体干细胞的一种。近年来,大量的研究表明间充质干细胞可以产生和分泌多种细胞因子,促进皮肤的损伤修复。人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs）是一种来源于新生儿羊膜的新型干细胞,具有取材方便、增殖能力强、无伦理障碍、安全不致瘤性等优点。hAMSCs是否可以促进皮肤烫伤的损伤修复?其具体的作用机制及分子机制又是什么?到目前为止,还没有相关报道。本文旨在探讨hAMSCs对深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗作用及其机制,从而为寻找治疗皮肤烧烫伤的新方法及新靶点提供实验依据。实验方法:1.hAMSCs的分离、培养及鉴定:1)利用胰酶及胶原酶从羊膜上分离及培养hAMSCs;2)利用流式细胞术、RT-PCR及免疫荧光检测hAMSCs表面分子标志;3)成骨成脂分化检测hAMSCs体外多向分化潜能:4)利用软琼脂集落形成实验及NOD-SCID小鼠体内移植实验检测hAMSCs体内及体外致瘤性。2.hAMSCs、hAMSC-CM促进深Ⅱ度皮肤烫伤损伤修复的潜能及作用机制研究:1)利用自制皮肤烫伤装置构建小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤模型;2)将PBS、PKH26标志的hAMSCs、H-DMEM及hAMSC-CM原位注射在皮肤烫伤伤口附近,计算不同组别小鼠在在不同时间点伤口的面积;3)利用活体成像及免疫荧光检测hAMSCs在深Ⅱ度皮肤烫伤小鼠体内的存活、迁移及分化;4)利用HE染色、TUNEL凋亡染色、PCNA及CK19免疫组化及Western blot检测不同组别小鼠皮肤组织中热损伤皮肤细胞凋亡及增殖情况。3.hAMSCs、hAMSC-CM促进皮肤损伤修复的分子机制研究:1)体外建立表皮细胞HaCAT及真皮成纤维细胞DFL的热损伤模型,并利用Transwell共培养小室构建hAMSCs与HaCAT及DFL细胞的共培养体系;2)利用Annexin V/PI流式细胞凋亡实验、CCK8实验、划痕实验检测正常培养组、热损伤组、热损伤后hAMSCs共培养组及hAMSC-CM处理组热损伤皮肤细胞的凋亡、增殖及迁移;3)Western blot检测正常培养组、热损伤组、hAMSCs共培养组及hAMSC-CM处理组热损伤皮肤细胞中PI3K/AKT及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达;4)在hAMSCs与HaCAT及DFL细胞的共培养体系加入AKT抑制剂LY294002及β-catenin的抑制剂ICG001,利用流式细胞凋亡检测及Western blot检测其在hAMSCs抑制热损伤皮肤细胞凋亡、促进其增殖过程中发挥的作用;5)抗体芯片检测hAMSC-CM中440种细胞因子的表达水平,并筛选出可能激活PI3K/AKT信号的候选因子。实验结果:1.hAMSCs具有间充质干细胞的特性:1)利用两步消化法可从羊膜上分离培养得到具有典型间充质干细胞形态的hAMSCs,且hAMSCs扩增能力极强;2)RT-PCR、流式细胞术及免疫荧光检测表明hAMSCs表达间充质干细胞标志基因CD105、CD29、CD73、CD90及胚胎干细胞标志基因Oct-4、Nanog、SSEA-4,不表达造血干细胞标志基因CD34、CD133及CD45,不表达主要组织相容性Ⅱ类抗原HLA-DR,低表达主要组织相容性Ⅰ类抗原HLA-ABC,但不表达其共同刺激分子CD80、CD86及CD40,表明hAMSCs具有极低的免疫原性;2)hAMSCs可在体外定向分化为骨细胞及脂肪细胞:3)成瘤/致瘤研究表明,hAMSCs在体内及体外均不致瘤。2.hAMSCs及hAMSC-CM体内移植可通过抑制热损伤皮肤细胞的凋亡、促进热损伤皮肤细胞的增殖促进深Ⅱ度皮肤烫伤损伤修复:1)80℃热水烫伤100s可成功构建小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤模型:2)通过计算伤口面积及伤口愈合率表明hAMSCs及hAMSC-CM体内移植可促进深Ⅱ度皮肤烫伤的创面愈合:3)活体成像及免疫荧光检测表明hAMSCs可在小鼠皮肤烫伤部位存活超过21天且未分化为其它类型细胞,但细胞数目逐渐减少;4)TUNEL凋亡检测表明hAMSCs及hAMSC-CM可抑制热损伤皮肤细胞的凋亡,免疫组化及Western blot检测表明hAMSCs及hAMSC-CM可促进热损伤皮肤细胞的增殖。3.hAMSCs及hAMSC-CM可通过旁分泌作用激活PI3K/AKT及Wnt/β-catenin信号通路抑制热损伤皮肤细胞凋亡、促进热损伤皮肤细胞增殖:1)43℃处理50min,可成功在体外构建HaCAT及DFL细胞热损伤模型;2)hAMSCs及hAMSC-CM体外共培养可抑制热损伤皮肤细胞凋亡并促进其增殖及迁移;3)hAMSCs通过激活PI3K/AKT信号通路,抑制热损伤皮肤细胞的凋亡,而PI3K/AKT信号通路的活化,又可进一步激活Wnt/β-catenin信号通路,而促进热损伤皮肤细胞的增殖;4)抗体芯片检测表明,hAMSCs可能通过分泌包括PAI-1、G-CSF、Periostin及TIMP-1等在内的一系列细胞因子激活PI3K/AKT信号通路来促进皮肤烫伤的损伤修复。结论:1.hAMSCs具有增殖能力强、表达间充质干细胞及胚胎干细胞标志基因、不表达造血干细胞标志基因、免疫原性低、具有多向分化潜能、不致瘤等特征;2.hAMSCs及hAMSC-CM体内原位移植可通过旁分泌作用促进深Ⅱ度皮肤烫伤的损伤修复,其机制与hAMSCs及hAMSC-CM抑制热损伤皮肤细胞的凋亡及促进热损伤皮肤细胞的增殖有关;3.hAMSCs可分泌PAI-1、G-CSF、Periostin及TIMP-1等因子,通过旁分泌作用激活PI3K/AKT信号通路抑制热损伤皮肤细胞的凋亡,而PI3K/AKT信号通路的活化又进一步激活Wnt/β-catenin信号通路,继而促进热损伤皮肤细胞的增殖。
彭波[3]（2020）在《核酸适体在无创产前诊断应用中的研究》文中认为产前诊断是预防具有遗传缺陷胎儿出生的最有效手段。目前产前诊断的方法主要包括有创产前诊断（绒毛膜取样、羊膜穿刺取样和脐带穿刺取样）和无创产前诊断（超声波检查、血清筛查、外周血中游离的胎儿DNA/m RNA检查和外周血中的胎儿细胞检查）,其中,基于孕妇外周血中游离胎儿细胞的无创产前诊断技术更是备受关注。在孕妇妊娠期间,胎儿细胞可经血液循环进入孕妇外周血中,其中孕妇外周血中的胎儿有核红细胞,携带完整的胎儿遗传信息、具有特异性的细胞标志物以及有限的半衰期,被认为是最理想的无创产前诊断材料,但如何从孕妇外周血中高效捕获分离极其稀少的胎儿有核红细胞是其走向临床运用关键瓶颈。核酸适体是从寡核苷酸文库中,利用指数富集的配基系统进化技术（SELEX）,通过筛选得到的单链寡核苷酸（DNA或RNA）分子,通常小于100个核苷酸,能折叠成独特的三级结构,以高亲和力和特异性结合靶分子。核酸适体具有易于固定化修饰、热稳定性好的优点,相比较抗体在富集和捕获靶标分子时,具有较好的优势。本文以核酸适体作为有核红细胞的识别配体,以期实现高效捕获分离胎儿有核红细胞用于无创产前诊断。主要研究结果如下:（1）前期研究工作筛选获得的核酸适体TY7能够特异性识别红白血病细胞系HEL、造血干细胞诱导的有核红细胞以及脐带血中胎儿有核红细胞。流式与共聚焦结果均表明核酸适体TY7能够结合HEL和造血干细胞诱导的有核红细胞,其中结合红白血病细胞系HEL的解离常数为65.31±9.3n M。而且,即使是在极其复杂的临床脐带血体系中,核酸适体TY7依然可以特异性结合GPA+、CD71+的胎儿有核红细胞。（2）以核酸适体TY7为配体,可以实现对有核红细胞的捕获分离。一方面,修饰TY7的孔板在Binding buffer体系中能特异性捕获HEL细胞;另一方面,利用核酸适体TY7偶联磁珠的方法,在HEL和外周血单个核细胞（PBMC）混合体系中依然可以特异性捕获分离HEL,捕获效率达63.66%。最后运用于临床脐带血样本中胎儿有核红细胞的捕获分离,共聚焦结果发现分离的细胞中含有大量的Hoechst+、CD71+的有核细胞,但纯度较低。（3）考虑到核酸适体TY7运用于临床样本捕获分离有核红细胞存在的纯度较低问题。再次使用Cell-SELEX技术,以HEL为正筛细胞,THP-1为负筛细胞,以期筛选获取高特异性靶向有核红细胞,且更具临床运用潜力的核酸适体。经过22轮的筛选,对筛选产物进行高通量测序分析,并挑选候选序列进行二级结构的预测。流式和共聚焦结果表明,筛选获得的核酸适体NRBC-5对HEL具有较好的亲和力与特异性,解离常数为153±20.88 n M,其临床运用性能待进一步验证。以上研究结果表明核酸适体可以实现对有核红细胞的捕获分离,并可以应用于无创产前诊断,为推动核酸适体将孕妇外周血中的胎儿有核红细胞应用于无创产前诊断奠定了基础。
潘政军[4]（2019）在《Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究》文中研究指明研究目的:探讨抑制细胞调亡的B细胞淋巴瘤/白血病-xl基因（Bcl-xL）对人脐带血干细胞定向诱导分化的影响,观察Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞定向诱导分化以后修复兔关节软骨损伤的疗效。研究内容:（1）人脐带血干细胞的获取,分离培养、定向诱导分化成软骨细胞;（2）慢病毒编码的抑制细胞凋亡基因Bcl-xL转染人脐带血干细胞;（3）检测Bcl-xL基因过表达对干细胞凋亡的影响;（4）检测Bcl-xL基因过表达对干细胞分泌II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3和基质金属蛋白酶3等蛋白的影响;（5）制造兔膝关节软骨损伤模型;（6）海藻酸钠盐支架包被Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞,植入并修复兔软骨损伤;（7）检测植入的人脐带血干细胞是否能在异种动物体内存活;（8）HE、MASSON和改良蕃红O-固绿等染色方法观察软骨缺损的修复;（9）免疫组化、实时PCR、WB等方法检测Bcl-xL基因的表达对动物体内软骨细胞分泌II型胶原、半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3等蛋白影响。材料与方法:（1）在正常分娩过程中获得人脐带血,体外分离获取干细胞,贴壁培养。取P2代细胞用TGF-β1因子联合使用胰岛素样生长因-1和地塞米松诱导干细胞向软骨细胞方向分化,培养至细胞爬满玻片时,用甲苯胺蓝染色和免疫组化染色方法鉴定诱导分化的效果,并与对照组比较。（2）用编码Bcl-xL的慢病毒对人脐带血干细胞进行修饰,取第3代人脐带血干细胞接种于6孔板,当细胞融合达到5070%时,用编码Bcl-xL基因的慢病毒载体转染人脐带血干细胞。实验分四组进行,分别为对照组、诱导组、诱导+Bcl-xL慢病毒转染组、诱导+慢病毒空载组。对照组只分离培养干细胞,不加任何诱导因子;诱导组加入TGF-β1等诱导因子;诱导+Bcl-xL慢病毒转染组是在诱导组的基础上再加入编码Bcl-xL基因的慢病毒;空载组是在诱导组的基础上只加入未编码Bcl-xL基因的慢病毒。以上四组继续培养48h,在倒置显微镜下连续观察并记录细胞形态特征;甲苯胺蓝染色证实Bcl-xL基因转染后的干细胞仍具有软骨细胞的特征;通过流式细胞仪鉴定软骨细胞特征性的表面抗原如:CD90和CD105的表达。通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况,评价Bcl-xL基因对干细胞的凋亡的影响。实时PCR检测Bcl-xL基因在mRNA水平的表达;同时以β-actin为内参;Western blotting（WB）印迹法检测Bcl-xL基因在蛋白水平的表达;实时PCR及WB等方法检测Bcl-xL基因表达及其对II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3、基质金属蛋白酶3等蛋白表达的影响;SPSS17.0软件统计学分析比较各组间mRNA和蛋白水平表达的差异。（3）制备海藻酸钠支架,加入人脐带血干细胞形成细胞-支架复合物。将1.2%的海藻酸钠溶液滴入102m M氯化钙溶液在模具中凝固形成无细胞的海藻酸钠支架;将人脐带血干细胞加入1.2%的海藻酸钠溶液制成1×106/ml的单细胞悬液,滴入102m M氯化钙溶液在模具中凝固形成含人脐带血干细胞的海藻酸钠支架复合物。（4）制造兔软骨损伤模型,30只三个月大的日本大耳兔,分为5组,每组12只膝关节。麻醉后备皮,双侧后腿膝关节内侧切口进入膝关节,在股骨髁关节面用电钻造成一个直径4mm,深度约3mm柱状缺损,穿透软骨下骨,造成全层关节软骨损伤。按照5种不同的方式修复软骨缺损:假手术组（对照组）:只进行假手术,软骨无损伤;模型组:进行软骨损伤造模而未予其它治疗干预措施,然后直接缝合;空载体治疗组:慢病毒空载体转染人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域;干细胞治疗组:未经慢病毒转染的人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域。Bcl-xL基因修饰治疗组:Bcl-xL基因修饰慢病毒转染人脐带血干细胞,海藻酸钠包被后植入软骨损伤缺损区域。饲养8周后全部动物处死,获取膝关节标本。采用抗人细胞核特异性抗体鉴定植入软骨缺损处的干细胞在正常免疫功能的兔体内是否能存活;观察Bcl-xL基因修饰的人脐带血干细胞移植治疗关节软骨损伤的效果,用HE、MASSON、改良番红O-固绿等染色方法观察关节软骨损伤的修复效果,用免疫组化、实时PCR及WB等方法检测动物体内Bcl-xL基因的表达及其对II型胶原蛋白、半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3等蛋白表达的影响;用SPSS 17.0软件统计学分析比较各组间mRNA和蛋白水平表达的差异。结果:1、人脐带血中可成功分离出具有多向分化潜能的干细胞,并可体外培养、定向诱导分化软骨细胞;2、用编码Bcl-xL的慢病毒对人脐带血干细胞进行修饰,干细胞增殖分化后仍具有软骨细胞特征。干细胞内的Bcl-xL基因在mRNA和蛋白水平的表达均上调;Bcl-xL基因可抑制干细胞的调亡,Bcl-xL基因可促进软骨细胞II型胶原蛋白在mRNA和蛋白水平的表达,显着抑制半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的表达,组间分析具有统计学意义,P<0.05。3、海藻酸钠盐支架-干细胞复合体植入动物体内,检测到干细胞存活;病理染色显示,各组软骨损伤均有修复,3种染色方式均显示:Bcl-xL基因修饰的干细胞组软骨结构修复最满意,而模型组的修复相对最不满意;免疫组化染色、实时PCR和WB检测结果基本一致:软骨损伤促进了II型胶原纤维在mRNA和蛋白水平的表达,而Bcl-xL基因修饰进一步增加了II型胶原纤维的表达;对于半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的检测结果显示:与假手术组比较,模型组的半胱氨酸蛋白酶-3和基质金属蛋白酶3表达均明显上调（P<0.05）,而Bcl-xl基因修饰组人脐带血干细胞相对模型组明显下调。组间分析差异显着（P<0.05）。此外,与正常人脐带血干细胞相比,Bcl-xL修饰的干细胞可进一步降低软骨损伤诱导的半胱氨酸蛋白酶-3以及基质金属蛋白酶3的表达,提高II型胶原蛋白的表达。结论:1、人脐带血干细胞可定向诱导分化成软骨细胞,Bcl-xL基因修饰可降低干细胞凋亡。2、移植人脐带血干细胞有利于修复软骨损伤,而Bcl-xL修饰则能提高人脐带血干细胞移植修复软骨损伤的疗效。
马怡然,郝一文[5]（2019）在《AABB关于细胞治疗产品冷冻保存技术分析》文中提出人体细胞种类繁多,目前已广泛的应用于治疗多种疾病,因此将细胞治疗产品进行保存对于临床应用至关重要,脐带血的冷冻和保存就已经应用到临床。脐带血在一天中任何时间都可以进行收集,然后以液体状态运送到实验室进行处理以及冷冻。
姬晓彤[6]（2019）在《PM2.5吸入暴露诱导肺损伤及其分子机制》文中指出由于我国经济的高速发展以及城市化的加剧,发达国家所经历的不同工业发展阶段的大气污染问题在我国以压缩的方式同时集中显现。污染情况最为突出的便是近年来频发的雾霾事件,其强度高、持续时间长且涉及区域广。我国大气细颗粒物(PM2.5)来源与成因十分复杂,其毒性组分和毒理学机制尚不清楚,国外的研究模式与结果解析不能很好的适用于我国PM2.5的污染情况。因此,结合我国大气雾霾的特点,开展大气细颗粒物的健康危害与分子机制研究,将有助于理解我国雾霾对人群健康的危害,从而推动我国环境污染与健康研究的发展。为此本课题拟首先基于表观遗传调控探讨PM2.5与气态污染物SO2、NO2复合暴露对肺损伤的影响,在此基础上,针对PM2.5研究不同生命阶段小鼠对PM2.5的易感性,并针对易感性最强的小鼠探究PM2.5暴露后的恢复效应,最后,建立PM2.5孕期暴露模型,探讨PM2.5孕期暴露对子代小鼠肺发育的影响,综合评估大气污染诱发肺损伤的毒性效应及分子机制。1、大气污染物在慢性阻塞性肺疾病（COPD）的发生发展中起重要作用,且肺动脉高压（PH）是COPD常见的临床表征。然而,大量实验研究主要集中在单一污染物的健康危害效应而忽视了其复合污染的毒性效应。在本研究中,我们将C57BL/6小鼠随机分为三组:对照组（隔天吸入生理盐水,每天吸入洁净空气）,低浓度组(隔天吸入1 mg/kg体重PM2.5,每天动力学吸入0.5 mg/m3 SO2和0.2 mg/m3 NO2（6 h/d）)和高浓度组(隔天吸入3 mg/kg体重PM2.5,每天动力学吸入3.5 mg/m3 SO2和2 mg/m3NO2（6 h/d）)。4周暴露结束后,采用Anires2005系统检测子鼠肺功能（第0.1秒用力呼气肺活量（FEV0.1）/用力肺活量（FVC））,并通过苏木精-伊红（HE）染色以及透射电子显微镜（TEM）观察肺组织病理学以及超微改变。在此基础上,利用过免疫印迹技术检测肺动脉高压标志因子（内皮素-1（ET-1）和内皮一氧化氮合酶（eNOS））的表达。随后,利用microRNAs（miRNAs）芯片筛查以及实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术考察miRNA表达谱的变化,同时利用双荧光素酶报告基因考察差异miRNA对靶基因的调控。结果表明,PM2.5与SO2、NO2复合暴露能够引起小鼠呼吸道气流受限,组织病理学和超微结构改变,且能够改变ET-1和eNOS的表达,表明复合暴露能够引起小鼠肺动脉高压样损伤。miRNA基因芯片结果显示有三个人源的MicroRNA（miR-338-5p、miR-450b-3p和miR-142-5p）发生显着变化,且功能,增加了BALF中总细胞和巨噬细胞的数目,且增加了巨噬细胞中颗粒物负载。另外,这些变化在暴露结束1周后逐渐恢复到了正常水平。然而,肺泡中的颗粒物负载在恢复2周后仍然存在。PM2.5暴露4周显着改变了H3K27ac以及调控其表达的相关酶（组蛋白乙酰转移酶（HAT）和组蛋白去乙酰化酶（HDAC））的水平。同时,ChIP-seq结果表明PM2.5暴露诱导的与H3K27ac结合发生改变的基因主要参与了免疫系统过程、趋化因子信号通路,其中信号转导和转录激活因子2（Stat2）和乳腺癌抗雌激素耐药基因（Bcar1）是其中两个重要的基因。另外,PM2.5暴露4周显着影响了促炎因子以及趋化因子的表达,而这些改变在暴露2周后恢复到正常水平。综上所述,目前的研究表明PM2.5暴露4周后引起的肺功能下降和由组蛋白修饰介导的炎性因子上升可以在2周内恢复。然而,肺泡中持续性颗粒负载可能是肺部疾病的长期潜在风险。4、前期建立的多种颗粒物暴露模型已经证实了颗粒物本体暴露与呼吸系统损伤的相关性。然而,颗粒物污染对呼吸系统健康的影响起始于胎儿期,孕期PM2.5暴露能够增加子代后期罹患呼吸系统疾病的风险,且关于孕期PM2.5暴露与子代肺发育的相关性研究还鲜有报道。本研究的目的为考察孕期PM2.5暴露是否会引起子代支气管肺发育不良（BPD）的症状,如果是,这些不良影响能否随着后期的发育逐渐恢复。本研究建立了PM2.5孕期暴露模型,即将妊娠期小鼠从妊娠期第一天开始隔天通过鼻腔闭气经口法吸入PM2.5（3 mg/kg体重）直到妊娠结束。在胚胎期18.5天（E18.5）,取母鼠胎盘和肺组织,分析胎盘重金属含量以及母鼠肺组织和胎盘组织中的炎性因子表达。在子代小鼠出生后,分别在1、7、14、21天处死子鼠,取肺组织通过HE染色分析其肺泡化,通过免疫荧光染色、western blot以及RT-PCR分析肺血管发育,通过免疫组化、TEM以及RT-PCR考察分泌功能发育,同时通过RT-PCR考察肺组织炎性的表达。最后,通过Anires2005系统检测子鼠肺功能（FEV0.1、FVC）。结果表明,孕期PM2.5暴露能够造成胎盘中Pb和Mn的含量升高,并引起母鼠肺组织和胎盘组织炎性反应。另外,孕期PM2.5暴露引起子代小鼠典型的BPD症状,包括低肺泡化,血管生成减少,分泌蛋白和表面活性蛋白的表达受到抑制,以及炎性因子水平升高,且雄性子鼠比雌性子鼠更为敏感。然而,这些改变随着子鼠发育逐渐恢复到正常水平。本论文首先基于miRNA表观调控,探讨了PM2.5与气态污染物复合暴露诱导肺损伤的分子机制;在此基础上,针对PM2.5建立不同生命阶段暴露模型,阐明不同生命阶段肺损伤易感性;随后,针对易感性最明显的中老年小鼠建立PM2.5暴露与恢复模型,从组蛋白修饰角度研究PM2.5暴露诱导中老年小鼠肺损伤的恢复效应与机制;最后,基于成人疾病胎源说,建立PM2.5孕期暴露模型,阐明其对子代小鼠肺发育的影响,从根源上明确成年后期疾病易感性增加的原因。本研究建立了多种暴露模型,利用了多种表观遗传机制,多角度多维度地研究了大气污染对呼吸系统的损伤效应及分子机制,为我国环境污染与健康领域研究的发展提供了科学依据。
张嘉敏[7]（2019）在《新型免疫屏蔽Alg/PEI水凝胶材料的制备及其用于胰岛移植领域的研究》文中进行了进一步梳理细胞移植技术的出现为多种疑难杂症的治愈提供了新的治疗手段,为患者带了新的希望。但细胞移植后,机体免疫系统对移植物的免疫排斥反应严重限制了其治疗效果。因此,开发新型免疫屏蔽材料是解决这个问题的关键。基于材料表面生物粘附触发免疫排斥反应的理论,本文成功设计并开发了多种新型的免疫屏蔽水凝胶材料,并利用该水凝胶材料包埋胰岛用于糖尿病小鼠的长效血糖调控。阴离子聚电解质海藻酸钠（Alginate）可在室温/体温条件下与二价阳离子（如Ca2+或Ba2+）交联形成水凝胶,在细胞包埋领域具有广泛应用。但由于自身的免疫原性,海藻酸盐水凝胶在植入后会引起异物反应（FBR）。受具有优异抗生物粘附性质的两性离子材料启发,本文首次发现二价阳离子的用量会显着影响水凝胶的电性,进而影响表面生物粘附行为。与两性离子材料一样,当水凝胶整体电荷接近中性时（Ca2+浓度0.54mM或Ba2+浓度0.9mM）,能克服其与生物分子的静电作用力和疏水作用力,从而防止蛋白、细胞、细菌等在其表面的粘附,且在小鼠皮下植入模型中也能减弱FBR。基于此发现,本文进一步利用聚阳离子电解质调控海藻酸钙凝胶电荷,开发出一种具有抗生物粘附性质的海藻酸钠-聚乙烯亚胺（Alg/PEI）聚电解质水凝胶。结果表明,在两种高分子质量比为1:0.045时,该水凝胶净电荷约为0,展现了优异的抗蛋白质、细胞、细菌的粘附的功能。植入到小鼠皮下能够避免FBR,植入3个月后仍没有明显的纤维包封囊形成。然后,本文使用此电荷均衡、具有免疫屏蔽能力的Alg/PEI水凝胶材料包埋400个胰岛用于糖尿病小鼠同种胰岛移植治疗。结果表明,包埋的胰岛在水凝胶中能够维持活性和正常的胰岛素分泌功能。而且,在移植到糖尿病小鼠腹腔后,能够成功实现对糖尿病小鼠血糖的快速（2天）、稳定,长期（>150天）的调控,与传统的海藻酸钙水凝胶相比,也具有显着的优势。最后,本文进一步的制备了 一种具有促血管化功能的免疫屏蔽HEP-Alg/PEI水凝胶微球,并包埋1000个大鼠胰岛后用于糖尿病小鼠异种移植治疗。结果表明,负载2%肝素的HEP-Alg/PEI微球能够在移植到皮下后,促进皮下血管生成,且不引起免疫排斥反应,并实现对糖尿病小鼠血糖稳定调控>180天。综上,本文针对机体对细胞移植物的免疫排斥问题,开发出具有抗生物粘附免疫屏蔽功能的水凝胶,并成功用于胰岛移植对糖尿病小鼠血糖调控,为新型免疫屏蔽材料的开发及其它种类细胞移植治疗带来了新的策略和方向。
林苏滨[8]（2019）在《生物复合物滑膜化修饰联合脱细胞化肌腱支架再生构建组织工程肌腱的研究》文中认为研究背景及目的手部肌腱损伤和手外伤在日常生活中尤为常见,不仅影响患者生理和心理健康,同时也极其严重地影响了患者的工作能力,造成了个人和社会巨大的经济损失。指屈肌腱损伤后的临床标准流程是立刻进行修复手术,并早期恢复患指活动以防止术后黏连。但由于常合并多发伤,无法早期进行康复训练,导致与周围组织粘连严重,严重影响手部功能;或肌腱损伤较为严重,缺损部分较大,无法进行一期修复手术等,均是肌腱移植术的适应症。然而,自体移植物由于来源有限并且会造成移植物供区缺损,术后引起疼痛等并发症,临床应用受到极大的限制。而异种移植物又存在突出的伦理问题,病人接受程度较低,使得同种异体移植物有可能作为替代策略。但其术后可能会引起的免疫排斥反应不可忽视。因此,构建一种适合于指深屈肌腱损伤后的移植物迫在眉睫。随着组织工程学的不断发展,虽然目前许多人造肌腱材料逐渐衍生出来,比如聚乳酸、蚕丝和胶原蛋白等,但由于细胞外基质（ECM）的复杂组成及其特殊的生物力学特性,仍没有开发出可以取代天然肌腱的合成材料。指深屈肌腱属于滑膜内肌腱,与滑膜外肌腱相比,其表面光滑,覆盖一层薄粘多糖物质,主要成分为透明质酸（HA）和润滑素,可有效润滑。因此,如何模拟指深屈肌腱生理微环境,构建一种适应移植后长期修复,且结构功能更为优化的组织工程支架,进一步减少磨损,提高修复功能并减少排异,尚有待解决。另外,作为指深屈肌腱重要组分的肌腱细胞,对其功能和结构的完整性有着不可替代的作用,但也是解决移植物排异问题的关键所在。我们的前期研究证实,成功脱细胞后的移植物虽然排异发生率明显减少,但其内部结构和后期修复功能都受到影响,特别是受力特性发生改变。因此,如何对脱细胞化的组织工程学支架进行再细胞,如何选择合适的种子细胞以取代肌腱细胞的功能,如何进一步实现其结构重塑,是目前仍需要突破的重要难关。本课题目的是构建一种适合体内指深屈肌腱损伤修复的异体滑膜内肌腱组织工程学支架,利用脱细胞化技术减少其排异可能,并通过种子细胞的选取、种植、诱导等对其进行进行活化,验证异体脱细胞化滑膜内肌腱支架微环境对种子细胞的作用。同时,构建一种来源于自体关节液的滑膜化表面修饰物质,观察其改善脱细胞化滑膜内肌腱支架的表面滑动阻力作用。并通过模拟体内力学环境,进一步探讨移植后支架结构重塑的作用及机制。研究方法1.脱细胞化异体滑膜内肌腱组织工程学支架的构建（1）动物实验:12月龄实验犬经麻醉、消毒、手术获取双侧前爪指深屈肌腱,利用滑动阻力测量仪对指深屈肌腱Zone II区域与A2滑车韧带之间的界面的滑动摩擦力进行直接测量,并采用HE染色观察其组织结构,评价此异体滑膜内肌腱用作组织工程学支架构建的结构功能特性。进一步使用物理性深低温脱细胞法,构建脱细胞化滑膜内肌腱支架。（2）种子细胞获取:使用密度梯度离心法分离获取自体骨髓间充质干细胞,鉴定表面标志物,并在诱导条件下鉴定其多向分化能力;通过尿素提取法,获取脱细胞化肌腱支架的细胞外基质微环境,观察对种子细胞的增殖和成腱分化的作用。2.脱细胞化异体滑膜内肌腱支架结构重塑及功能优化的作用和机制研究（1）脱细胞化异体滑膜内肌腱支架的表面修饰:实验犬双侧膝关节抽取关节液,并进行碳化二亚胺衍生物交联反应,制备含有生物表面修饰活性的自体关节液,对脱细胞化异体滑膜内肌腱支架进行表面修饰。（2）支架结构重塑的作用及机制:采用机械打孔技术种植种子细胞,并给予生物反应器循环机械牵拉三维培养,通过HE染色观察再细胞化支架的结构重塑;利用PCR技术检测种子细胞间缝隙连接GJA1、肌腱组分胶原蛋白COLI及胶原重塑相关基因MMP-9的表达变化;并给予GJA1特异性阻断剂进一步验证其对支架结构重塑的作用机制。3.组织工程学滑膜内肌腱支架在指深屈肌腱重建中的应用（1）指深屈肌腱二次断裂模型建立:实验犬术肢第二指远端指间关节处切断指深屈肌腱,并在远端断端处切除3mm肌腱以增加肌腱修复的张力,行改良Kessler技术进行肌腱缝合,定期监测修复断端间距。（2）异体滑膜内肌腱支架对肌腱损伤修复的作用:分别移植自体滑膜外肌腱及异体支架,并比较给予种子细胞再细胞化处理及表面修复的异体支架,与自体滑膜外肌腱对指深屈肌腱损伤修复的作用,采用力学测试评判移植修复效果,采用组织切片染色比较生物相容性。研究结果1.脱细胞化异体滑膜内肌腱组织工程学支架的构建（1）选取指深屈肌腱作为滑膜内肌腱支架的主体结构来源,所得肌腱样品的组织学特点、表面滑动阻力特性和结构组分均符合滑膜内肌腱支架的要求。（2）所得滑膜内肌腱支架脱细胞化效果良好,但表面滑动性能有所损害。所得骨髓间充质干细胞可稳定增殖,具有良好的分化全能性。脱细胞化肌腱支架的基质微环境有利于种子细胞的增殖和成腱分化。2.脱细胞化异体滑膜内肌腱支架结构重塑及功能优化的作用和机制研究（1）经过碳化二亚胺衍生物交联反应的自体关节液,对脱细胞化异体滑膜内肌腱支架进行表面修饰后,滑动阻力显着降低。（2）通过生物反应器仿生三维培养的肌腱支架复合物,在循环轴向力学牵拉的刺激下,支架内部纤维结构排列更为紧致,排列方向与牵拉应力的方向高度一致。同时,种子细胞可以更好地在支架内部进行迁徙,以及成腱相关基因更高效地表达,并且证实力学牵拉刺激改变支架内种子细胞间的连接间隙相关基因GJA1,进一步调控胶原重塑相关基因MMP-9的表达,促进细胞外基质内胶原蛋白组分的合成与降解,促进支架组织结构重塑。3.组织工程学滑膜内肌腱支架在指深屈肌腱重建中的应用生物复合物滑膜化修饰且复合种子细胞再植的脱细胞化滑膜内肌腱支架用于指深屈肌腱重建术后效果与自体滑膜外肌腱移植物相比,其与周围组织的粘连较少,表面滑动阻力较低,重建后的关节活动度较好,与宿主天然肌腱的生物相容性好,但是在与宿主的骨端连接仍有待改善。结论本研究通过异体指深屈肌腱,成功构建了同种异体滑膜内肌腱支架。采用物理性深低温技术进行脱细胞化处理,通过自体骨髓间充质干细胞获得种了细胞,经机械打孔对其进行再细胞化,并进一步采用表面修饰及循环机械牵拉成功完成结构重塑及功能优化。并通过生物反应器三维培养及GJAl特异性阻断剂,阐明了种子细胞间缝隙连接对MMP-9的反馈调控机制。进一步在动物体内验证了生物复合物滑膜化修饰且复合种子细胞再植的脱细胞化滑膜内肌腱支架应用于肌腱重建术的疗效。为临床肌腱损伤提供了新的治疗策略。
郑武燕[9]（2019）在《环黄芪醇联合IL-7和IL-15对人脐带血T细胞体外扩增影响的实验研究》文中指出目的:随着现代医学的不断进步与发展,临床癌症治疗从传统的手术治疗和放化疗,发展到现今的生物治疗。后者包括生物大分子靶向药物治疗与免疫细胞治疗,如工程化T细胞受体T细胞（T cell receptor engineered-T cell,TCR-T）治疗和工程化嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor engineered T-cell,CAR-T）治疗等免疫细胞治疗。免疫细胞治疗因其瞩目的临床试验疗效被认为是最有希望攻克癌症的治疗方式。这些细胞治疗都是体外对T细胞进行基因改造,以提高T细胞的抗原识别和杀伤能力。回输的T细胞数量、活力及亚群比例对于细胞治疗疗效密切相关。因此,探索T细胞体外分离、激活与扩增的方式是细胞免疫治疗的关键。环黄芪醇（cycloastragenol,CAG）是中药黄芪的主要皂苷成分,被认为具有免疫调节、抗炎、抗氧化的作用,是中药提取化合物中现今唯一发现的端粒酶激活剂。本实验利用不同浓度的CAG联合细胞因子诱导培养脐带血来源T细胞,利用多色流式细胞技术检测T细胞的增殖倍数和细胞表型的变化,以观察不同浓度的CAG对脐带血来源的T细胞扩增的影响,为以T细胞为基础的细胞免疫疗法提供新的培养方案,奠定实验基础。研究方法:1.理论研究:通过文献查阅和梳理,探讨T细胞免疫学特性及T细胞在免疫细胞治疗中的研究进展,从环黄芪醇的现代药理研究为基础,探究环黄芪醇在体外对T细胞扩增和细胞表型的影响。2.实验研究:2.1 T细胞体外培养条件摸索:以CD3/CD28抗体偶联磁珠与T细胞比例分别为1:2、1:1、2:1、3:1的磁珠分别活化来源于外周血或脐带血的T细胞,利用含5ng/ml IL-7和5ng/ml IL-15的RPMI 1640完全培养基连续培养T细胞7天。利用多色流式技术检测T细胞扩增和细胞表型变化情况,统计分析得出最佳的外周血和脐带血来源的T细胞活化条件。以CD3/CD28抗体偶联磁珠与T细胞比例为1:1的磁珠分别活化来来源于外周血或脐带血的T细胞,分别置于IL-2（50 IU/ml）、IL-7（5 ng/ml）、IL-15（5 ng/ml）、IL-7（5 ng/ml）和IL-15（5 ng/ml）联用组的RPMI 1640完全培养基连续培养7天。利用多色流式技术检测T细胞扩增和细胞表型变化情况,统计分析得出最佳的外周血和脐带血来源的T细胞培养细胞因子条件。以相同冻存体积1ml,不同T细胞冻存密度（1E7/ml、2E6/ml、5E5/ml）分别冻存外周血和脐带血来源的T细胞,统计分析得出T细胞的最佳冻存密度。以相同冻存密度2E6/ml,不同T细胞冻存体积（1ml、0.5ml、0.2ml）分别冻存外周血和脐带血来源的T细胞,统计分析得出T细胞的最佳冻存体积。2.2不同浓度CAG联合细胞因子体外扩增脐带血来源T细胞:脐带血来源T细胞在CD3/CD28抗体偶联磁珠与CD3+T细胞比例为3:1、RPMI 1640完全培养基（含5ng/ml IL-7和5ng/ml IL-15）的培养条件下,以0、0.04、0.2、1、5μM不同浓度CAG联合IL-7和IL-15为实验组,和DMSO对照组连续培养T细胞11天,利用多色流式技术检测T细胞扩增和细胞表型变化情况,用GraphPad Prism 6.0进行数据统计分析。结果:2.1 T细胞体外培养条件摸索结果:来源不同的T细胞最佳的活化条件不同,外周血来源的T细胞经磁珠比1:2的磁珠活化后,连续培养7天的T细胞累积增殖倍数最高,提示外周血来源T细胞的最佳磁珠/细胞活化比例为1:2;脐带血来源的T细胞经磁珠比3:1的磁珠活化后,连续培养7天的T细胞累积增殖倍数最高,提示脐带血来源T细胞的最佳磁珠/细胞活化比例为3:1。不同细胞因子培养T细胞的实验中,外周血和脐带血来源的T细胞利用细胞因子IL-7和IL-15联用连续培养T细胞7天,不仅可以促进T细胞增殖,又可以保持较高的TSCM细胞亚群,优于其他细胞因子的培养条件。T细胞冻存条件实验:外周血来源的T细胞的最佳冻存密度为1E7/ml,最佳细胞冻存体积为1ml。脐带血来源的T细胞的最佳冻存密度为1E7/ml,最佳细胞冻存体积为0.5ml。2.2不同浓度CAG联合细胞因子体外扩增脐带血来源T细胞结果:利用磁珠比例3:1活化脐带血来源的T细胞后,浓度为0.2、1μM的CAG与细胞因子IL-7和IL-15联用组促T细胞扩增作用显着高于单独使用细胞因子IL-7和IL-15联用组,且可以促进CD8+T中TSCM的CD197+CD45RA+细胞表型的表达,即维持CD8+T中高比例的TSCM亚群。5μM CAG组与DMSO对照组相比差异不显着,提示高浓度CAG并无促T细胞增殖作用。结论:低浓度CAG联合IL-7和IL-15可以显着提高IL-7和IL-15联合培养的T细胞扩增活性,并能保持CD8+T细胞中高比例的TSCM亚群。
葛俊男[10]（2019）在《脐带血造血干细胞的分离与贮藏工艺过程研究》文中指出造血干细胞（hemopoietic stem cell,HSC）在组织内并不是固定的细胞成员,而是作为一群原始的造血细胞被造血组织所包含,同时也能在造血组织及血液中生存。在生长到第二周的人类胚胎的卵黄囊内,造血干细胞就出现了,当人类胚胎发育到第四周的时候,造血干细胞开始在胎肝中出现。当孕妇怀孕达到五个月时,幼体骨髓中的造血功能开始运转,在人类出生后,骨髓就成为了造血干细胞存在的主要场所和主要来源地。根据造血干细胞来源地不同可将造血干细胞移植分为骨髓造血干细胞移植,脐血造血干细胞移植和外周血造血干细胞移植三个组别。没有供者限制这一点就是使用自体脐带血造血干细胞移植的最大优点,并且在移植过后,发生移植物抗宿主病的几率非常小,免疫抑制剂的使用量也大幅减少,几乎没有出现严重并发症,并且费用较低,因此很多用户都选择去储存自体脐带血。本文主要通过实验来研究造血干细胞在提取储存过程中的各种影响因素。第一部分研究了脐带血采集量和分离到的单个核细胞数之间的关系。通过6%羟乙基淀粉密度梯度离心法分离单个核细胞（MNC）,统计结果显示,脐带血采集量与分离收集的MNC数量之间线性相关,r=0.985,P<0.0001。因此,在不对母婴造成影响的前提下,尽量多的采集脐带血可以增加收集分离的有MNC数量,进而满足移植的需要。第二部分主要研究脐带血不同分离方法对造血干细胞分离效果的影响,本部分首先分析了Ficoll分层法、6%羟乙基淀粉密度梯度离心法和6%羟乙基淀粉自然沉降法三种方法分离脐带血造血干细胞的效果,结果显示,6%羟乙基淀粉密度梯度离心法分离得到的MNC数量最多,6%羟乙基淀粉自然沉降法次之,Ficoll分层法最低。对分离得到的MNC进行半固体琼脂培养,统计的CFU-GM集落数据显示6%羟乙基淀粉密度梯度离心法要明显高于其它两种方法。同时,本部分还对获得的MNC中细胞表型进行对比,与其他两种方法相比,6%羟乙基淀粉密度梯度离心法会分离得到更多的CD3+、CD14+和CD34+细胞。综合上述实验结果可知,6%羟乙基淀粉密度梯度离心法是相对理想的脐带血造血干细胞分离方法。根据文献报道,多种因素会对6%羟乙基淀粉密度梯度离心法的分离效果造成影响。本研究利用响应面法对离心温度,离心力,离心时间三个影响因素进行了分析优化,最终得到在离心温度15℃、离心力1000g及离心时间17.8min时分离效果最佳,此时分离的细胞活力可达到95.7%。第三部分主要研究不同的冻存方法对造血干细胞冻存质量的影响。脐带血造血干细胞低温保存是脐带血库建设和临床移植成功的前提条件。目前,慢速分步冷却法是脐带血干细胞保存的主流方法。在该方法中,降温过程不同对复苏后细胞活力影响很大。本研究选取降温速率,降温时间及降温的终点温度作为三因素探究最佳的降温过程,响应面法结果显示,在降温速率为1.5℃/min、降温时间40h、降温终点温度为-80℃条件下,细胞复苏后活力可达到98.7%。由于快速降温,不产生冰晶和对细胞损伤小,玻璃化法在脐带血造血干细胞的长期保存方面展现出良好的应用前景。本论文对玻璃化法进行了初步的研究。根据文献报道,抗冻剂的种类和添加量,抗冻剂滴加速度以及滴加时的温度都会对玻璃化法冻存的细胞活性产生影响。本实验对抗冻剂人血清白蛋白添加浓度,滴加速度和滴加温度进行了优化,结果显示,在人血清白蛋白终浓度为17.1%、滴加温度为-8.32℃、滴加速度为2.84%/min条件下进行造血干细胞玻璃化冻存,最终细胞复苏活力为99.1%。
二、人体脐带血冷冻后仍新鲜（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人体脐带血冷冻后仍新鲜（论文提纲范文）
（1）济南市居民通过膳食摄入短、中链氯化石蜡的健康风险评估（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 氯化石蜡(CPs)的基本特征和应用 |
| 1.1.1 物理化学性质 |
| 1.1.2 生产应用 |
| 1.1.3 CPs的排放 |
| 1.1.4 CPs相关法律法规 |
| 1.2 CPs的POPs相关性质 |
| 1.2.1 持久性 |
| 1.2.2 远距离迁移性 |
| 1.2.3 生物富集性 |
| 1.2.4 生物毒性 |
| 1.3 CPs的国内外研究进展 |
| 1.3.1 不同地区CPs的含量 |
| 1.3.2 非饮食暴露研究 |
| 1.3.3 CPs的饮食摄入情况 |
| 1.3.4 CPs的人体负荷情况 |
| 1.3.5 监测方法概述 |
| 1.4 研究的主要内容 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 实验试剂与仪器 |
| 2.3 前处理操作 |
| 2.4 仪器条件与定量方法 |
| 2.5 质量保证与控制 |
| 2.6 数据处理 |
| 第三章 膳食中SCCPs与MCCPs的检测结果 |
| 3.1 食品中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.1 肉类与肉制品中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.2 水产品中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.3 蛋类食品中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.4 乳制品中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.5 豆制品中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.6 食用油中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.7 主食中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.8 水果类食品中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.9 蔬菜类食品中SCCPs、MCCPs的含量 |
| 3.1.10 食品中SCCPs、MCCPs的统计分析 |
| 3.2 食品中SCCPs、MCCPs的同族体分布特征 |
| 第四章 膳食暴露评估 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 发表论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（2）人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）对小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩写一览表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 hAMSCs分离、培养及鉴定 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.1 实验小鼠及羊膜组织 |
| 2.1.2 试剂耗材 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞复苏、培养、传代及冻存 |
| 2.2.2 hAMSCs的分离及培养 |
| 2.2.3 hAMSCs的鉴定 |
| 2.2.3.1 RT-PCR检测hAMSCs标志基因表达 |
| 2.2.3.2 流式细胞术检测hAMSCs标志分子 |
| 2.2.3.3 免疫荧光检测hAMSCs表面标志蛋白 |
| 2.2.3.4 hAMSCs成骨成脂分化 |
| 2.2.3.5 hAMSCs体内及体外致瘤性检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 hAMSCs的分离、培养与鉴定 |
| 2.4.2 hAMSCs体内及体外均无致瘤性 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 干细胞及其分类 |
| 2.5.2 羊膜间充质干细胞 |
| 第3章 hAMSCs及hAMSC-CM促进小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的损伤修复 |
| 3.1 实验材料与试剂 |
| 3.1.1 实验小鼠 |
| 3.1.2 实验细胞 |
| 3.1.3 试剂耗材 |
| 3.1.4 试剂配制 |
| 3.1.5 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 hAMSCs条件培养基的提取及浓缩 |
| 3.2.2 C57BL/6J小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤模型的构建 |
| 3.2.3 PKH26标志hAMSCs |
| 3.2.4 hAMSCs及hAMSC-CM对小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗 |
| 3.2.5 皮肤伤口愈合率计算及小动物活体成像 |
| 3.2.6 皮肤组织切片的制作 |
| 3.2.7 组织免疫荧光染色(IF) |
| 3.2.8 HE染色 |
| 3.2.9 皮肤组织细胞凋亡染色(TUNEL法) |
| 3.2.10 免疫组织化学染色 |
| 3.2.11 Western blot免疫印迹检测 |
| 3.2.11.1 蛋白提取与分离 |
| 3.2.11.2 蛋白浓度测定(BCA法) |
| 3.2.11.3 SDS-PAGE 电泳 |
| 3.2.12 管形成实验 |
| 3.3 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 皮肤深Ⅱ度烫伤模型的构建 |
| 3.4.2 hAMSCs及hAMSC-CM体内移植促进深Ⅱ度皮肤烫伤的创面愈合 |
| 3.4.3 hAMSCs在深Ⅱ度皮肤烫伤小鼠体内存活、迁移及分化 |
| 3.4.4 hAMSCs及hAMSC-CM促进热损伤皮肤组织再生 |
| 3.4.5 hAMSCs及hAMSC-CM抑制热损伤皮肤细胞凋亡并促进其增殖 |
| 3.4.6 hAMSCs及hAMSC-CM促进热损伤皮肤组织血管再生 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 皮肤组织概述 |
| 3.5.2 皮肤烧伤及其分类 |
| 3.5.3 皮肤的损伤修复 |
| 3.5.4 MSCs治疗皮肤损伤的潜能及机制 |
| 3.5.4.1 MSCs分化为皮肤细胞和内皮细胞 |
| 3.5.4.2 MSCs抑制皮肤细胞凋亡、促进皮肤细胞增殖及迁移 |
| 3.5.4.3 MSCs促进皮肤组织血管再生 |
| 3.5.4.4 MSCs抑制损伤皮肤组织炎症 |
| 第4章 hAMSCs及hAMSC-CM促进热损伤皮肤细胞损伤修复的分子机制 |
| 4.1 实验材料与试剂 |
| 4.1.1 实验皮肤组织 |
| 4.1.2 实验细胞 |
| 4.1.3 主要耗材及试剂 |
| 4.1.4 试剂配制 |
| 4.1.5 主要仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 DFL的分离与培养 |
| 4.2.2 HaCAT及DFL细胞热损伤模型的构建 |
| 4.2.3 实验分组及体外共培养体系的构建 |
| 4.2.4 Annexin V-FITC/PI流式细胞凋亡检测 |
| 4.2.5 CCK8检测细胞增殖 |
| 4.2.6 划痕实验 |
| 4.2.7 抗体芯片检测 |
| 4.3 统计学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 HaCAT及DFL细胞的分离、培养及传代 |
| 4.4.2 HaCAT及DFL细胞体外热损伤模型的构建 |
| 4.4.3 hAMSCs及hAMSC-CM抑制热损伤皮肤细胞凋亡 |
| 4.4.4 hAMSCs、hAMSC-CM促进热损伤皮肤细胞增殖 |
| 4.4.5 hAMSCs、hAMSC-CM促进热损伤皮肤迁移 |
| 4.4.6 hAMSCs及hAMSC-CM激活热损伤皮肤细胞中PI3K/AKT及Wnt/β-catenin信号通路 |
| 4.4.7 hAMSCs通过活化PI3K/AKT信号通路抑制热损伤皮肤细胞凋亡 |
| 4.4.8 hAMSCs通过活化PI3K/AKT-Wnt/β-catenin信号通路促进热损伤皮肤细胞增殖 |
| 4.4.9 抗体芯片筛选hAMSCs旁分泌作用中活化AKT的关键因子 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 表皮角质细胞、真皮成纤维细胞与皮肤损伤修复 |
| 4.5.2 PI3K/AKT信号通路与皮肤细胞凋亡 |
| 4.5.3 Wnt/β-catenin信号通路与皮肤细胞增殖 |
| 4.5.4 hAMSCs旁分泌作用中活化PI3K/AKT信号的关键因子筛选 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 工作总结示意图 |
| 5.3 进一步工作的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（3）核酸适体在无创产前诊断应用中的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中文缩写对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 产前诊断概述 |
| 1.1.1 有创产前诊断 |
| 1.1.2 无创产前诊断 |
| 1.2 孕妇外周血中的胎儿细胞 |
| 1.2.1 概述 |
| 1.2.2 胎儿有核红细胞 |
| 1.3 核酸适体与SELEX |
| 1.3.1 核酸适体 |
| 1.3.2 SELEX |
| 1.3.3 cell-SELEX |
| 1.3.4 核酸适体在生物医学诊断中的应用 |
| 1.4 本论文拟开展的工作 |
| 第2章 核酸适体结合有核红细胞的考察 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验中用到的试剂、核酸适体序列、细胞系及仪器 |
| 2.2.2 试剂的配制 |
| 2.2.3 细胞的传代、冻存及复苏 |
| 2.2.4 HEL结合TY7的实验 |
| 2.2.5 流式细胞术测定TY7对HEL的亲和力 |
| 2.2.6 造血干细胞诱导的有核红细胞结合TY7的实验 |
| 2.2.7 脐带血中有核红细胞结合TY7的实验 |
| 2.2.8 正常外周血中PBMC结合TY7 的实验 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 TY7结合HEL的分析 |
| 2.3.2 TY7与HEL的解离常数测定 |
| 2.3.3 TY7结合造血干细胞诱导的有核红细胞的分析 |
| 2.3.4 TY7结合脐带血中有核红细胞的分析 |
| 2.3.5 TY7 不结合正常外周血中PBMC的分析 |
| 2.4 实验小结 |
| 第3章 基于核酸适体捕获有核红细胞的探索 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验中用到的试剂与仪器 |
| 3.2.2 TY7修饰孔板捕获HEL实验 |
| 3.2.3 TY7偶联磁珠捕获HEL的实验 |
| 3.2.4 TY7偶联磁珠捕获脐带血中的有核红细胞的实验 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 TY7修饰孔板捕获HEL细胞 |
| 3.3.2 TY7偶联磁珠捕获HEL的分析 |
| 3.3.3 TY7偶联磁珠捕获脐带血中的有核红细胞的分析 |
| 3.4 实验小结 |
| 第4章 有核红细胞核酸适体的筛选与性质的初步考察 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验中所用细胞系、仪器与试剂 |
| 4.2.2 细胞培养 |
| 4.2.3 ssDNA文库、引物的设计 |
| 4.2.4 细胞筛选过程 |
| 4.2.5 筛选进化过程中信号富集的考察 |
| 4.2.6 高通量测序 |
| 4.2.7 流式细胞术考察候选链对HEL的结合特异性 |
| 4.2.8 共聚焦考察NRBC-5对HEL的结合 |
| 4.2.9 流式细胞术考察NRBC-5与HEL的解离常数 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 筛选过程中优化循环数 |
| 4.3.2 筛选过程中富集信号的检测 |
| 4.3.3 测序结果分析 |
| 4.3.4 候选核酸适体对HEL的结合能力分析 |
| 4.3.5 NRBC-5与HEL的结合解离常数 |
| 4.3.6 NRBC-5与HEL的共聚焦结合分析 |
| 4.4 实验小结 |
| 结论与展望 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（4）Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 人脐带干细胞定向诱导分化软骨细胞的实验研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 3 方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 第二部分 过表达Bcl-x L基因慢病毒载体对人脐带血干细胞的调控机理研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 海藻酸钠支架负载人脐带血干细胞复合物移植治疗兔关节软骨损伤 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在学期间发表的论文与成果 |
| 致谢 |
| 综述一 Bcl-x L 基因的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 干细胞定向诱导分化成软骨细胞的研究进展 |
| 参考文献 |
（5）AABB关于细胞治疗产品冷冻保存技术分析（论文提纲范文）
| 1 冷冻保存过程 |
| 2 冷冻保存过程要素介绍 |
| 2.1 冷冻前处理 |
| 2.2 冷冻保存液的组成与介绍 |
| 2.3 降温速率 |
| 2.4 储存 |
| 2.5 复温 |
| 2.6 复苏后评估 |
| 3 总结 |
（6）PM2.5吸入暴露诱导肺损伤及其分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 大气污染的现状及健康危害 |
| 1.1.1 大气污染的现状 |
| 1.1.2 大气污染的健康危害 |
| 1.2 PM_(2.5) 的污染现状以及呼吸系统健康效应 |
| 1.2.1 PM_(2.5) 污染现状以及健康危害 |
| 1.2.2 PM_(2.5)对COPD的影响 |
| 1.2.3 PM_(2.5) 对哮喘的影响 |
| 1.2.4 PM_(2.5) 对肺癌的影响 |
| 1.3 PM_(2.5) 诱导呼吸系统疾病的分子机制 |
| 1.3.1 炎性机制 |
| 1.3.2 氧化应激 |
| 1.3.3 表观遗传机制 |
| 1.3.3.1 DNA甲基化修饰 |
| 1.3.3.2 非编码RNA调控 |
| 1.3.3.3 组蛋白修饰 |
| 1.4 孕期PM_(2.5) 暴露对子代呼吸系统的影响 |
| 1.4.1 PM_(2.5) 的跨胎盘效应 |
| 1.4.2 孕期PM_(2.5) 暴露与胎儿发育 |
| 1.4.3 PM_(2.5) 孕期暴露与子代呼吸系统发育 |
| 1.5 本研究课题的提出及科学意义 |
| 第二章 PM_(2.5)与SO_2、NO_2 复合暴露诱导小鼠肺动脉高压样损伤的分子机制 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 2.2.2 PM_(2.5) 样品的收集 |
| 2.2.3 实验动物的处理方法 |
| 2.2.4 miRNA芯片分析 |
| 2.2.5 生物信息学分析 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR分析(RT-PCR) |
| 2.2.7 免疫印迹分析(Western blot) |
| 2.2.8 双荧光素酶报告基因分析 |
| 2.2.9 苏木精–伊红(HE)染色及透射电镜(TEM)观察 |
| 2.2.10 肺功能检测 |
| 2.2.11 数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 PM_(2.5)和SO_2、NO_2 复合暴露引起气道气流受限 |
| 2.3.2 PM_(2.5)和SO_2、NO_2 复合暴露导致肺动脉高压样损伤 |
| 2.3.3 PM_(2.5)和SO_2、NO_2 复合暴露对小鼠肺组织miRNAs表达的影响.. |
| 2.3.4 miR-338-5p在 PM_(2.5)和SO_2、NO_2 复合暴露诱导肺动脉高压的调控机制 |
| 2.4 讨论与结论 |
| 第三章 PM_(2.5) 暴露对不同生命阶段小鼠肺损伤的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 3.2.2 PM_(2.5) 样品收集 |
| 3.2.3 动物处理方法 |
| 3.2.4 肺功能检测 |
| 3.2.5 HE染色 |
| 3.2.6 ROS水平检测 |
| 3.2.7 抗氧化酶SOD和 GSH-Px活力检测 |
| 3.2.8 RT-PCR分析 |
| 3.2.9 数据统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 PM_(2.5) 的特征 |
| 3.3.2 PM_(2.5) 暴露对不同生命阶段小鼠肺功能的影响 |
| 3.3.3 PM_(2.5) 暴露对不同生命阶段小鼠肺组织病理学结构的影响 |
| 3.3.4 PM_(2.5) 暴露对不同生命阶段小鼠肺部氧化应激效应的影响 |
| 3.3.5 PM_(2.5) 暴露对不同生命阶段小鼠肺部炎性反应的影响 |
| 3.4 讨论与结论 |
| 第四章 组蛋白修饰在PM_(2.5) 暴露诱导肺损伤及恢复过程中的调控机制 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 4.2.2 PM_(2.5) 样品收集 |
| 4.2.3 动物处理 |
| 4.2.4 染色质免疫共沉淀分析(ChIP) |
| 4.2.5 ChIP-测序(ChIP-seq)分析 |
| 4.2.6 肺功能检测 |
| 4.2.7 ELISA分析 |
| 4.2.8 支气管肺泡灌洗液(BALF)和细胞分类计数 |
| 4.2.9 RT-PCR分析 |
| 4.2.10 核蛋白提取和Western blot分析 |
| 4.2.11 数据统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 PM_(2.5) 暴露对小鼠肺功能的不良影响及恢复效应 |
| 4.3.2 PM_(2.5) 暴露对BALF细胞学的不良影响及恢复效应 |
| 4.3.3 PM_(2.5) 暴露对组蛋白修饰的不良影响及恢复效应 |
| 4.3.4 PM_(2.5) 暴露对H3K27ac相关肺部炎症的不良影响以及恢复作用 |
| 4.4 讨论与结论 |
| 第五章 孕期PM_(2.5) 暴露与子代小鼠支气管肺发育不良 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 材料、试剂与仪器 |
| 5.2.2 PM_(2.5) 样品的收集 |
| 5.2.3 实验动物 |
| 5.2.4 PM_(2.5) 暴露 |
| 5.2.5 HE染色 |
| 5.2.6 肺组织形态学测量 |
| 5.2.7 免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF) |
| 5.2.8 TEM观察 |
| 5.2.9 Western blot分析 |
| 5.2.10 RT-PCR分析 |
| 5.2.11 肺功能检测 |
| 5.2.12 组织中重金属含量测定 |
| 5.2.13 数据统计分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 PM_(2.5) 暴露直接或间接影响胎儿发育 |
| 5.3.2 孕期PM_(2.5) 暴露和子鼠出生体重 |
| 5.3.3 孕期PM_(2.5) 暴露和子鼠肺泡化 |
| 5.3.4 孕期PM_(2.5) 暴露和子鼠肺组织血管生成 |
| 5.3.5 孕期PM_(2.5) 暴露和子鼠气道分泌功能 |
| 5.3.6 孕期PM_(2.5) 暴露和子鼠气道炎性 |
| 5.3.7 孕期PM_(2.5) 暴露和子鼠肺功能 |
| 5.4 讨论与结论 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 缩略词 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 参与科研项目 |
| 致谢 |
| 个人简况及联系方式 |
（7）新型免疫屏蔽Alg/PEI水凝胶材料的制备及其用于胰岛移植领域的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 细胞移植(Cell transplantation) |
| 1.1.1 细胞移植概述 |
| 1.1.2 细胞治疗的应用 |
| 1.1.3 细胞移植存在的问题 |
| 1.2 胰岛移植 |
| 1.2.1 糖尿病 |
| 1.2.2 传统治疗方法及存在问题 |
| 1.2.3 胰岛包埋技术 |
| 1.3 海藻酸钠在胰岛移植领域的研究进展 |
| 1.4 免疫躲避材料 |
| 1.4.1 生物粘附及异物反应 |
| 1.4.2 两性离子材料 |
| 1.5 本文主要研究内容 |
| 第2章 二价离子对海藻酸盐水凝胶抗生物粘附性质影响的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验试剂与材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 海藻酸盐水凝胶的制备 |
| 2.3.2 水凝胶表征 |
| 2.3.3 蛋白吸附测试 |
| 2.3.4 细菌粘附测试 |
| 2.3.5 动物实验 |
| 2.3.6 组织学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 含水量 |
| 2.4.2 机械性能测试 |
| 2.4.3 抗蛋白吸附能力测试 |
| 2.4.4 抗细菌粘附性质测试 |
| 2.4.5 组织学分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 电荷平衡的抗生物粘附聚电解质水凝胶的制备与表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验试剂与材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 海藻酸钠-聚乙烯亚胺(Alg/PEI)水凝胶的制备 |
| 3.3.2 Zeta电位测试 |
| 3.3.3 Alg/PEI水凝胶的基本表征 |
| 3.3.4 蛋白粘附测试 |
| 3.3.5 细胞毒性测试 |
| 3.3.6 细胞粘附测试 |
| 3.3.7 细菌粘附测试 |
| 3.3.8 血液相容性测试 |
| 3.3.9 小鼠皮下埋植 |
| 3.3.10 组织学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 Alg/PEI聚电解质水凝胶制备原理 |
| 3.4.2 Alg/PEI聚电解质水凝胶的基本表征 |
| 3.4.3 蛋白吸附测试 |
| 3.4.4 细胞粘附测试 |
| 3.4.5 血液相容性 |
| 3.4.6 细菌粘附测试 |
| 3.4.7 体内抗免疫反应评价 |
| 3.4.8 免疫组化分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 负载胰岛的Alg/PEI水凝胶颗粒用于1型糖尿病小鼠移植治疗的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验试剂与材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 胰岛分离及纯化 |
| 4.3.2 胰岛纯化后鉴定 |
| 4.3.3 水凝胶体内移植 |
| 4.3.4 胰岛包埋 |
| 4.3.5 胰岛体外活性检测 |
| 4.3.6 葡萄糖刺激胰岛素分泌功能测试(GSIS) |
| 4.3.7 胰岛移植及血糖含量监测 |
| 4.3.8 腹腔葡萄糖耐受测试(IPGTT) |
| 4.3.9 组织学及免疫学分析 |
| 4.3.10 数据分析方法 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 Alg/PEI水凝胶的体内相容性 |
| 4.4.2 胰岛在凝胶中的活性及功能检测 |
| 4.4.3 胰岛移植后的治疗效果 |
| 4.4.4 胰岛移植长期功能测试 |
| 4.4.5 组织学及免疫学分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 负载胰岛的促血管化抗生物粘附水凝胶微球用于治疗1型糖尿病小鼠的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.2.1 实验试剂与材料 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 负载肝素Alg/PEI水凝胶微球的制备 |
| 5.3.2 蛋白吸附测试 |
| 5.3.3 细菌粘附测试 |
| 5.3.4 血液相容性 |
| 5.3.5 包埋细胞存活率 |
| 5.3.6 肝素释放 |
| 5.3.7 大鼠胰岛提取 |
| 5.3.8 胰岛包埋 |
| 5.3.9 肝素Alg/PEI电中性水凝胶微球皮下移植 |
| 5.3.10 胰岛皮下移植及血糖含量监测 |
| 5.3.11 组织学分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 Alg/PEI水凝胶微球形貌及蛋白吸附测试 |
| 5.4.2 细胞相容性 |
| 5.4.3 细菌粘附测试 |
| 5.4.4 血液相容性 |
| 5.4.5 负载肝素的水凝胶微球形貌 |
| 5.4.6 体外肝素释放测试 |
| 5.4.7 快速血管化及免疫排斥反应 |
| 5.4.8 血糖调控 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 本文主要创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 致谢 |
（8）生物复合物滑膜化修饰联合脱细胞化肌腱支架再生构建组织工程肌腱的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 脱细胞化肌腱支架的构建和组织工程种子细胞的获取 |
| 一、滑膜内肌腱的获取 |
| (一) 实验材料与仪器 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验材料和仪器 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 手术过程 |
| 2. 表面滑动阻力测试 |
| 3. 组织学分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 滑膜内肌腱的手术取材 |
| 2. 肌腱样品的组织学观察 |
| 3. 肌腱样品表面滑动阻力测试 |
| (四) 结论 |
| 二、脱细胞化肌腱支架的构建 |
| (一) 实验材料和仪器 |
| 1. 主要试剂 |
| 2. 实验仪器 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 滑膜内肌腱脱细胞化处理 |
| 2. 脱细胞化前后DNA含量测定 |
| 3. 扫描电子显微镜观察 |
| 4. 表面滑动阻力测试方法同前 |
| 5. 组织学观察方法同前 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 大体观察及测量 |
| 2. DNA含量测定 |
| 3. 组织学观察 |
| 4. 表面滑动阻力测试 |
| 5. 扫描电子显微镜观察 |
| (四) 结论 |
| 三、种子细胞的获取和鉴定及肌腱支架微环境对其诱导分化作用 |
| (一) 犬源性骨髓间充质干细胞的分离培养、表型鉴定和分化全能性 |
| 1. 实验材料和仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| (二) 肌腱支架微环境诱导种子细胞成腱分化 |
| 1. 实验材料和仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 四、小结 |
| 五、讨论 |
| 六、参考文献 |
| 第二部分 脱细胞化异体滑膜内肌腱支架结构重塑及功能优化的作用和机制研究 |
| 一、脱细胞化滑膜内肌腱支架的表面修饰 |
| (一) 实验材料和仪器 |
| 1. 主要试剂 |
| 2. 实验仪器 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 滑膜内肌腱的获取: 同第一部分 |
| 2. 关节液获取(Synovial Fluid,SF) |
| 3. 主要试剂配置 |
| 4. 滑动阻力测试(Measurement of Glinding Resistance) |
| 5. 扫描电子显微镜检测 |
| 6. 数据分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 滑动阻力测试 |
| 2. 扫描电镜结果 |
| 二、种子细胞种植及循环机械牵拉对脱细胞肌腱支架结构重塑的作用 |
| (一) 实验材料和仪器 |
| 1. 主要试剂 |
| 2. 实验仪器 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 肌腱支架侧孔切割及种子细胞的种植 |
| 2. 肌腱组织工程生物反应器构建 |
| 3. 肌腱支架复合物的三维培养及循环机械牵拉 |
| 4. 细胞活性和形态测定 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 细胞活性 |
| 2. 组织学分析 |
| 3. 实时荧光定量PCR分析 |
| 三、循环机械牵拉促进再细胞化肌腱支架结构重塑的机制初探 |
| (一) 实验材料和仪器 |
| 1. 主要试剂同前 |
| 2. 实验仪器同前 |
| (二) 实验方法 |
| 3. 实时荧光定量PCR分析 |
| 4. 肌腱支架复合物GJA1阻断 |
| 5.组织学分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 循环机械牵拉对种子细胞缝隙连接相关基因及ECM组分胶原蛋白表达的影响 |
| 2. GJA1特异性阻断剂对种子细胞分化及再细胞肌腱支架ECM胶原形成的影响 |
| 3. GJA1特异性阻断剂对再细胞肌腱支架结构的影响 |
| 四、小结 |
| 五、讨论 |
| 六、参考文献 |
| 第三部分 组织工程学滑膜内肌腱支架在指深屈肌腱重建中的应用 |
| 一、指深屈肌腱二次断裂模型建立和自体种子细胞的获取 |
| (一) 实验材料和仪器 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验材料和仪器 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验仪器 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 术前准备 |
| 2. 麻醉、消毒、铺巾 |
| 3. 手术过程 |
| 4. 术后观察 |
| 5. 种子细胞的获取 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 临床观察 |
| 2. 修复评估 |
| 二、生物复合物滑膜化修饰的脱细胞化异体滑膜内肌腱支架用于指深屈肌腱重建 |
| (一) 实验材料和仪器 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验仪器 |
| (二) 实验方法 |
| 1. 滑膜化异体脱细胞化肌腱支架术前准备 |
| 2. 麻醉,消毒,铺巾 |
| 3. 手术过程 |
| 4. 术后处理及康复 |
| 5. 关节活动度测试(Joint Motion&Normalized Work of Flexion) |
| 6. 组织粘连评分(Adhesion Score) |
| 7. 修复大体观察 |
| 8. 摩擦力测试(Gliding Resistance) |
| 9. 近端修复牵拉测试(Proximal Repair Pull-Out Test) |
| 10. 远端修复拉断测试(Distal Repair Failure Test) |
| 11. 细胞活性检测 |
| 12. 组织学分析 |
| 13. 数据分析 |
| (三) 实验结果 |
| 1. 临床观察及术后康复 |
| 2. 关节活动度测试 |
| 3. 大体观察和组织粘连评分 |
| 4. 表面滑动阻力测试 |
| 5. 近端修复牵拉测试和远端修复拉断测试 |
| 6. 细胞活性检测 |
| 7. 组织学评估 |
| 三、小结 |
| 四、讨论 |
| 五、参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 组织工程应用于肌腱损伤修复 |
| 1. 肌腱的生理与功能 |
| 2. 肌腱的损伤和修复 |
| 3. 生物支架材料的概述及现状 |
| 3.1 胶原 |
| 3.2 蚕丝 |
| 3.3 生物可降解的合成聚合物 |
| 4. 肌腱天然支架结构和细胞外基质的应用 |
| 4.1 脱细胞化 |
| 4.2 脱细胞化效果的验证 |
| 5. 间充质干细胞作为种子细胞的应用 |
| 5.1 间充质干细胞的特性 |
| 5.2 骨髓间充质干细胞(BMSCs) |
| 5.3 脂肪间充质干细胞(AD-MSCs) |
| 5.4 滑膜间充质干细胞 |
| 6. 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间成果 |
| 一. 已发表论文 |
| 二. 参加学术会议 |
| 三. 在校期间获得荣誉 |
| 致谢 |
（9）环黄芪醇联合IL-7和IL-15对人脐带血T细胞体外扩增影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 技术路线 |
| 第一部分:人原代T细胞培养条件优化实验 |
| 1.T细胞活化条件优化 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 2.细胞因子诱导培养人原代T细胞优化实验 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3.未活化人原代T细胞的冻存条件优化 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第一部分 总结 |
| 第二部分 :环黄芪醇联合IL-7和IL-15 对人脐带血T细胞体外扩增的影响.. |
| 1.材料 |
| 1.1 细胞来源 |
| 1.2 实验材料与相关试剂 |
| 1.3 CAG试剂配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验分组与方法 |
| 2.2 检测指标与方法 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 不同浓度CAG联合IL-7和IL-15促T细胞扩增 |
| 3.2 不同浓度CAG联合IL-7和IL-15 促进T细胞扩增中维持较高TSCM比例 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 总结 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1:文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录2:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（10）脐带血造血干细胞的分离与贮藏工艺过程研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 造血干细胞概述 |
| 1.2 造血干细胞移植 |
| 1.2.1 定义 |
| 1.2.2 移植的适应症 |
| 1.2.3 造血干细胞移植过程 |
| 1.3 脐带血概述 |
| 1.3.1 脐带血研究的意义 |
| 1.3.2 脐带血储存 |
| 1.4 脐带血干细胞 |
| 1.4.1 脐带血干细胞特征 |
| 1.4.2 脐带血干细胞分离工艺 |
| 1.4.3 脐带血干细胞储存 |
| 1.4.4 脐带血干细胞移植的特点 |
| 1.5 本论文研究的内容、目的与意义 |
| 第2章 脐带血采集量与单个核细胞数的关系 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料和仪器 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 本章小结 |
| 第3章 不同分离方法对造血干细胞分离效果的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料和仪器 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 不同分离方法检测结果 |
| 3.2.2 6%羟乙基淀粉密度梯度离心法工艺优化 |
| 3.3 本章小结 |
| 第4章 脐带血造血干细胞的冻存工艺研究 |
| 4.1 常规慢速冻存工艺研究 |
| 4.1.1 材料与方法 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 脐带血造血干细胞分离与分析 |
| 4.2.2 降温速率的优化结果 |
| 4.2.3 玻璃化冻存方案研究结果 |
| 4.3 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、人体脐带血冷冻后仍新鲜（论文参考文献）
- [1]济南市居民通过膳食摄入短、中链氯化石蜡的健康风险评估[D]. 方昕鑫. 山东大学, 2021(12)
- [2]人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）对小鼠深Ⅱ度皮肤烫伤的治疗作用及其机制研究[D]. 李婧嫄. 南昌大学, 2020(01)
- [3]核酸适体在无创产前诊断应用中的研究[D]. 彭波. 湖南大学, 2020
- [4]Bcl-xL基因修饰人脐带血干细胞移植修复兔关节软骨损伤的实验研究[D]. 潘政军. 安徽医科大学, 2019(07)
- [5]AABB关于细胞治疗产品冷冻保存技术分析[J]. 马怡然,郝一文. 临床血液学杂志, 2019(06)
- [6]PM2.5吸入暴露诱导肺损伤及其分子机制[D]. 姬晓彤. 山西大学, 2019
- [7]新型免疫屏蔽Alg/PEI水凝胶材料的制备及其用于胰岛移植领域的研究[D]. 张嘉敏. 天津大学, 2019(06)
- [8]生物复合物滑膜化修饰联合脱细胞化肌腱支架再生构建组织工程肌腱的研究[D]. 林苏滨. 苏州大学, 2019(08)
- [9]环黄芪醇联合IL-7和IL-15对人脐带血T细胞体外扩增影响的实验研究[D]. 郑武燕. 成都中医药大学, 2019(04)
- [10]脐带血造血干细胞的分离与贮藏工艺过程研究[D]. 葛俊男. 河北科技大学, 2019(02)